復(fù)方薄荷腦微乳原位凝膠劑的評價

劉 晨， 任宗芬， 李建理， 胡 進(jìn)， 王文蘋，3，4*

（1.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，寧夏 銀川750004；2.寧夏醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，寧夏 銀川750004；3.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，寧夏銀川750004；4.回醫(yī)藥現(xiàn)代化省部共建教育部重點(diǎn)實驗室，寧夏 銀川750004）

復(fù)方薄荷腦微乳原位凝膠劑的評價

劉 晨1，2， 任宗芬1， 李建理1， 胡 進(jìn)2， 王文蘋2，3，4*

（1.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院，寧夏 銀川750004；2.寧夏醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，寧夏 銀川750004；3.寧夏回藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，寧夏銀川750004；4.回醫(yī)藥現(xiàn)代化省部共建教育部重點(diǎn)實驗室，寧夏 銀川750004）

目的 對載復(fù)方薄荷腦微乳的原位凝膠滴鼻液 （薄荷腦、樟腦、液狀石蠟）進(jìn)行評價。方法 薄荷腦和樟腦的低共熔特性制備微乳再將其載入原位凝膠中制得載藥微乳凝膠液，從制劑的外觀、pH、流變學(xué)性質(zhì)、體外釋放度、離體黏膜透過性及對大鼠鼻黏膜形態(tài)進(jìn)行考察。結(jié)果 體外釋放行為符合Higuchi方程，10 h累積釋放33.6%，顯著優(yōu)于原制劑的7.6%；10 h離體黏膜累積透過性率11.8%，約為原制劑的5倍；對大鼠鼻黏膜的刺激性較小且可逆。結(jié)論 復(fù)方薄荷腦微乳的原位凝膠滴鼻液具有良好的緩釋性能且適合臨床使用。

復(fù)方薄荷腦；微乳；原位凝膠；滴鼻液；體外釋放度

復(fù)方薄荷腦滴鼻液收載于 《中國醫(yī)院制劑規(guī)范》第2版，是醫(yī)院常用的耳鼻喉科制劑。該制劑由薄荷腦、樟腦及液狀石蠟組成，液狀石蠟因生產(chǎn)廠家及批號的不同而導(dǎo)致質(zhì)量不一，對薄荷腦和樟腦定量測定產(chǎn)生影響，進(jìn)而使制劑質(zhì)量可控性差［1-2］；同時傳統(tǒng)滴鼻液在鼻腔的停留時間短、易流失，導(dǎo)致生物利用度低且個體差異較大［3］?；谏鲜鲈?，課題組前期利用薄荷腦和樟腦的低共熔特性制備微乳，并將其載入原位凝膠中制得新型滴鼻液，不僅避免了液狀石蠟帶來的弊端，而且延長了藥物在給藥部位的滯留時間。本研究進(jìn)一步對所得微乳原位凝膠滴鼻液進(jìn)行體內(nèi)外評價，明確其在給藥局部的膠凝性、滲透性和安全性，為后期新制劑的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

移液槍 （規(guī)格10～100μL，德國艾本德公司）；PHS-3E型pH計（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）；H-7650透射電子顯微鏡 ［日立高新技術(shù)（上海）國際貿(mào)易有限公司］；WH-861渦旋混合器（江蘇省太倉市科教器材廠）；Phenix YS100光學(xué)顯微鏡 （江西省上饒市羽天科教儀器有限公司）；DV-Ⅲ流變儀 （美國博勒飛公司）；透析袋MD34（截留分子量3500，北京索萊寶科技有限公司）；RYJ-6A藥物透皮擴(kuò)散試驗儀 （上海黃海藥檢儀器有限公司）；Leica DFC 295數(shù)碼顯微鏡彩色攝像機(jī)（德國徠卡儀器有限公司）；Leica EG150H組織包埋機(jī)（德國徠卡儀器有限公司）；Leica RM2235組織切片機(jī) （德國徠卡儀器有限公司）。

