化學(xué)藥物雜質(zhì)研究進(jìn)展

岳悅，駱雪芳，鐘文英，侯雯

（1.中國藥科大學(xué)分析化學(xué)教研室，江蘇 南京 210009；2.南京卡文迪許生物工程技術(shù)有限公司，江蘇 南京 210033）

化學(xué)藥物雜質(zhì)研究進(jìn)展

岳悅1,2，駱雪芳1，鐘文英1*，侯雯2

（1.中國藥科大學(xué)分析化學(xué)教研室，江蘇 南京 210009；2.南京卡文迪許生物工程技術(shù)有限公司，江蘇 南京 210033）

藥物雜質(zhì)的分析和控制是用藥安全有效的基礎(chǔ)。從雜質(zhì)譜分析、雜質(zhì)檢測、雜質(zhì)限度的制定等方面綜述了近年來國內(nèi)外化學(xué)藥物雜質(zhì)研究進(jìn)展，旨在為化學(xué)藥物雜質(zhì)的研究提供有效思路和方法。

雜質(zhì)譜；雜質(zhì)檢測；雜質(zhì)限度；有關(guān)物質(zhì)；手性雜質(zhì)；遺傳毒性雜質(zhì)

藥物研發(fā)過程中，雜質(zhì)的控制是藥品質(zhì)量研究的關(guān)鍵問題。任何影響藥物純度的物質(zhì)被稱為雜質(zhì)?！半s質(zhì)譜”是藥物雜質(zhì)控制的眼睛，能夠“看見”所有雜質(zhì)。與藥物雜質(zhì)控制的前2個階段“純度控制”和“限度控制”相比，雜質(zhì)譜的質(zhì)控策略是根據(jù)藥物中的每一個雜質(zhì)的活性逐一制定質(zhì)量控制限度，因此更加嚴(yán)格規(guī)范[1]?；瘜W(xué)藥物雜質(zhì)檢測方面，有關(guān)物質(zhì)、手性雜質(zhì)和遺傳毒性雜質(zhì)的分析是藥物雜質(zhì)研究中關(guān)注的重點(diǎn)。隨著雜質(zhì)安全性評價和風(fēng)險控制的要求越來越高，雜質(zhì)限度的合理制定也是一項(xiàng)重要研究內(nèi)容。近5年來國內(nèi)針對化學(xué)藥物雜質(zhì)的研究綜述僅有2篇[1-2]，其中1篇側(cè)重于有色雜質(zhì)和生化藥品雜質(zhì)分析[2]。本文結(jié)合2015年版《中國藥典》和相關(guān)指導(dǎo)原則，依據(jù)化學(xué)藥物雜質(zhì)研究思路，從雜質(zhì)譜分析、雜質(zhì)檢測、雜質(zhì)限度的制定3個方面，綜述了近年來國內(nèi)外化學(xué)藥物雜質(zhì)的研究進(jìn)展。

1 雜質(zhì)譜分析

雜質(zhì)譜分析主要包括2個方面。其一，依據(jù)藥物結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，分析藥物合成工藝、制劑工藝中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)。歐洲藥品管理局（EMA）建議“應(yīng)基于扎實(shí)的科學(xué)評價，全面考慮參與合成的化學(xué)反應(yīng)、原輔料中可能帶入新原料藥的雜質(zhì)和可能的降解產(chǎn)物，確定最有可能在新藥的合成、純化和貯存期間出現(xiàn)的實(shí)際和潛在雜質(zhì)”[3]。其二，考察藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)和強(qiáng)制降解試驗(yàn)產(chǎn)生的雜質(zhì)。藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)檢查項(xiàng)目應(yīng)包含經(jīng)研究和穩(wěn)定性考察檢出的雜質(zhì)，2015年版《化學(xué)藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》明確了不同保存溫度下的擬加速和長期穩(wěn)定性試驗(yàn)方法，并在有效期的基礎(chǔ)上提出了復(fù)檢期。參照《中國藥典》和《化學(xué)藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，研究可能的降解產(chǎn)物和降解途徑。Sajan等[4]對卡維地洛進(jìn)行強(qiáng)制降解試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，藥物在氧化破壞的條件下會形成雜質(zhì)卡維羥胺。依澤替米貝在高溫、酸、堿、水解、氧化條件下會產(chǎn)生主要降解產(chǎn)物依澤替米貝四氫吡喃雜質(zhì)[5]。強(qiáng)制降解試驗(yàn)提供了原料的降解途徑，也能夠?yàn)橹苿┨幏胶凸に嚨暮Y選提供一定的依據(jù)。通過穩(wěn)定性試驗(yàn)和強(qiáng)制降解試驗(yàn)可以進(jìn)一步分析雜質(zhì)的來源和影響因素，為雜質(zhì)的質(zhì)量控制提供參考。

