超高效液相色譜UPLC在藥物分析上的應(yīng)用

張亞洲　于麗穎

摘 要：超高效液相色譜（UPLC）近年來(lái)發(fā)展迅速，由于其靈敏度高、高分離度以及耗時(shí)少等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用。本文對(duì)高效液相色譜的工作原理及其在藥物分析上的應(yīng)用進(jìn)行綜述。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜；藥物分析；應(yīng)用

DOI：10.16640/j.cnki.37-1222/t.2015.23.031

0 引言

目前，液相色譜已經(jīng)成為用于分析的主要方法之一。高效液相色譜在生物化學(xué)、食品科學(xué)、環(huán)境檢測(cè)、藥物分析等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。其主要原因是HPLC具有分析速度快、分離效率高、檢測(cè)靈敏度高、適用范圍廣、樣品處理簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。2004年3月，由Waters公司率先推出了第一臺(tái)商品化的超高效液相色譜系統(tǒng)（Ultra Performance liquid chromatography，UPLC）。它不但繼承了傳統(tǒng)HPLC的所有優(yōu)點(diǎn)，而且在速度和分離程度以及靈敏度這些方面都有了顯著的提高。因此，UPLC在藥物分析等領(lǐng)域獲得了極大的應(yīng)用。本文對(duì)UPLC的主要原理以及它在藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用做了闡述。

1 UPLC的原理

UPLC和HPLC都以范德米特（Van Deemeter）方程為理論基礎(chǔ)。HETP=AdP+B/v+CdP2V，其中HETP表示理論塔板高度；A表示渦流擴(kuò)散系數(shù)；dP表示填充料粒徑；B表示分子徑向擴(kuò)散系數(shù)；C表示傳質(zhì)因子；v表示流動(dòng)相線速度。根據(jù)這個(gè)方程可以看出顆粒度越小柱效越高；顆粒度不同，最適流速也不相同；更小的顆粒度使最高柱效點(diǎn)向更高流速（線速度）方向移動(dòng)，而且有更寬的線速度范圍。因此，減小顆粒度不但能夠提高柱效，而且還能提高分析速度。

UPLC與HPLC相比解決了色譜填料耐壓和小顆粒填料的填裝問題。采取小于2微米的色譜填料，大大的提高了色譜柱的性能，并且極大的縮短了開發(fā)方法所需的時(shí)間，使其與HPLC色普柱有了質(zhì)的飛躍。超高效液相色譜與傳統(tǒng)的高效液相色譜相比具有很多有點(diǎn)。

（1）分析速度快，Nguyen等[2]分別用1.7um的色譜柱的UPLC和5um的色譜柱的普通高效液相色譜法分析尼泊金酯累同系物，在分離度保持不變的情況下分析速度提高了8倍。

（2）分離度好，Jhnson在利用UPLCoa-TOF/MS研究人尿液中對(duì)乙酰氨基酚代謝物時(shí)，發(fā)現(xiàn)其平均峰底寬度縮短了1.5s，并且分離代謝產(chǎn)物的數(shù)量也有所增加。

（3）檢測(cè)靈敏度高，Yu等分析血漿中混合藥物的靈敏度增加了5-10倍。

2 UPLC在中藥分析上的應(yīng)用

中藥中含有多種化學(xué)成分，這些成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜。采用超高效液相色譜法對(duì)中藥中的化學(xué)成分進(jìn)行分析檢測(cè)，可以快速、靈敏的檢測(cè)出多種化學(xué)成分，所以，UPLC在中藥化學(xué)成分分析和質(zhì)量控制中得到了良好的應(yīng)用并且有很好的發(fā)展前景。