氯化鈣 （煙臺市雙雙化工有限公司，批號20130402）、氯化鉀 （天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號20120925）、氯化鈉 （天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號20111029）、碳酸氫鈉 （天津市瑞金特化學(xué)品有限公司，批號20100604）、水合氯醛 （天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號20131202）、固定液 （寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院病理科提供）、PBS緩沖液 （寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院病理科提供），復(fù)方薄荷腦滴鼻劑（寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院制劑中心，批號20140121）以上所用試劑均為分析純。所用水均為去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 根據(jù)文獻(xiàn)方法［4］做了相應(yīng)調(diào)整。采用Hitachi L2000型高效液相色譜儀，ODS C18（250 mm×4.6 mm，5μm），流動相為甲醇-水（75∶25），體積流量1.0 mL/min，檢測波長289 nm；進(jìn)樣量10μL。柱溫為室溫。

2.2 人工鼻液的配制 根據(jù)文獻(xiàn)配制［5］，氯化鈉7.91 g、碳酸氫鈉2.56 g、氯化鉀3.68 g和氯化鈣0.51 g，混勻溶解于去離子水1 L中即得。

2.3 微乳原位凝膠滴鼻液的制備 以薄荷腦-樟腦 （1∶1）研磨后所形成澄清透明的低共熔混合溶液作為油相，將油相1.0 g、吐溫-80 2.0 g和甘油1.0 g加入試管中渦旋混勻，加1 mL去離子水充分混勻即得微乳；0.05 g去乙酰結(jié)冷膠加入至5 m L去離子水中，90℃下溶解后，冷卻，加0.02 g海藻酸鈉，于4℃冰箱中過夜，即得原位凝膠；將制備好的微乳液1 mL加入原位凝膠中，再加入去離子水至10 m L，混勻，即得微乳原位凝膠（含薄荷腦和樟腦各1%）。

2.4 微乳原位凝膠滴鼻液的評價

2.4.1 外觀和pH 所得復(fù)方薄荷腦微乳原位凝膠劑為液態(tài)，呈半透明狀且有淡藍(lán)色乳光，具良好的流動性；加入人工鼻液后發(fā)生凝膠化，倒置后不流下。取適量微乳原位凝膠劑樣品，去離子水稀釋100倍，用PHS-3E型pH計測定微乳原位凝膠pH。結(jié)果該制劑平均pH為6.17±0.06（n=3），與正常人鼻腔分泌液pH（5.5～6.5）相近［6］，說明該

制劑pH適合鼻腔給藥。

2.4.2 流變學(xué)性質(zhì) 采用DV-Ⅲ流變儀，控制溫度為 （33±0.5）℃ （人體鼻腔溫度32～34℃［7］），選擇小量樣品適配器 （SC4-31號轉(zhuǎn)子），分別考察微乳原位凝膠劑在加入人工鼻液前后剪切速率增大時黏度的變化情況。結(jié)果見圖1。

未加入人工鼻液的制劑具有一定的黏度，隨剪切速率的增大呈下降趨勢；加入人工鼻液后制劑黏度明顯增大，隨剪切速率的增大黏度呈明顯下降趨勢，當(dāng)體系黏度降低到一定值后，黏度隨剪切率的變化趨于平穩(wěn)，表現(xiàn)出假塑性流體的特征，這種特征對鼻液的分泌影響較小，對鼻腔的刺激也較小。加入人工鼻液后制劑黏度值＞5 Pa·s，在鼻腔中黏附性能較好［8］，適合鼻腔給藥。

2.4.3 體外釋放 分別精密量取4.0mL的復(fù)方薄荷腦微乳凝膠液及復(fù)方薄荷腦滴鼻液 （原制劑）于透析袋MD34中，透析袋置于帶蓋錐形瓶內(nèi)，加入新鮮配制人工鼻液50 mL作為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100 r/min，（33±0.5）℃，依次于5、15、30、60、90、180、240、360、480、600 min取樣1.0 mL，每次取樣后補(bǔ)加等體積的釋放介質(zhì)。取出的樣品經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾過，HPLC法測定其釋藥量，計算各時間點(diǎn)藥物的累積釋放百分率 （Q），繪制體外釋放曲線，見圖2。用零級方程、一級方程、Higuchi方程對釋放曲線進(jìn)行擬合，按r值最大原則來判斷各模型的擬合優(yōu)劣，結(jié)果見表1。