2 雜質(zhì)檢測

2.1 一般雜質(zhì)的檢測

氣相色譜法（GC）適用于易揮發(fā)且熱穩(wěn)定性的物質(zhì)，一般用于殘留溶劑的檢測[6]。無機(jī)雜質(zhì)可能來源于原料藥、輔料或制劑的生產(chǎn)過程和環(huán)境污染物中。2015年版《中國藥典》加強(qiáng)了包括催化劑在內(nèi)的無機(jī)雜質(zhì)檢測方法的研究與修訂，提高了方法的準(zhǔn)確性。因在藥物生產(chǎn)中經(jīng)常會遇到鉛，且鉛易積蓄中毒，故藥物質(zhì)量控制中經(jīng)常以鉛作為重金屬的代表，用其限量表示重金屬限度。經(jīng)典的重金屬限度檢查法存在一定的局限性，已在2010年版《中國藥典》（一部）收錄，且在2015年版《中國藥典》第二、三部新增的電感耦合等離子體發(fā)射光譜法（ICP-OES）、電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）[7]、高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法（HPLC-ICP-MS）可以同時定量檢測多種金屬元素的含量[8]。不同化學(xué)形態(tài)的金屬雜質(zhì)在毒理學(xué)和生物學(xué)上的性質(zhì)可能有很大差異，HPLC-ICP-MS法對分析極低含量、不同形態(tài)的As和Hg有著靈敏度高、易于操作的優(yōu)勢。

2.2 特殊雜質(zhì)的檢測

2.2.1 有關(guān)物質(zhì)在雜質(zhì)譜分析的基礎(chǔ)上，有針對性地選擇專屬靈敏的分析方法，以確保化學(xué)藥物雜質(zhì)的有效檢出。在有關(guān)物質(zhì)檢查方面，2015年版《中國藥典》加強(qiáng)了對化學(xué)藥物雜質(zhì)定性定量測定方法的研究，增加了正文所涉及的448個雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式等分子信息，實(shí)現(xiàn)對已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的區(qū)別控制，進(jìn)一步提高有關(guān)物質(zhì)測定項(xiàng)目的科學(xué)性和合理性[9]。雜質(zhì)檢測的方法學(xué)驗(yàn)證主要包括專屬性、檢測限、溶液穩(wěn)定性、耐用性等定性試驗(yàn)以及線性、準(zhǔn)確度、精密度等定量試驗(yàn)，從不同角度、層面驗(yàn)證分析方法的可行性和雜質(zhì)檢出的可靠性[10]。

近年來，色譜法在各國藥典中得到了廣泛應(yīng)用[11]，其中有關(guān)物質(zhì)分析方法的主流還屬高效液相色譜技術(shù)[12]。Wang等[13]采用HPLC法定量測定艾普拉唑片有關(guān)物質(zhì)，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。HPLC測定有關(guān)物質(zhì)的定量方法主要有雜質(zhì)對照品法(外標(biāo)法)、加校正因子和不加校正因子的主成分自身對照法以及面積歸一化法。朱靜毅等[14]建立了HPLC加校正因子的主成分自身對照法測定非洛地平及其片劑中3個有關(guān)物質(zhì)的含量，其校正因子分別為1.96、0.96和1.06，方法學(xué)驗(yàn)證表明所建立的方法符合要求，加校正因子的主成分自身對照法與雜質(zhì)對照品法測定的結(jié)果無顯著性差異。

其他新型色譜分析方法如超高效液相色譜UPLC也具有其獨(dú)特的優(yōu)勢。UPLC在《美國藥典》中已得到應(yīng)用[15]，2015年版《中國藥典》中雖未將其作為新液相色譜方法收載，但也積極推動了UPLC在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定中的應(yīng)用。研究者采用UPLC法定量測定馬拉韋羅有關(guān)物質(zhì)，在BEH Shield RP-18（100 mm× 2.1 mm, 1.7 μm）色譜柱上進(jìn)行分離，流速0.4 mL·min-1，結(jié)果在12 min內(nèi)馬拉韋羅與6個雜質(zhì)達(dá)到基線分離，分離度均大于3.0[16]。與HPLC相比，UPLC流速低，流動相用量少，具有更高的分離度和更快的分析速度。由于紫外檢測靈敏度低而無法實(shí)現(xiàn)對低濃度雜質(zhì)的準(zhǔn)確定量，Yamamoto等[17]采用新型二維高效液相色譜（2D-HPLC）技術(shù)增強(qiáng)對樣品的分離和富集，提高對低濃度雜質(zhì)的檢測能力。為獲得雜質(zhì)純度高的單一雜質(zhì)進(jìn)行檢測，利用制備型液相色譜技術(shù)可以克服分析型液相色譜雜質(zhì)制備困難、耗時的問題，加快高純度雜質(zhì)的獲取。Liu等[18]用制備型HPLC分離得到普拉雷格的一個新工藝雜質(zhì)，對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定推導(dǎo)出該雜質(zhì)可能的形成過程。

目前，色譜聯(lián)用技術(shù)在藥物雜質(zhì)檢測方面有很大的發(fā)展?jié)摿?。人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）明確規(guī)定：每日最大劑量不超過2 g的原料藥中含量大于0.1%的有關(guān)物質(zhì)須鑒定其結(jié)構(gòu)[19]。將色譜法與具有定性能力的光譜法相結(jié)合，不僅具有較高靈敏度和選擇性，還能夠給出豐富的結(jié)構(gòu)信息，提高其結(jié)構(gòu)鑒定能力。

