小兒咳喘靈顆粒中金銀花的質(zhì)量分析

鄭艷青， 馬 斐， 張 靜， 劉 靜， 任菲菲

（山東省德州市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，山東德州253000）

小兒咳喘靈顆粒中金銀花的質(zhì)量分析

鄭艷青， 馬 斐， 張 靜， 劉 靜， 任菲菲

（山東省德州市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，山東德州253000）

目的 對26個廠家生產(chǎn)的小兒咳喘靈顆粒 （麻黃、金銀花、苦杏仁等）中的金銀花質(zhì)量進(jìn)行系統(tǒng)的研究。方法 采用薄層色譜法對樣品中的金銀花進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法測定樣品中金銀花的綠原酸含有量；采用HPLCELSD法測定樣品中灰氈毛忍冬皂苷乙的含有量。結(jié)果 26批樣品中有12批檢出灰氈毛忍冬皂苷乙，表明存在原料中摻有山銀花的現(xiàn)象。結(jié)論 測定小兒咳喘靈顆粒中的綠原酸和灰氈毛忍冬皂苷乙，可有助于監(jiān)控其質(zhì)量。

小兒咳喘靈顆粒；金銀花；綠原酸；灰氈毛忍冬皂苷乙；山銀花；薄層色譜法；HPLC法；HPLC-ELSD法

小兒咳喘靈顆粒是在張仲景 《傷寒論》經(jīng)典方 “麻杏石甘湯”的基礎(chǔ)上，采用科學(xué)的提取方法精制而成［1］，由麻黃、金銀花、苦杏仁、板藍(lán)根、石膏、甘草、瓜蔞等七味藥材組成［2］，具有宣肺、清熱，止咳、祛痰、平喘之功效，用于上呼吸道感染，氣管炎，肺炎，咳嗽等［2］，廣泛用于小兒傷風(fēng)咳嗽、支氣管炎、哮喘、肺炎、百日咳等咳嗽病癥，副作用較小，目前未見不良反應(yīng)報(bào)道。小兒咳喘靈顆粒生產(chǎn)企業(yè)共有154家，批準(zhǔn)文號總數(shù)154個［3］，有每袋裝10 g、2 g、1 g三種規(guī)格，標(biāo)準(zhǔn)收載于 《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第四冊，部分企業(yè)執(zhí)行國家食品藥品監(jiān)督管理局試行標(biāo)準(zhǔn)。部頒標(biāo)準(zhǔn)鑒別項(xiàng)為麻黃和甘草的化學(xué)反應(yīng)［4］，專屬性差，且無成分定量測定項(xiàng)，不能夠保證產(chǎn)品質(zhì)量，而部分企業(yè)執(zhí)行的國家食品藥品監(jiān)督管理局試行標(biāo)準(zhǔn)在檢測項(xiàng)目上各不相同，在檢測方法上差距也較大，難以全面保證藥品質(zhì)量。一般認(rèn)為，金銀花的抗菌有效成分為綠原酸和異綠原

酸，而且常以綠原酸含有量高低來評價金銀花的質(zhì)量優(yōu)劣［5］，具有 “中藥之中的青霉素” 之稱［6］。本實(shí)驗(yàn)對依據(jù)法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)合格的26個廠家生產(chǎn)的小兒咳喘靈顆粒中的金銀花質(zhì)量進(jìn)行系統(tǒng)的研究，為標(biāo)準(zhǔn)的提高提供一定的依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Mettler XS105 DU電子天平；Waters e2695高效液相色譜儀，包括Xbridge C18色譜柱、Waters2489紫外檢測器；Agilen1200高效液相色譜儀，包括Kromasil C18色譜柱、Varian 380-LC蒸發(fā)光散射檢測器。

1.2 試藥 金銀花對照藥材 （中國藥品生物制品檢定所，批號 121060-200805）。綠原酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110753-201314，含有量測定用，純度以96.6%計(jì)）；灰氈毛忍冬皂苷乙對照品 （中國食品藥品檢定研究院，批號111814-201303，含有量測定用，純度以 92.8%計(jì)）。甲醇、乙腈為色譜純；乙酸丁酯、甲酸、磷酸、醋酸為分析純；水為超純水。小兒咳喘靈顆粒共26批樣品，均為山東省17地市市售品種，來自26個不同生產(chǎn)企業(yè)。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別 26批樣品各取2 g，研細(xì)，加甲醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至5 mL，作為供試品溶液。另取金銀花對照藥材0.2 g，加甲醇5 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。再取綠原酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法 （附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取供試品溶液10μL、對照品溶液10μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水 （7∶2.5∶2.5）的上層溶液為展開劑展開，取出，晾干，置紫外光燈 （365 nm）下檢視［7］。結(jié)果見圖1。