圖2 微乳凝膠劑與原制劑累積釋放百分率Fig.2 In vitro release of MBGs and nasal d rops

表1 釋藥曲線擬合結(jié)果Tab.1 Fitting equations of drug release

兩組制劑釋藥均呈緩慢上升趨勢，微乳原位凝膠劑的釋藥速率顯著高于原制劑，其在前6 h釋放較快，10 h時釋放達(dá) 33.58%，原制劑僅為7.60%。微乳原位凝膠劑中藥物釋藥遵循Higuchi方程，具顯著的緩釋作用，原制劑藥物的釋放在3種模型中擬合r值均較高，接近0.98，推測其原因可能是原制劑中的溶劑為液狀石蠟，含量達(dá)98.0%，阻滯了藥物的釋放。對于微乳原位凝膠劑而言，藥物先從微乳內(nèi)油相擴(kuò)散到外水相，再從膠凝網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中釋放出來，因而有效延緩了藥物從基質(zhì)中的釋放［9］。

2.4.4 離體黏膜透過試驗 采用藥物透皮擴(kuò)散試驗儀，擴(kuò)散面積為2.89 cm2。處置干凈的新鮮豬大腸剝離脂肪組織后，取大腸黏膜層用生理鹽水清洗干凈，黏膜層向上固定在供給池與接受池之間，接收池內(nèi)加入人工鼻液 （為達(dá)到藥物漏槽條件，加入5%Tween-80和5%甘油），置溫度 （37± 0.5）℃的水浴恒溫振蕩器中平衡20 min；分別取2.5 mL微乳原位凝膠及原制劑均勻覆蓋黏膜上，轉(zhuǎn)速 300 r/min，于 5、15、30、60、90、180、240、360、480、600 min從接收池取樣1.0 m L，每次取樣后補(bǔ)加同體積人工鼻液，取得的樣品經(jīng)

0.22μm微孔濾膜濾過，HPLC法測定其釋藥量，見圖3。

結(jié)果10 h時離體黏膜微乳凝膠組累積透過率為11.79%，原制劑組為2.48%。表明微乳凝膠劑透黏膜釋放速度較原制劑快，其黏膜透過性更佳。

圖3 微乳凝膠劑及原制劑隨時間離體黏膜透過率Fig.3 In vitro permeation behavior of MBGs and nasal drops

2.4.5 對大鼠鼻黏膜形態(tài)的影響 雄性SD大鼠，隨機(jī)分成生理鹽水組、空白基質(zhì)組、原制劑組、微乳凝膠組、微乳凝膠恢復(fù)組，每組8只。各組每日給藥3次，以連接PE塑料軟管的微量注射器定量注入30μL相應(yīng)液體進(jìn)大鼠鼻孔，連續(xù)給藥7 d，微乳凝膠恢復(fù)組停藥后繼續(xù)觀察2 d。以10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠后斷頭處死，立刻開放鼻腔取鼻中隔黏膜，以0.01 mol/L、pH 7.4 PBS緩沖液洗血液和黏液，放置于10%中性緩沖甲醛溶液中固定，4℃保存，制備石蠟切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。

圖4是進(jìn)行HE染色后在200倍電子顯微鏡下觀察到的大鼠鼻黏膜圖，可觀察到生理鹽水組（A）鼻黏膜細(xì)胞大部分排列緊密，原制劑組 （C）少部分上皮細(xì)胞有破損，有輕度充血及炎性細(xì)胞浸潤現(xiàn)象；空白基質(zhì)組 （B）與微乳原位凝膠組（D）鼻黏膜細(xì)胞有少量的炎性細(xì)胞浸潤現(xiàn)象，微乳原位凝膠組充血現(xiàn)象明顯，提示微乳凝膠劑中的基質(zhì)、輔料及藥物均可能對黏膜產(chǎn)生刺激作用；微乳原位凝膠恢復(fù)組 （E）有輕微充血及炎性細(xì)胞浸潤，說明停藥后能夠較快恢復(fù)，表明基質(zhì)、輔料及藥物所致的黏膜損傷是可逆的。