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）技術(shù)因其卓越的靈敏度、高選擇性和快速的特點(diǎn)，避免了樣品復(fù)雜的前處理過程，已成為藥物中微量雜質(zhì)分析和結(jié)構(gòu)鑒定的首選。主要分為高分辨率質(zhì)譜(HRMS)、多級質(zhì)譜(MSn)、氫/氘轉(zhuǎn)換質(zhì)譜(HDE-MS) 3 類。Yuan等[20]首次采用LC-MS法對硫酸依替米星進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)分析，結(jié)果檢測出26個雜質(zhì)，其中14個雜質(zhì)是新檢測出的雜質(zhì)，根據(jù)質(zhì)譜信息和合成途徑進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，起始原料、中間體、副產(chǎn)物和降解產(chǎn)物是這些有關(guān)物質(zhì)的主要來源。Kalariya等[21]采用熔融核Fused-Core C18(100 mm × 2.1 mm, 2.6 μm) 色譜柱快速高效地分離甲磺酸依普羅沙坦的6個雜質(zhì)，經(jīng)LC-MS進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。Shivakumar等[22]采用四極桿-飛行時間串聯(lián)液質(zhì)聯(lián)用（LC/Q-TOF）技術(shù)對環(huán)磷酰胺強(qiáng)制降解產(chǎn)物進(jìn)行定性定量分析。該法提高了雜質(zhì)鑒定的效率，是有關(guān)物質(zhì)檢查和結(jié)構(gòu)鑒定的有力工具之一。

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）技術(shù)結(jié)合了氣相色譜高效與質(zhì)譜結(jié)構(gòu)鑒定的優(yōu)勢，適用于定性、定量分析熱穩(wěn)定、易揮發(fā)的多組分混合物中有機(jī)揮發(fā)性雜質(zhì)。研究者采用GC-MS檢測抗組胺藥茶苯海明（DMH）的6個有關(guān)物質(zhì)；樣品無需衍生化，經(jīng)三氟丙基甲基聚硅氧烷（Rtx-200）毛細(xì)管氣相色譜柱分離，GC-MS檢測；各有關(guān)物質(zhì)在不到15 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)良好分離。該方法已成功應(yīng)用于DMH片劑的質(zhì)量研究，回收率大于96.80%[23]。Belal等[24]采用GC-MS 法測定抗心肌缺血藥鹽酸曲美他嗪（TMZ）的2個有關(guān)物質(zhì)，并應(yīng)用于市售TMZ藥物制劑的雜質(zhì)檢測。

核磁共振（NMR）技術(shù)能夠?qū)ξ粗衔锾峁┯嘘P(guān)鍵合和立體化學(xué)的特定信息，并對未經(jīng)分離提取的復(fù)雜樣品提供定性定量信息。與LC聯(lián)用，更加強(qiáng)了NMR對有關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)解析能力，應(yīng)用于藥品質(zhì)量評估[25]。高效液相色譜-固相微萃取-核磁共振聯(lián)用（LC/SPE/NMR）儀是目前應(yīng)用最先進(jìn)LC-NMR技術(shù)的儀器[26]，借助SPE，為NMR在較低強(qiáng)度磁場的應(yīng)用打開了新局面。Narayanam等[27]采用LC-NMR技術(shù)鑒定出西拉普利水解雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)，其氧化降解雜質(zhì)最終則通過制備型HPLC分離，并采用一維核磁（1H、13C、DEPT）和二維核磁（COSY、TOCSY、HETCOR和HMBC）法確證了結(jié)構(gòu)。

毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜聯(lián)用（CE-MS）技術(shù)將CE綠色環(huán)保、分析成本低、所需樣品量少、樣品前處理簡單的優(yōu)點(diǎn)與MS高靈敏度、高專屬性和定性歸屬能力相結(jié)合，在極性和離子化合物的分析方面有著獨(dú)特優(yōu)勢，成為LC-MS和 GC-MS的重要補(bǔ)充。Klepárn í k等[28]詳細(xì)綜述了CE-MS的各種方法和應(yīng)用，其中藥物雜質(zhì)分析是重要應(yīng)用方面。Taichrib等[29]采用毛細(xì)管電泳-四極桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜（CE/Q-TOF）技術(shù)檢測替可克肽中的雜質(zhì)，通過精確的質(zhì)量和碎片離子信息確證了其中3個雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)。

2.2.2 手性雜質(zhì)手性雜質(zhì)與藥物互為手性異構(gòu)體，兩者藥效和藥動學(xué)行為的差異會導(dǎo)致不同的藥理和毒理學(xué)作用，產(chǎn)生藥物不良反應(yīng)。因此手性雜質(zhì)的檢測也是質(zhì)量控制的重要內(nèi)容。對于手性雜質(zhì)的檢測廣泛采用手性色譜法和高效毛細(xì)管電泳法等[30]。