圖1 不同生產(chǎn)企業(yè)樣品Fig.1 Sam p les from differentm anufacturers

2.2 綠原酸成分測定［8］

2.2.1 色譜條件 C18色譜柱 （250 mm×4.6 mm×5μm）；流動相為乙腈-水溶液 （用磷酸調(diào)pH至3.0，15∶85）；體積流量1.0 mL/min；柱溫30℃；檢測波長327 nm；進(jìn)樣量20μL。對照品、樣品及陰性對照的色譜圖見圖2。

圖2 綠原酸對照品、樣品及陰性對照HPLC色譜圖Fig.2 HPLC chromatograms of chlorogenic acid，sample and negative samp le

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品9.92 mg（純度96.6%），置100 m L棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，制成每1 mL含95.83μg的貯備液 （10℃以下保存）。

2.2.2.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，精密稱取約1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理 （功率300 W、頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置10 mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 方法學(xué)考察［9］

2.2.3.1 線性關(guān)系與檢出限 精密量取綠原酸對照品貯備液1 mL，置25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取 1.0、5.0、10.0、20.0、50.0μL，在色譜條件下依次進(jìn)樣。以峰面積為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量 （μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=2 898 949X-6 996，r=1.000 0，線性范圍為0.003 8～0.191 7 μg。按信噪比3∶1計(jì)，檢出限為1.86 ng。

2.2.3.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對照品溶液10μL，在 “2.2.1”項(xiàng)色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。計(jì)算RSD為0.87%，表明儀器精密度良好。

2.2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次樣品6份，按“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，測定綠原酸峰面積。結(jié)果RSD值為2.1%。

2.2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在制備后0、2、4、8、12、24 h進(jìn)行測定。結(jié)果綠原酸峰面積的RSD值為0.92%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.3.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取含有量已知的樣品0.5 g共6份，分別加入相同量的質(zhì)量濃度為0.212 4 mg/mL的對照品溶液。按“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在 “2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，結(jié)果見表1。

2.2.4 樣品測定 取26批小兒咳喘靈顆粒樣品，精密稱定，分別按 “2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在 “2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行測定，計(jì)算，結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of recovery tests

2.3 灰氈毛忍冬皂苷乙成分測定［10］

2.3.1 色譜條件 Agilent C18色譜柱（250 mm× 4.6 mm×5μm）；流動相為乙腈-0.4%醋酸溶液，梯度洗脫 （0～10 min，11.5%～15%乙腈；10～12 min，15%～29%乙腈；12～18 min，29%～33%乙腈；18～30 min，33%～45%乙腈）；載氣體積流量1.6 mL/min；柱溫30℃；蒸發(fā)光散射檢測器檢測；霧化器溫度35℃；蒸發(fā)器40℃。對照品及樣品的色譜圖見圖3。

表2 小兒咳喘靈顆粒含有量測定 （n=6）Tab.2 Con tent determ ination of Xiaoer Kechuanling G ranules（n=6）

圖3 灰氈毛忍冬皂苷乙對照品、樣品及陰性對照HPLC色譜圖Fig.3 HPLC chromatograms ofmacranthoidin B，samples，and negative sample

2.3.2 溶液的制備

2.3.2.1 對照品溶液的制備 取灰氈毛忍冬皂苷乙對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL含灰氈毛忍冬皂苷乙0.6 mg的溶液。

