電化學(xué)發(fā)光免疫儀檢測(cè)心肌損傷血清標(biāo)志物的技術(shù)分析*

邱新成 侯新蕊

電化學(xué)發(fā)光免疫儀檢測(cè)心肌損傷血清標(biāo)志物的技術(shù)分析*

邱新成①侯新蕊②

目的：研究分析羅氏E601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀在檢測(cè)心肌損傷血清標(biāo)志物方面的應(yīng)用。方法：通過(guò)臨床研究，分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)心肌損傷血清標(biāo)志物時(shí)的一些關(guān)乎檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、符合臨床判斷和應(yīng)用的重要技術(shù)環(huán)節(jié)。結(jié)果：結(jié)合心肌損傷血清標(biāo)志物的臨床意義，規(guī)范選用檢測(cè)項(xiàng)目；應(yīng)注意正確的保存、使用試劑，注意合并試劑的使用等技術(shù)環(huán)節(jié)。結(jié)論：在使用其檢測(cè)心肌損傷血清標(biāo)志物時(shí)，嚴(yán)格控制技術(shù)流程的諸環(huán)節(jié)對(duì)保障檢測(cè)質(zhì)量具有重要作用。

電化學(xué)發(fā)光儀；心肌損傷；血清標(biāo)志物

DOI∶ 10.3969/J.ISSN.1672-8270.2015.11.002

[First-author’s address] Department of Cardiology, The Second Artillery General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100088, China.

電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀是繼放射免疫、酶聯(lián)免疫及熒光免疫技術(shù)以后研究出來(lái)的新一代標(biāo)志免疫測(cè)定技術(shù)[1]。目前，自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀可檢測(cè)的項(xiàng)目很多，主要包括腫瘤標(biāo)志物、性激素、甲狀腺激素、心肌損傷血清標(biāo)志物、貧血檢查、傳染性疾病、骨代謝檢查以及免疫肝炎系列等內(nèi)容，極大的滿足了臨床的需求[2]。本研究通過(guò)對(duì)羅氏E601自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀在檢測(cè)心肌損傷血清標(biāo)志物中的應(yīng)用，分析在檢測(cè)時(shí)的注意事項(xiàng)及技術(shù)環(huán)節(jié)。