手性高效液相色譜法分為直接法和間接法，前者包括手性固定相法和手性流動相添加劑法，后者為手性試劑衍生化法。Sharp等[31]篩選了纖維素型、大環(huán)抗生素型和刷型手性柱分離新型心血管藥物evacetrapib及其對映體、非對映體及6個潛在雜質(zhì)，最終采用刷型Whelk-O 1手性柱進(jìn)行HPLC分離，異構(gòu)體雜質(zhì)首先出峰。該方法有效解決了在一個較短的分析時間內(nèi)所有化合物被洗脫分離，可應(yīng)用于evacetrapib原料藥對映體的檢測。Babu等[32]在分離阿格列汀中間體R-3-氨基哌啶（R-AMP）中的S-異構(gòu)體時，由于AMP沒有紫外生色團(tuán)，需要先對化合物進(jìn)行柱前衍生化，然后在手性Chiralpak AD-H色譜柱上進(jìn)行HPLC分離，兩對映體之間的分離度大于4.0。

CE和CE-MS法分離效率高、簡便快速、低消耗、分離模式多，在手性雜質(zhì)分離中具有很多優(yōu)勢。Qi等[33]采用CE法研究左旋氨氯地平原料藥的手性雜質(zhì)，以羧甲基β-環(huán)糊精（CM-β-CD）為手性選擇劑，并對背景電解液的pH、手性選擇劑濃度、緩沖液濃度、毛細(xì)管溫度和電壓幾個參數(shù)進(jìn)行了手性分離優(yōu)化。測定的手性雜質(zhì)R-氨氯地平含量為0.2%。所建立的方法中，LOD和LOQ分別為0.001和0.003 g·L-1。該法快速高效，進(jìn)一步應(yīng)用于左旋氨氯地平制劑中手性雜質(zhì)的檢測。Mikuma等[34]采用CE-MS檢測8種安非他命類精神藥物中甲基苯丙胺類手性雜質(zhì)。該研究首次采用了磺酸基團(tuán)經(jīng)化學(xué)修飾的毛細(xì)管，通過CE-MS/MS進(jìn)行雜質(zhì)分析。16個手性雜質(zhì)在60 min內(nèi)達(dá)到基線分離，并獲得它們精確的質(zhì)譜信息。

超臨界流體色譜（SFC）技術(shù)作為氣相色譜和液相色譜的有力補(bǔ)充，兼有二者優(yōu)點(diǎn)，其在手性藥物雜質(zhì)分析和天然高分子化合物制備中有著重要應(yīng)用。Marley等[35]采用SFC法檢查S-馬來酸噻嗎洛爾原料藥中R-馬來酸噻嗎洛爾雜質(zhì)。該法比非水毛細(xì)管電泳法（NACE）和《歐洲藥典》中公布的正相高效液相色譜法（NP-HPLC）分析速度快、消耗溶劑量小，顯示了SFC檢測手性雜質(zhì)的潛力。Li 等[36]開發(fā)了一種新型的SFC方法測定利福平中的4個雜質(zhì)，與傳統(tǒng)的反相液相色譜法（RPLC）相比，該法更加綠色、快速、高效。

2.2.3 遺傳毒性雜質(zhì)遺傳毒性雜質(zhì)在極低水平便能與DNA相互作用，具有很高的致癌致突變風(fēng)險。因此對遺傳毒性雜質(zhì)及潛在遺傳毒性雜質(zhì)（PGI）的研究極其重要。Reddy等[37]對化學(xué)藥物開發(fā)中經(jīng)常遇到不同結(jié)構(gòu)類型的遺傳毒性雜質(zhì)進(jìn)行分類和綜述，幫助研究者研究潛在遺傳毒性雜質(zhì)。遺傳毒性雜質(zhì)的限度遠(yuǎn)低于ICH Q3A、Q3B的限度水平，需要結(jié)合雜質(zhì)結(jié)構(gòu)特征，開發(fā)選擇性和靈敏度高的痕量檢測方法。一些遺傳毒性警示結(jié)構(gòu)如鹵代烷、磺酸酯和肼類缺乏紫外生色基團(tuán)，可以采用衍生化LC-UV等方法[38]。

GC-MS是揮發(fā)性遺傳毒性雜質(zhì)檢測不可或缺的工具。通常情況下，頂空氣相色譜和GC-MS是分析鹵化物、磺酸鹽和環(huán)氧化物的首選技術(shù)[39]。Gar cí a等[40]采用GC-MS法測定了氯哌斯汀芬地柞酸鹽中的烷基鹵化物遺傳毒性雜質(zhì)。Harigaya等[41]采用GC-MS法測定四氫呋喃和鹽酸在原料藥合成過程中生成的4-氯-1-丁醇，并對藥物臨床試驗(yàn)中該遺傳毒性雜質(zhì)進(jìn)行測定。LC-MS是藥物遺傳毒性雜質(zhì)定量分析的重要且有效方法之一。Ding等[42]采用丹酰衍生化的LC-MS/MS法對3種原料藥中遺傳毒性雜質(zhì)2-羥基吡啶-N-氧化物（HOPO）進(jìn)行定量測定。Guo等[43]采用LC-MS法系統(tǒng)測定了12種潛在的磺酸酯遺傳毒性雜質(zhì)，同時該課題組還比較了電噴霧電離（ESI）和大氣壓化學(xué)電離（APCI）2種電離方式，證明在檢測中APCI法優(yōu)于ESI法。研究人員發(fā)現(xiàn)在ESI條件下，會出現(xiàn)更多的加合離子與前體離子競爭，因而靈敏度和重現(xiàn)性較差；而在APCI條件下，雜質(zhì)能夠產(chǎn)生穩(wěn)定的前體離子[M-烷基]-，經(jīng)碰撞誘導(dǎo)解離(CID)作用更易產(chǎn)生產(chǎn)物離子[M-烷基-CH3]-和[M-烷基-SO2]-，在選擇性反應(yīng)監(jiān)測（SRM）模式下被檢測，并獲得良好的精密度和極低的檢測限度。也有研究者采用CE-MS法檢測藥物中潛在遺傳毒性雜質(zhì)鹵代烷。例如，van Wijk等[44]將藥物與烷化劑4-二甲基氨基吡啶（DMAP）或1-丁基-（吡啶-4-基）哌啶-4-羧酸乙酯（BPPC）衍生化，經(jīng)毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）分離，MS檢測鹵代烷。該法具有較高的專屬性和靈敏度，可以代替LC-MS法對遺傳毒性雜質(zhì)鹵代烷的檢測。