2.1 超高效液相色譜法測(cè)定黃酮類化合物

黃酮類化合物是廣泛存在于自然界的一大類化合物，是植物體內(nèi)重要的物質(zhì)，分布廣泛，具有抗氧化、抗癌、免疫調(diào)節(jié)等功能。陳帥等在對(duì)陳皮中三種黃酮成分含量測(cè)定時(shí)，采用Waters Acquity UPLC系統(tǒng)，Water BEH C18色譜柱；以乙腈-水為流動(dòng)相，0.5ml.min-1的流量，檢測(cè)波長(zhǎng)為326nm。結(jié)果線性范圍內(nèi)的橙皮苷、川陳皮素及橘紅素的峰面積與相對(duì)應(yīng)質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系，采用此方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可用于陳皮藥材質(zhì)量的監(jiān)控。孫冬梅等采用UPLC-Q-TOF-MS法對(duì)銀杏磷脂軟膠囊中黃酮類化合物進(jìn)行篩選，鑒定出12種黃酮類化合物，該方法可以作為測(cè)定銀杏磷脂膠囊總黃酮的手段。

2.2 超高效液相色譜在柴胡中的應(yīng)用

柴胡是傳統(tǒng)的重要，具有解表退熱、升舉陽(yáng)氣、保肝、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫等功效。其化學(xué)成分復(fù)雜，含有皂苷、有機(jī)酸、黃酮、揮發(fā)油、生物堿、香豆素以及多炔類等成分。方媛等人采用UPLC測(cè)定不同產(chǎn)地和不同基原的柴胡根種多炔類化合物的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了4種多炔類化合物，分別鑒定為 （2Z，8Z，10E）-2，8，10-十五烷三烯-4，6-二炔-1-醇、（2Z，8E，10E）-2，8，10-十五烷三烯-4，6-二炔-1-醇、（2Z，8Z，10E）-2，8，10-十七烷三烯-4，6-二炔-1-醇和柴胡炔醇。蔡華等人采用UPLC-MS聯(lián)用技術(shù)分離鑒定了柴胡中化合物的成分，并建立了柴胡的化學(xué)成分特征指紋圖譜，這為柴胡的品質(zhì)鑒定提供了理論基礎(chǔ)。

2.3 超高效液相色譜在其他藥物中的應(yīng)用

李月婷等人，利用高效液相色譜發(fā)同時(shí)測(cè)定了復(fù)方葒草凍干粉針中沒食子酸、原兒茶酸、兒茶素、異葒草素、葒草素、槲皮素-3-O-（2”-O-α-鼠李糖）-β-葡萄糖醛酸、牡荊素、異牡荊素、木犀草苷、野黃芩苷和槲皮苷11種指標(biāo)成分含量的方法。應(yīng)用該方法回收效率高、準(zhǔn)確、重復(fù)性好的特點(diǎn)。安軍永應(yīng)用UPLC-MS建立了參芪益氣固體片中6中有效成分。采用UPLC-MS方法與傳統(tǒng)的方法想比較，可以高分離度、降低藥品生產(chǎn)成本。高攀峰等采用UPLC建立并測(cè)定甘肅產(chǎn)蒙古黃芪中藥材中黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅲ和黃芪甲苷的含量的方法。采用該方法具有簡(jiǎn)便可靠的優(yōu)點(diǎn)。

3 展望

UPLC的各項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)決定了其在諸多行業(yè)的廣泛應(yīng)用，尤其在應(yīng)用于藥物分離及分析上效果更加顯著，如在中藥材質(zhì)量分析中的應(yīng)用、中藥制劑藥物分析中的應(yīng)用及在化學(xué)制劑藥物分析的應(yīng)用。除了應(yīng)用與常規(guī)的檢測(cè)中外，UPLC還可與質(zhì)譜聯(lián)用，將兩者的優(yōu)點(diǎn)有機(jī)的結(jié)合到一起，快速而高效地完成較復(fù)雜成分的分離及鑒定。未來(lái)，相信U PLC會(huì)成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)展的助推劑。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳帥，羅森，袁崇均等.超高效液相色譜法快速測(cè)定陳皮中三中黃酮類成分含量[J].四川中醫(yī)，2015，33（07）：104-106.

[2]孫冬梅，董玉娟，胥愛麗等.UPLC-Q-TOF-MS法快速篩查銀杏磷脂軟膠囊種12種黃酮類化合物[J].中成藥，2015，37（02）：320-324.

[3]呂曉慧，孫宗喜，蘇瑞強(qiáng)等.柴胡及其活性藥理研究進(jìn)展[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2012，19（12）：105-107.endprint