1 心肌損傷血清標(biāo)志物的臨床意義

全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)在心肌損傷血清標(biāo)志物的應(yīng)用中有別于傳統(tǒng)生化檢查的心肌酶項(xiàng)目，其主要項(xiàng)目是肌酸激酶同工酶MB(creatine kinase MB，CK-MB)、肌鈣蛋白(troponin，Tn)以及肌紅蛋白(myoglobin，Mb)。CK-MB在發(fā)病后出現(xiàn)較早，通常在心源性胸痛3～8 h后即可在血液中檢測(cè)出，達(dá)到峰值時(shí)間為9～30 h，而48～72 h后恢復(fù)正常。CK-MB若在病程中保持在高水平，通常意味著心肌壞死仍在繼續(xù)，若恢復(fù)正常后再次升高，則提示梗塞部位的擴(kuò)大或者又有新的梗塞。CK-MB也可出現(xiàn)在其他疾病中，如橫紋肌溶解，此時(shí)需要結(jié)合其他心肌損傷血清標(biāo)志物的檢查進(jìn)行鑒別。Tn是橫紋肌收縮的重要調(diào)節(jié)蛋白，存在于心肌和骨骼肌中，由3個(gè)亞基組成：即肌鈣蛋白C(TnC)、肌鈣蛋白T(TnT)和肌鈣蛋白I(TnI)。TnT、TnC和TnI主要以2種形式存在于心肌細(xì)胞中，大部分以結(jié)構(gòu)蛋白形式固定于肌原纖維上，小部分游離于胞漿中。在正常人血液中含量很低(＜0.3 ug/L)，當(dāng)心肌細(xì)胞受損時(shí)，游離中的Tn先釋放進(jìn)入血液，隨著損傷的加重，結(jié)合部分的Tn被降解而不斷釋放入血液中，使其不斷地持續(xù)升高[3]。對(duì)于TnT而言，心肌細(xì)胞內(nèi)的TnT呈復(fù)合體狀態(tài)約占94%，6%游離在胞漿中且為可溶性，在心肌細(xì)胞膜完整的情況下不能透過(guò)，因此正常人血清中幾乎檢測(cè)不到，當(dāng)心肌細(xì)胞受損時(shí)TnT分子量較小就比較容易透過(guò)細(xì)胞膜釋放入血液中，使血清中TnT水平迅速增加。在發(fā)生心源性胸痛3～4 h后，即可檢測(cè)出TnT，且檢測(cè)期長(zhǎng)達(dá)14 d左右；在不穩(wěn)定型心絞痛中，心肌肌鈣蛋白T(cardiac troponin T，cTnT)也常升高，提示可能有小范圍的心肌梗塞，因此由于其靈敏度高、發(fā)病后出現(xiàn)時(shí)間早、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)及特異性交叉等原因，臨床上檢測(cè)cTnT對(duì)于診斷心肌缺血，急性心肌梗死，微小面積心肌損傷等均具有重要意義。Mb是橫紋肌細(xì)胞的細(xì)胞漿蛋白，參與氧的轉(zhuǎn)運(yùn)及儲(chǔ)留，在癥狀發(fā)生后2 h左右，Mb的濃度就會(huì)升高，因此被認(rèn)為是發(fā)生心肌梗塞后的最早期標(biāo)志物，心梗發(fā)生后4～12 h濃度達(dá)高峰，24 h左右恢復(fù)正常水平，因此在臨床檢測(cè)肌紅蛋白對(duì)于早期診斷急性心肌梗死、再更及施行溶栓治療后是否再灌注均有重要的臨床意義。心肌損傷標(biāo)志物在血液中出現(xiàn)過(guò)程見(jiàn)表1。

表1 心肌損傷標(biāo)志物在血液中出現(xiàn)的時(shí)間(h)

2 心肌損傷血清標(biāo)志物的檢測(cè)

隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，心肌損傷血清相關(guān)標(biāo)志物的檢查手段越來(lái)越豐富，諸如心電圖、負(fù)荷試驗(yàn)、核素心肌顯像、超聲心動(dòng)圖以及冠脈造影等。血液檢查心肌標(biāo)志物經(jīng)歷了從谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamic-oxaloacetic transaminase，GOT)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)向Mb、肌酸激酶和肌酸激酶-MB型以及TnI和TnT轉(zhuǎn)變的重大變革[4]。心肌損傷血清相關(guān)標(biāo)志物檢查對(duì)于患者而言，即方便快捷，又傷害較小，免除患者花大量的時(shí)間配合進(jìn)行負(fù)荷試驗(yàn)；避免某些檢查有可能對(duì)患者造成的傷害等。因此，心肌損傷血清標(biāo)志物在臨床上的應(yīng)用越來(lái)越重要，且臨床對(duì)心肌損傷血清標(biāo)志物檢查的要求越來(lái)越高，對(duì)檢驗(yàn)技術(shù)要求越來(lái)越先進(jìn)，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果要求越來(lái)越準(zhǔn)確，對(duì)檢驗(yàn)時(shí)間要求越來(lái)越短，因而要求分析、檢測(cè)心肌損傷生化標(biāo)志物時(shí)應(yīng)快捷、敏感和迅速。

羅氏E601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀以其先進(jìn)的方法學(xué)，快捷迅速的監(jiān)測(cè)，以及準(zhǔn)確可靠的結(jié)果受到臨床的青睞[5]。但在檢測(cè)心肌損傷血清標(biāo)志物時(shí)，仍需嚴(yán)格進(jìn)行質(zhì)量控制，注意以下技術(shù)環(huán)節(jié)，確保其檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2.1 CK-MB檢測(cè)