3 雜質(zhì)限度的制定

3.1 有關(guān)物質(zhì)限度制定方法

在ICH Q3A、Q3B[19,45]的指導(dǎo)原則中將雜質(zhì)限度定義為：在特定水平下單個雜質(zhì)或給定雜質(zhì)譜的生物學(xué)安全性資料的獲得和評價過程。該指導(dǎo)原則通過制定雜質(zhì)的報告、鑒定和認(rèn)證閾值監(jiān)管雜質(zhì)。有關(guān)物質(zhì)的控制一般包括每個明確的已知雜質(zhì)、每個明確的未知特定雜質(zhì)、任何非特定雜質(zhì)以及總雜質(zhì)。雜質(zhì)限度的確定首先要有充分的安全性依據(jù)，結(jié)合藥物工藝路線，綜合藥學(xué)、藥理毒理及臨床研究結(jié)果判定；其次，在排除為遺傳毒性雜質(zhì)的情況下，可綜合考慮生產(chǎn)的可行性和產(chǎn)品的穩(wěn)定性制定合理的雜質(zhì)限度[46]。雜質(zhì)限度應(yīng)考慮患者人群、每日劑量、給藥途徑、用藥持續(xù)時間等因素。對于仿制藥來說，有關(guān)物質(zhì)限度的確定可以參考原研藥上市標(biāo)準(zhǔn)、各國藥典和國家標(biāo)準(zhǔn)來制定雜質(zhì)合理限度，銜接上市藥物安全有效性信息[47]。

3.2 遺傳毒性雜質(zhì)限度制定方法

近年來，遺傳毒性雜質(zhì)限度控制的法規(guī)逐步健全，2006年EMA公布了遺傳毒性雜質(zhì)限度指南的最終版[48]，2008年底美國FDA發(fā)布了遺傳毒性雜質(zhì)指南草案[49]，以及由美國藥物研究和制造商協(xié)會（PhRMA）發(fā)布的PhRMA意見書[50]，這些指南均針對遺傳毒性雜質(zhì)的檢測、分類和風(fēng)險評估提供了指導(dǎo)性建議和技術(shù)要求。ICH于2014年7月15日正式發(fā)布了《基因毒性雜質(zhì)指南M7》[51]，為遺傳毒性雜質(zhì)的鑒別、分類、定量分析和控制提出了切實(shí)可行的依據(jù)和方法，彌補(bǔ)EMA及FDA關(guān)于遺傳毒性雜質(zhì)控制指南在某些方面存在的不確定性和分歧[52]。

ICH發(fā)布的《基因毒性雜質(zhì)指南M7》根據(jù)風(fēng)險級別將遺傳毒性雜質(zhì)分為5 個類別。首先對合成路線中的工藝雜質(zhì)、試劑和中間體等PGI進(jìn)行結(jié)構(gòu)評估，通過數(shù)據(jù)庫檢索其毒性數(shù)據(jù)及致癌可能性，鑒定警示結(jié)構(gòu)。除采用數(shù)據(jù)庫檢索外，還可采用（Q）SAR方法進(jìn)行預(yù)測，包括依據(jù)專家規(guī)則和統(tǒng)計學(xué)方式2個相互補(bǔ)充的（Q）SAR預(yù)測方法，然后對雜質(zhì)進(jìn)行分類控制，建立基于每日允許攝入量和毒理學(xué)關(guān)注閾值（threshold of toxicological concern，TTC）概念的雜質(zhì)限量標(biāo)準(zhǔn)。TTC可以通用于大部分藥物，作為默認(rèn)的可接受限度控制標(biāo)準(zhǔn)。分期TTC法列出了臨床試驗(yàn)中不同暴露時間推薦的TTC水平，暴露時間大于10年、1～10年、1～12個月和少于1個月的日攝入量接受限度分別為1.5、10、20 和120 μg·d-1。在確定潛在毒性雜質(zhì)是否為毒性雜質(zhì)時，還需要進(jìn)行體外細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)（Ames試驗(yàn)）。