3 討論

圖4 各實驗組的組織切片F(xiàn)ig.4 H istological sections of the nasal m ucosa in fiveexperimental groups

藥物從基質(zhì)中的釋放是影響滲透和吸收的限速步驟。本研究中微乳原位凝膠劑是水溶性凝膠基質(zhì)，可與人工鼻液相混溶，其表面活性劑、助表面活性劑可以增加藥物的溶解度及上皮細(xì)胞黏膜通透性，促進(jìn)藥物通過黏膜［10］，其與薄荷腦、樟腦的親和力小，藥物的釋放易于親和力大的基質(zhì)；原制劑中液狀石蠟是一類疏水性強(qiáng)的蠟類阻滯基質(zhì)，與人工鼻液不相混溶，與薄荷腦、樟腦的親和力大，對藥物的釋放阻滯效應(yīng)遠(yuǎn)高于水溶性凝膠基質(zhì)，所以在體外釋放度和離體黏膜透過性試驗中，微乳原位凝膠劑均顯著優(yōu)于原制劑。離體黏膜透過性試驗中，因受鼻黏膜取材面積、取材新鮮度、損傷程度等因素的影響，無法達(dá)到動物鼻黏膜取材要求［11］，而選擇了新鮮的豬大腸黏膜進(jìn)行試驗，雖然豬大腸黏膜無法代替鼻黏膜，但在相同試驗條件下，試驗結(jié)果在一定程度上也能反映制劑的黏膜透過性。

本研究對復(fù)方薄荷腦微乳原位凝膠滴鼻液的膠凝性、滲透性和安全性進(jìn)行了系統(tǒng)考察，結(jié)果顯示該制劑在非生理條件下有良好的流動性，在生理條件下具良好的凝膠性能及黏附性，預(yù)期鼻腔給藥后可延長藥物局部滯留時間、利于發(fā)揮藥效，且制劑具有良好的緩釋特性，能顯著改善體外釋放度和離體黏膜透過性，刺激性小。本研究為劑型改進(jìn)奠定了基礎(chǔ)，為相關(guān)新產(chǎn)品開發(fā)提供參考。

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Evaluation of com pound m icroemulsion based in situ gel containing menthol

LIU Chen1，2， REN Zong-fen1， LIJian-li1， HU Jin2， WANGWen-ping2，3，4*

（1.General Hospitalof Ningxia Medical University，Yinchuan 75OOO4，China；2.School of Pharmacy，Ningxia Medical University，Yinchuan 75OOO4，China；3.Ningxia Engineering&Technology Research Center for Modernization of IslamicMedicine，Yinchuan 75OOO4，China；4.Key Lab for Islamic

MedicineModernization，Ministry of Education，Yinchuan 75OOO4，China）

AIM To evaluate the efficacy of nasalmicroemulsion based in situ gel（MBG）made up ofmenthol，camphor and liquid paraffin.METHODS The preparation made from amixture ofmenthol and camphor as eutectic microemulsion for in situ gel，had its appearance，pH，rheological property，dissolution，in vitro mucosa permeability and morphology examined.RESULTS The in vitro release profile conformed to Higuchi model，33.58%cumulative release at10 h was superior to the previous7.60%value of nasal dropswithoutmicroemulsion. The in vitro permeation percentage 11.49%was almost5 folds of the 2.48%nasal drops withoutmicroemulsion. The irritability induced by MBG was rare and slight and reversible.CONCLUSION MBG of compound menthol excels in in vitro release and permeation，and should be appropriate for clinical use.

compound menthol；microemulsion；in situ gel；nasal drops；in vitro release

R944

A

1001-1528（2015）12-2632-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.013

2015-05-22

2012年寧夏回族自治區(qū)自然科學(xué)基金項目 （NZ1226）

劉 晨 （1975—），女，碩士，副主任藥師，研究方向為藥物制劑與醫(yī)院藥學(xué)。Tel：（0951）6743516，E-mail：lch6767@ 163.com

*通信作者：王文蘋 （1977—），女，博士，教授，研究方向為新型遞藥系統(tǒng)及載藥材料。Tel：（0951）6880581，E-mail：wangwenpingg @sina.com