CK-MB檢測(cè)可以提高發(fā)病后6 h內(nèi)診斷急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)的敏感性，采用CK-MB質(zhì)量法檢測(cè)其靈敏度可達(dá)96.8%，但缺乏心臟絕對(duì)的特異性[6]。前列腺或子宮手術(shù)、小腸、舌、膈肌手術(shù)或創(chuàng)傷、橫紋肌損傷、心臟手術(shù)以及慢性腎衰等CK-MB均會(huì)升高[7-8]。因此，需要在選擇CK-MB檢測(cè)時(shí)應(yīng)進(jìn)行連續(xù)性檢測(cè)用以提高檢測(cè)特異度，此外標(biāo)本采集時(shí)間同樣很重要，需要熟悉掌握CK-MB在病程中血中的濃度水平變化規(guī)律。

2.2 Mb檢測(cè)

雖然由于Mb分子量極小，非常容易釋放入血液中，是目前診斷AMI最早的可測(cè)指標(biāo)。但是Mb廣泛存在于橫紋肌和平滑肌中，診斷心肌梗死的特異性很低，因此Mb在臨床上用于陰性排除價(jià)值更高，正因?yàn)槠涮赜械呐R床意義，也可用于監(jiān)測(cè)溶栓治療后再灌注的情況。

2.3 cTnT檢測(cè)

由于cTnT有典型的早期升高和較慢降低，因此既可作為MI早期指標(biāo)，也可作為中期和晚期的診斷指標(biāo)。同時(shí)，由于特異性極強(qiáng)，既可作為“微灶梗死”的指標(biāo)，也可作為估計(jì)梗死面積的指標(biāo)，還可作為危險(xiǎn)分層、判斷預(yù)后的指標(biāo)[6，9-10]。許之民等[11]報(bào)道，在病毒性心肌炎患者的急性期TnI、TnT比傳統(tǒng)的CK、CK-MB、GOT、血清LDH有更好的敏感性，在116例病例中陽(yáng)性率分別為：TnI64.7%、TnT45.7%、CK10.3%、CK-MB7.8%、GOT6.9%、LDH 12.9%。李亞維等[12]用急性病毒性心肌炎小鼠模型，同時(shí)觀察了42例急性病毒性心肌炎患者，認(rèn)為測(cè)定血清cTnT水平探查心肌炎性損傷遠(yuǎn)較CK-MB敏感。

2.4 E601殘余試劑的使用

羅氏E601電化學(xué)發(fā)光儀器的試劑特點(diǎn)之一，是在使用完其對(duì)應(yīng)掃描條碼的可檢測(cè)份數(shù)后，試劑盒中仍剩余有大量的殘留試劑，可以將數(shù)盒條碼信息顯示已經(jīng)“用完”的殘留試劑合并為一盒，使用尚未使用過(guò)的條碼掃描后可繼續(xù)使用。羅氏E601心肌損傷血清標(biāo)志物試劑盒通常較為穩(wěn)定，合并試劑后檢測(cè)結(jié)果仍然可靠，但在合并試劑時(shí)應(yīng)注意所合并的試劑必須為同一批號(hào)，嚴(yán)禁不同批號(hào)合并，如發(fā)生不同批號(hào)合并，將對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成巨大影響。同一批號(hào)試劑合并之后，在上機(jī)檢查患者標(biāo)本時(shí)必須用羅氏專用質(zhì)控品先進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制后方可檢測(cè)，如未進(jìn)行質(zhì)量控制則不可使用該盒合并試劑。

2.5 檢測(cè)試劑保存和使用

羅氏E601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀在使用過(guò)程中偶爾會(huì)出現(xiàn)試劑檢測(cè)錯(cuò)誤，出現(xiàn)實(shí)測(cè)量與試劑盒的標(biāo)稱量不符，其原因?yàn)椋孩偃绨l(fā)生在原裝新試劑盒中，有可能是該盒試劑的試劑量不夠，或是試劑盒中存有大量氣泡；②使用合并試劑盒時(shí)，在合并時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量氣泡，因此要求在用冰箱冷藏保存試劑盒時(shí)要輕拿輕放，盒口朝上。合并試劑時(shí)要緩慢注入合并的試劑。