有些強(qiáng)遺傳毒性致癌物質(zhì)如黃曲霉素類、N-亞硝基類、偶氮類化合物的可接受攝入量不適用于TTC法，這類化合物的風(fēng)險評估需要有特定化合物的毒性數(shù)據(jù)[53]。

4 展望

目前，化學(xué)藥物雜質(zhì)研究在雜質(zhì)前處理方法、雜質(zhì)快速高效分離、微量雜質(zhì)定性定量分析、色譜聯(lián)用技術(shù)等方面不斷發(fā)展。雜質(zhì)譜使得藥物雜質(zhì)的分析和控制思路更加明晰，依據(jù)雜質(zhì)譜信息，運(yùn)用不同原理的分析方法相互補(bǔ)充與驗(yàn)證，以確保雜質(zhì)的有效檢出。在評估雜質(zhì)安全性的基礎(chǔ)上，根據(jù)相關(guān)指導(dǎo)原則制定合理的雜質(zhì)限度。化學(xué)藥物雜質(zhì)研究是化藥質(zhì)量控制的重要方面，貫穿于整個藥物研究過程。相信隨著分析新技術(shù)的出現(xiàn)和應(yīng)用以及我國藥物質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)更加嚴(yán)格規(guī)范化，藥物雜質(zhì)研究必將更加透徹，藥物使用將更加安全有效。

[1]胡昌勤.化學(xué)藥品雜質(zhì)控制的現(xiàn)狀與展望[J].中國科學(xué)：化學(xué),2010, 40(6): 679-687.

[2]周怡.化學(xué)藥品標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)控制及其限度的建立[J].藥物生物技術(shù),2010, 17(2): 181-184.

[3]王萍, 徐彩虹, 陳仙, 等.原料藥中基因毒性雜質(zhì)控制的研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 2015, 32(1): 119-126.

[4]Sajan P G, Rohith T, Patil S, et al.Rapid, highly ef fi cient and stability indicating RP-UPLC method for the quantitative determination of potential impurities of carvedilol active pharmaceutical ingredient [J].Int J Pharm Pharm Sci, 2014, 6(10): 214-220.

[5]Luo Z, Deng Z, Liu Y, et al.Development and validation of a novel stability-indicating HPLC method for the quantitative determination of eleven related substances in ezetimibe drug substance and drug product[J].Talanta, 2015, 139: 67-74.

[6]Gad M, Zaazaa H, Amer S, et al.Static headspace gas chromatographic method for the determination of residual solvents in cephalosporins[J].RSC Adv, 2015, 5(22): 17150-17159.

[7]Timerbaev A R.Recent progress of ICP-MS in the development of metal-based drugs and diagnostic agents[J].J Anal At Spectrom, 2014,29(6): 1058-1072.

[8]胡向青, 郝福, 李志剛, 等.藥物中雜質(zhì)及有害物質(zhì)控制限度的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代藥物與臨床, 2014, 29(9): 953-964.

[9]劉云濤.《中國藥典》2015年版(二部)增修訂內(nèi)容亮點(diǎn)擷英[EB/OL] .(2015-07-22).http://www.cnpharm.com/xinwen/zdgz/2015/0722/92002.html.

[10]王麗琴, 趙喆, 王慧琛.藥品雜質(zhì)檢查研究進(jìn)展[J].天津藥學(xué),2013, 25(6): 59-61.

[11]石先哲, 李攻科, 梁振, 等.色譜研究最新進(jìn)展[J].化學(xué)通報, 2014,77(7): 720-730.

[12]Zaza S, Lucini S M, Sciascia F, et al.Recent advances in the separation and determination of impurities in pharmaceutical products[J].Instrum Sci Technol, 2015, 43: 182-196.

[13]Wang S, Zhang D, Wang Y, et al.Gradient high performance liquid chromatography method for simultaneous determination of ilaprazole and its related impurities in commercial tablets[J].Asian J Pharm Sci,2015, 10(2): 146-151.

[14]朱靜毅, 李靜, 聞刑毓, 等.校正因子法同時測定非洛地平及其片劑 中的 3 個雜質(zhì)[J].藥物分析雜志, 2014, 34(2): 281-286.

[15]U.S.Pharmacopeial Convention.The United States Pharmacopeia[M].34th ed.Rockville, MD: United Book Press Inc., 2011.

[16]Chilukuri M, Hussainreddy K, Narayanareddy P, et al.A Validated stability-indicating UPLC method for the determination of impurities in Maraviroc[J].J Chromatogr Sci, 2014, 52(7): 609-616.

[17]Yamamoto E, Niijima J, Asakawa N.Selective determination ofpotential impurities in an active pharmaceutical ingredient using HPLCSPE-HPLC[J].J Pharm Biomed Anal, 2013, 84: 41-47.

[18]Liu C, Yu Z, Wang F, et al.Isolation and structural elucidation of an unknown impurity in prasugrel by semi-preparative liquid chromatography[J].J Chromatogr Sci, 2015, 53(7): 1163-1168.

[19]ICH.Q3A(R2): Impurities in New Drug Substances[S].2006.

[20]Yuan Y, Zhang M, Fan X L, et al.Impurity pro fi ling of etimicin sulfate by liquid chromatography ion-trap mass spectrometry[J].J Pharm Biomed Anal, 2012, 70: 212-223.