2.3.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取本品粉末（過四號篩）約0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理 （功率300 W，頻率40 kHz）40 min，放冷，再稱定質(zhì)量，50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 樣品測定 取26批小兒咳喘靈顆粒樣品，精密稱定，分別按 “2.3.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在 “2.3.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行測定，計(jì)算，結(jié)果見表2。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜方法，對26批小兒咳喘靈顆粒進(jìn)行金銀花及主成分綠原酸的鑒別，結(jié)果22批樣品主斑點(diǎn)可見，4批肉眼看不到主斑點(diǎn)，僅說明4個廠家金銀花的投料存在問題。因山銀花Lonicerae Flos也含有綠原酸，薄層色譜的檢驗(yàn)結(jié)果無法區(qū)分另22批樣品中使用的是金銀花還是山銀花。還比較了以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（7∶3∶1∶1.2）為展開劑，1%三氯化鐵溶液與1%鐵氰化鉀溶液 （1∶1）混合液［11］為顯色劑的實(shí)驗(yàn)方法，發(fā)現(xiàn)更簡便，所考察的綠原酸斑點(diǎn)更加清晰。

本實(shí)驗(yàn)采用HPLC方法，對26批小兒咳喘靈顆粒進(jìn)行金銀花主成分綠原酸的考察，由于綠原酸不穩(wěn)定，遇光易分解，因此在實(shí)驗(yàn)中使用棕色瓶，盡量避光操作［12］。根據(jù)測定結(jié)果，企業(yè)間差異較大，說明藥材質(zhì)量差異較大或者部分企業(yè)未按規(guī)定處方量投料。分析結(jié)果與金銀花薄層色譜所得到的評價結(jié)論相吻合。

本實(shí)驗(yàn)采用HPLC-ELSD方法，對26批小兒咳喘靈顆粒進(jìn)行山銀花中特有成分灰氈毛忍冬皂苷乙篩查，考察企業(yè)是否存在以山銀花替代金銀花投料現(xiàn)象。結(jié)果，26批樣品中有12批檢出灰氈毛忍冬皂苷乙，說明12批產(chǎn)品存在山銀花或者是摻有山銀花投料現(xiàn)象。

小兒咳喘靈顆?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有多個，大部分企業(yè)執(zhí)行的部頒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)太低，基本不能控制藥品質(zhì)量。國家食品藥品監(jiān)督管理局試行標(biāo)準(zhǔn)參差不齊，檢驗(yàn)項(xiàng)目和限度各不相同，無法有效的控制小兒咳喘靈顆粒的質(zhì)量。金銀花和山銀花來源不同，所含成分也有較大區(qū)別，使用中不能相互替代［13］，雖然 《中國藥典》2005年版已將金銀花品種來源規(guī)范，但實(shí)際運(yùn)用中還沒有完全統(tǒng)一規(guī)范［14］，建議將現(xiàn)行的小兒咳喘靈顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行整合統(tǒng)一，提高后收入 《中國藥典》，切實(shí)可行的來保證小兒咳喘靈顆粒的安全、有效。

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［2］ 衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)：中藥成方制劑第四冊［S］.1991：19.

［3］ 國家食品藥品監(jiān)督管理總局［EB/OL］.http：//www. sda.gov.cn/WS01/CL0001/

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Quality analysis of Lonicerae Japonicae Flos in Xiaoer Kechuanling Granules

ZHENG Yan-qing， MA Fei， ZHANG Jing， LIU Jing， REN Fei-fei
（Dezhou Control and Testing Center for Food and Drug，Dezhou 253OOO，China）

AIM To systematically evaluate the quality of Lonicerae Japonicae Flos in Xiaoer Kechuanling Granules（Lonicerae Japonicae Flos，Ephedrae Herba，Radix Isatidis seu Baphicacanthi，etc.）collected from twenty six manufacturers.METHODS The qualitative test for L.Japonicae was conducted by TLC，the content of chlorogenic acid in Xiaoerkechuanling Granuleswas determined by HPLC，and the content ofmacranthoidin B was accomplished by HPLC-ELSD.RESULTS The factofmacranthoidin B existence in twelve outof twenty-six batcheswas indicative of Lonicerae Flos adulteration in raw materials.CONCLUSION Detecting chlorogenic acid and macranthoidin B in Xiaoer Kechuanling Granules can help to monitor the quality of the agent.

Xiaoer Kechuanling Granules；Lonicerae Japonicae Flos；chlorogenic acid；macranthoidin B；Lonicerae Flos；TLC；HPLC；HPLC-ELSD

R927.2

A

1001-1528（2015）12-2660-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.019

2015-03-20

鄭艷青 （1973—），女，副主任中藥師，從事中藥及中成藥的檢驗(yàn)。Tel：（0534）2236050，E-mail：zhengqujin@126.com