2.6 儀器故障排除方法

(1)羅氏E601電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)在遇到故障時(shí)會(huì)給出報(bào)警信息，此時(shí)應(yīng)根據(jù)提示充分利用診斷菜單中的各項(xiàng)功能和數(shù)據(jù)，結(jié)合儀器的工作狀態(tài)，找出故障發(fā)生原因和解決方法；若不能自行解決，需及時(shí)和工程師聯(lián)系進(jìn)行維修[1]。在常見(jiàn)的故障原因分析時(shí)，不能夠單從儀器對(duì)故障報(bào)警的描述分析，應(yīng)該注意是否與報(bào)警信息相關(guān)的檢測(cè)單元的其他方面出現(xiàn)了故障。如儀器報(bào)吸入標(biāo)本異常，通常該報(bào)警原因是吸樣針在吸取血清時(shí)發(fā)現(xiàn)了凝塊、氣泡等異常標(biāo)本。由于抽血后未等血液自然凝固則進(jìn)行離心導(dǎo)致血清樣本分離不好，或患者的血液中存在高纖維蛋白，造成吸樣時(shí)纖維蛋白同時(shí)被吸入、凝結(jié)而導(dǎo)致吸樣針不完全堵塞[13]。然而，也有可能是因?yàn)槲鼧俞樳\(yùn)動(dòng)異常，加樣臂加樣位置偏離造成。由此可見(jiàn)，雖然儀器報(bào)吸入標(biāo)本異常，分析原因時(shí)還得從加樣標(biāo)本相關(guān)檢測(cè)單元去分析，而不只是考慮樣本堵塞的問(wèn)題。

(2)原裝試劑出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果異常，該種情況通常是試劑在運(yùn)輸過(guò)程中出現(xiàn)問(wèn)題，可檢測(cè)“磁珠”試劑盒蓋口是否附著大量黃色干涸的“磁珠”，若有附著“磁珠”現(xiàn)象則需棄用該試劑盒；除此之外的情況則為試劑盒本身的問(wèn)題，需要與羅氏公司的工程師聯(lián)系，以排除故障。

3 結(jié)語(yǔ)

電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀為精密儀器，若要保證其正常運(yùn)行，得到較為準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，不僅使儀器正常運(yùn)行，更應(yīng)該做好儀器的常規(guī)保養(yǎng)工作[14]。此外，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行預(yù)防性維護(hù)，保證儀器具有良好的工作狀態(tài)和性能，并減少故障的發(fā)生頻率，延長(zhǎng)其使用壽命[15]。

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Roche ECL instrument E601 in inspection serum markers of myocardial injury aspects

QIU Xin-cheng, HOU Xin-rui
China Medical Equipment,2015,12(11)∶5-8.

Objective∶ To discuss the application of Roche ECL instrument E601 in inspection serum markers of myocardial injury aspects. Methods∶ Dependent on the clinical experience of cardiology, the introduction of Roche E601 methodology and the instruments using, and the clinical significance analysis of myocardial injury markers, summarized the important considerations in accurate test results and clinical judgment when using ECL instrument checks serum markers of myocardial injury. Results∶ In order to make better clinical application, people who use Roche ECL instrument E601 should pay attention to proper storage and use reagents, note the use of the combined reagents and the clinically meaningful of detected projects. Conclusion∶ The quality control of technical procedures is very important to assure the testing results. Only understanding some of the important considerations,can we better integrate the device for clinical application.

Electrochemiluminescence instrument; Myocardial injury; Serum markers

邱新成，男，(1982- )，本科學(xué)歷，醫(yī)師。第二炮兵總醫(yī)院心內(nèi)科，從事心血管內(nèi)科診療工作。

1672-8270(2015)11-0005-04

R542.2

A

2015-06-09

國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2009BAI86B04)“保健特殊需求關(guān)鍵技術(shù)及設(shè)備研究”

①第二炮兵總醫(yī)院心內(nèi)科 北京 100088

②解放軍總醫(yī)院心內(nèi)科 北京 100853