[21]Kalariya P D, Kumar Talluri M V N, Gaitonde V D, et al.Quality by design: A systematic and rapid liquid chromatography and mass spectrometry method for eprosartanmesylate and its related impurities using a super fi cially porous particle column[J].J Sep Sci, 2014, 37(16):2160-2171.

[22]Shivakumar G, Dwivedi J.Identification of degradation products in cyclophosphamide API by LC/Q-TOF mass spectrometry[J].J Liq Chromatogr Relat Technol, 2015, 38(2): 190-195.

[23]Belal T S, Abdel-Hay K M, Clark C R.Selective determination of dimenhydrinate in presence of six of its related substances and potential impurities using a direct GC/MS method[J].J Adv Res, 2015.Epub ahead of print.doi:10.1016/j.jare.2015.01.010.

[24]Belal T S, Awad T, Clark C R.Stability-indicating determination of trimetazidine dihydrochloride in the presence of two of its related substances using a direct GC/MS method[J].J Aoac Int, 2014, 97(6):1514-1518.

[25]Maggio R M, Calvo N L, Vignaduzzo S E, et al.Pharmaceutical impurities and degradation products: Uses and applications of NMR techniques[J].J Pharm Biomed Anal, 2014, 101: 102-122.

[26]Sturm S, Seger C.Liquid chromatography–nuclear magnetic resonance coupling as alternative to liquid chromatography–mass spectrometry hyphenations: Curious option or powerful and complementary routine tool? [J].J Chromatogr A, 2012, 1259: 50-61.

[27]Narayanam M, Sahu A, Singh S.Use of LC–MS/TOF, LC–MSn, NMR and LC–NMR in characterization of stress degradation products:Application to cilazapril[J].J Pharm Biomed Anal, 2015, 111: 190-203.

[28]Klepárník K.Recent advances in combination of capillary electrophoresis with mass spectrometry: Methodology and theory[J].Electrophoresis, 2015, 36(1): 159-178.

[29]Taichrib A, Scriba G K E, Neusü? C.Identi fi cation and characterization of impurities of tetracosactide by capillary electrophoresis and liquid chromatography coupled to time-of-flight mass spectrometry[J].Anal Bioanal Chem, 2011, 401(4): 1365-1375.

[30]國家藥典委員會.《中華人民共和國藥典》通則: 9102 藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則[S].2015.

[31]Sharp V S, Stafford J D, Forbes R A, et al.Stereoselective highperformance liquid chromatography and analytical method characterization of evacetrapib using a brush-type chiral stationary phase: A challenging isomeric separation requiring a unique eluent system[J].J Chromatogr A, 2014, 1363: 183-190.

[32]Babu C V R, Vuyyuru N R, Reddy K P, et al.Estimation of enantiomeric impurity in piperidin-3-amine by chiral HPLC with precolumn derivatization[J].Chirality, 2014, 26(12): 775-779.

[33]Qi Y, Zhang X.Determination of enantiomeric impurity of levamlodipine besylate bulk drug by capillary electrophoresis using carboxymethyl-β-cyclodextrin[J].Cell Biochem Biophys, 2014, 70(3):1633-1637.

[34]Mikuma T, Iwata Y T, Miyaguchi H, et al.The use of a sulfonated capillary on chiral capillary electrophoresis/mass spectrometry of amphetamine-type stimulants for methamphetamine impurity pro fi ling[J].Forensic Sci Int, 2015, 249: 59-65.

[35]Marley A, Connolly D.Determination of (R)-timolol in (S)-timolol maleate active pharmaceutical ingredient: Validation of a new supercritical fl uid chromatography method with an established normal phase liquid chromatography method[J].J Chromatogr A, 2014, 1325:213-220.

[36]Li W, Wang J, Yan Z Y.Development of a sensitive and rapid method for rifampicin impurity analysis using supercritical fl uid chromatography[J].J Pharm Biomed Anal, 2015, 114: 341-347.

[37]Reddy A V B, Jaafar J, Umar K, et al.Identi fi cation, control strategies,and analytical approaches for the determination of potential genotoxic impurities in pharmaceuticals: A comprehensive review[J].J Sep Sci,2015, 38(5): 764-779.

[38]Archana K, Kelly Z, Larry W.Genotoxic impurities analysis and control in pharmaceutical development: 44th Western Regional Meeting of the American Chemical Society, Santa Clara, CA, October 3-6, 2013[C].[S.l.]:[s.n.],c2013.

[39]Wollein U, Schramek N.Simultaneous determination of alkyl mesilates and alkyl besilates in finished drug products by direct injection GC/MS[J].Eur J Pharm Sci, 2012, 45(1): 201-204.

[40]García A, Rupérez F J, Ceppa F, et al.Development of chromatographic methods for the determination of genotoxic impurities in cloperastine fendizoate[J].J Pharm Biomed Anal, 2012, 61: 230-236.

[41]Harigaya K, Yamada H, Yaku K, et al.Development and validation of a sensitive GC-MS method for the determination of alkylating agent,4-chloro-1-butanol, in active pharmaceutical ingredients[J].Chem Pharm Bull, 2014, 62(4): 395-398.

[42]Ding W, Huang Y, Miller S A, et al.Trace level liquid chromatography tandem mass spectrometry quantification of the mutagenic impurity 2-hydroxypyridine N-oxide as its dansyl derivative[J].J Chromatogr A,2015, 1386: 47-52.

[43]Guo T, Shi Y, Zheng L, et al.Rapid and simultaneous determination of sulfonate ester genotoxic impurities in drug substance by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry: Comparison of different ionization modes[J].J Chromatogr A, 2014, 1355: 73-79.

[44]van Wijk A M, Niederl?nder H A G, van Ogten M D, et al.Sensitive CE–MS analysis of potentially genotoxic alkylation compounds using derivatization and electrokinetic injection[J].Anal Chim Acta, 2015,874: 75-83.

[45]ICH.Q3B(R2): Impurities in New Drug Products [S].2006.

[46]何伍,王海學(xué).淺談藥物雜質(zhì)限度的制訂方法[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志, 2009, 40(10): 787-790.

[47]張哲峰, 魏農(nóng)農(nóng), 魯爽.淺談雜質(zhì)限度制定的一般原則[J].中國新藥雜志, 2008, 17(16): 1457-1460.

[48]EMEA.Guideline on the Limits of Geotoxic Impurities[S].2006.

[49]FDA.Guidance for Industry, Genotoxic and Carcinogenic Impurities in Drug Substances and Products: Recommended Approaches [S].2008.

[50]Muller L, Mauthe R J, Riley C M, et al.A rationale for determination,testing and controlling speci fi c impurities in pharmaceuticals that posses potential for genotoxicity[J].Regul Toxicol Pharmacol, 2006, 44(3):198-211.

[51]ICH.Draft Consensus Guideline Assessment and Control of DNA Reactive Mutagenic Impurities in Pharmaceuticals to Limit Potential Carcinogenic Risk(M7) [S].2014.

[52]張慧敏, 林建群, 馮康彪, 等.藥品中遺傳毒性雜質(zhì)的評估和控制[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 2014, 31(9): 1160-1166.

[53]Galloway S M, Reddy M V, Mc Gettigan K, et al.Potentially mutagenic impurities: analysis of structural classes and carcinogenic potencies of chemical intermediates in pharmaceutical syntheses supports alternative methods to the default TTC for calculating safe levels of impurities[J].Regul Toxicol Pharmacol, 2013, 66(3): 326-335.

《中國藥學(xué)年鑒》2014卷征訂啟事

《中國藥學(xué)年鑒》是一部連續(xù)記載我國藥學(xué)領(lǐng)域發(fā)展概貌和重要成就的大型編年史冊，1982年由衛(wèi)生部創(chuàng)刊，中國藥科大學(xué)牽頭組織全國著名藥學(xué)專家編纂，中國工程院彭司勛院士擔(dān)任主編。

《中國藥學(xué)年鑒》是涵蓋我國藥學(xué)領(lǐng)域各個方面的藥學(xué)綜合性年刊，內(nèi)容包括專論、藥學(xué)研究、新藥研發(fā)、藥學(xué)教育、藥品生產(chǎn)與流通、醫(yī)院藥學(xué)、藥品監(jiān)管、人物、書刊、學(xué)會與學(xué)術(shù)活動、大事記等。創(chuàng)刊30年來，本書以其密集的信息、翔實(shí)的年報統(tǒng)計資料，深受讀者的歡迎和喜愛，成為醫(yī)藥單位不可或缺的館藏書目，和醫(yī)藥工作者常備?？嫉墓ぞ邥?。

《中國藥學(xué)年鑒》2014卷于2015年4月出版，面向海內(nèi)外公開發(fā)行，定價：320元/本。

訂閱地址：南京市童家巷24號中國藥科大學(xué)郵 編：

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●中國年鑒資源全文數(shù)據(jù)庫核心年鑒

●榮獲首屆中國年鑒獎提名獎

●第四屆全國年鑒編校質(zhì)量檢查一等獎

●第四屆全國年鑒編纂出版質(zhì)量評比一等獎

·新藥注冊與審評·

DRUG REGISTRATION AND EVALUATION

Advances in Researches on Impurities in Chemical Drugs

YUE Yue1,2, LUO Xuefang1, ZHONG Wenying1, HOU Wen2

(1.Department of Analytical Chemistry, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China; 2.Nanjing Cavendish Bio-Engineering Technology Co., Ltd., Nanjing 210033, China)

Analysis and control of drug impurities are the basics for effective and safe use of drugs.This paper reviews the advances in researches on impurities in chemical drugs from the aspects of impurity profiling, impurity detection and formulation of impurity limit, so as to provide constructive ideas and effective methods for researches on impurities in chemical drugs.

impurity pro fi le; impurity detection; impurity limit; related substance; chiral impurity; genotoxic impurity

TQ460.72

A

1001-5094（2015）07-0533-07

接受日期：2015-05-20

*通訊作者：鐘文英，教授；

研究方向：現(xiàn)代藥物分析及分析化學(xué)；

Tel：025-86185217；E-mail：wenyingzhongnj@163.com