生慧湯對糖尿病腦病模型大鼠認知障礙及神經(jīng)病理改變的影響

程 玥， 陳淑嫻， 張 雪， 胡宗苗， 張曉雙， 劉繼平*

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥理實驗中心，陜西 咸陽712046；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理實驗室，陜西咸陽712046）

生慧湯對糖尿病腦病模型大鼠認知障礙及神經(jīng)病理改變的影響

程 玥1， 陳淑嫻2， 張 雪2， 胡宗苗2， 張曉雙2， 劉繼平2*

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥理實驗中心，陜西 咸陽712046；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理實驗室，陜西咸陽712046）

目的 觀察生慧湯 （熟地黃、山茱萸、遠志、酸棗仁、柏子仁等）對糖尿病腦病模型大鼠認知功能及神經(jīng)病理改變的影響。方法 90只雄性SD大鼠，除空白組 （n=15）外均給予高脂高糖飼料50 d，腹腔注射鏈脲佐菌素建立2型糖尿病腦病大鼠模型，隨機均分為模型組、石杉堿甲組、吡拉西坦組、生慧湯低、高劑量組，給藥30 d，Morris水迷宮法進行行為學(xué)測試和取血檢測血糖，部分大鼠處死取腦制備海馬組織勻漿，檢測乙酰膽堿酯酶 （AchE）、糖基化終末產(chǎn)物 （AGEs）和乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶 （ChAT），其余大鼠取腦組織病理切片，并進行糖基化終末產(chǎn)物受體（RAGE）和核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）免疫組化染色。結(jié)果 生慧湯可明顯縮短模型大鼠的逃避潛伏期和探索距離；顯著延長目標(biāo)象限游泳時間，增多站臺穿越次數(shù)；降低空腹血糖，增加大鼠體質(zhì)量；升高海馬組織中ChAT活性，降低AchE活性及AGEs水平；免疫組化染色顯示生慧湯組海馬組織齒狀回區(qū)RAGE和NF-κB表達減少。結(jié)論 生慧湯可明顯改善糖尿病腦病模型大鼠認知障礙，膽堿能神經(jīng)功能，海馬組織病變，具有一定腦保護作用。

生慧湯；糖尿病腦病；認知障礙；神經(jīng)病理改變。

糖尿病腦病（diabetic encephalopathy，DE）是糖尿病糖代謝紊亂引起的血管改變損害中樞神經(jīng)系統(tǒng)，使大腦結(jié)構(gòu)、神經(jīng)生理及神經(jīng)精神等方面發(fā)生病理性改變，以獲得性認知和行為缺陷為特征［1］，臨床主要表現(xiàn)為輕、中度認知功能障礙，學(xué)習(xí)和記憶能力下降［1-3］，與腦老化、老年中風(fēng)及老年癡呆 （AD）均有密切聯(lián)系［4-6］，是誘發(fā)AD的一個危險因素。近年來，隨著糖尿病發(fā)病率的逐年增加，其對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響也越來越引起人們的重視。國外有報道1 455例成年糖尿病患者中981人經(jīng)1年觀察后，101人產(chǎn)生了癡呆，其中77例為老年性癡呆，統(tǒng)計學(xué)處理顯示，糖尿病患者發(fā)生癡呆的危險性顯著高于正常人群［7］。目前對糖尿病腦病的治療主要在控制血糖的基礎(chǔ)上，采用腦血管擴張劑、抗膽堿能藥物、神經(jīng)營養(yǎng)劑等進行治療，但這幾類藥物療效有限，不良反應(yīng)也時有報道，尋找安全、可靠、有效的治療藥物仍為臨床急需，中藥因其毒副作用小、價位低廉、在治療腦損傷引起的認知功能障礙方面的療效備受關(guān)注。本課題組在前期文獻及實驗研究的基礎(chǔ)上，對生慧湯改善糖尿病腦病大鼠模型認知障礙及神經(jīng)病理改變的作用及其機制進行了研究，為該方臨床使用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥品與試劑 生慧湯 ［處方組成：熟地30 g、山茱萸12 g、遠志6 g、生棗仁15 g、柏子仁（去油）15 g、茯神9 g、人參9 g、石菖蒲1.5 g、白芥子6 g］，藥材均購自咸陽天天樂醫(yī)藥超市，按處方比例各稱取適量，加10倍量水浸泡30 min，加熱煮沸，文火煎煮1 h，趁熱濾過；再加8倍量水，同法分別煎煮40 min及30 min，合并3次濾液，減壓濃縮至含生藥1 g/m L，藥液4℃冰箱保存?zhèn)溆谩ｆ滊遄艟?（STZ），購自美國Sigma公司；吡拉西坦片 （批號130702，上海華源安徽仁濟制藥有限公司）；石杉堿甲片 （批號131105，河南太龍藥業(yè)股份有限公司）；AGEs、AchE和ChATELISA試劑盒（批號201405），均購于艾萊薩生物科技（上海）有限公司；RAGE和NF-κB免疫組化試劑盒，購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 儀器 Morris水迷宮（上海吉量軟件科技有限公司）；BT224S電子天平 （賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng) （成都泰盟軟件有限公司）；Eon全波長酶標(biāo)儀 （美國BioTek公司）；Thermo-86度低溫冰箱（美國Thermo公司）；微量移液器 （上海求精生化試劑儀器有限公司），TGL-16M臺式高速冷凍離心機 （湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）；三諾安穩(wěn)血糖儀（三諾生物傳感股份有限公司）。

1.3 動物 雄性SD大鼠，清潔級，體質(zhì)量250～300 g，由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號SCXK（軍）2012—006；飼養(yǎng)環(huán)境：陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥理實驗中心，動物分籠飼養(yǎng)，保持12 h晝夜節(jié)律，室溫 （22±1）℃，自由飲水?dāng)z食。

2 方法

2.1 造模與分組 雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，對其進行水迷宮篩選實驗，以確定認知能力正常、認知能力低下和認知能力超常的動物。具體方法為：在一個實驗日內(nèi)，每只大鼠連續(xù)從同一象限投入訓(xùn)練3次，每次記錄找到平臺時間，以每只大鼠平均值小于90 s為合格。合格大鼠除空白組（n=15）給予基礎(chǔ)飼料外，其余大鼠給予自制高脂高糖飼料 （基礎(chǔ)飼料59%、豬油18%、蔗糖20%、蛋黃3%）喂養(yǎng)50 d后，一次性腹腔注射STZ 30 mg/kg（臨用前溶于0.1 mol/L、pH 4.2的檸檬酸緩沖液中，配置成1%的質(zhì)量分數(shù)），72 h后尾靜脈采血用血糖儀測血糖，以血糖≥16.7 mmol/L，且水迷宮試驗認知功能顯著缺損者 （同法測試與造模前比較）為糖尿病腦病造模成功［8］，成模75只大鼠隨機分為模型組、吡拉西坦組（0.48 g/kg）、石杉堿甲組 （40μg/kg）、生慧湯低、高劑量組 （5.175、10.35 g/kg），灌胃給藥，空白組和模型組均灌胃等容量生理鹽水，1次/d，給藥30 d，給藥期間動物自由進食進水，未使用胰島素及其它降糖藥物。

2.2 Morris水迷宮實驗 最后一次灌胃后1 h每

組隨機取10只大鼠，分上、下午兩個時間段，每個時間段訓(xùn)練2次，每次分別從4個不同的標(biāo)記點（在4個象限中平均分布），將大鼠面向池壁放入水中，記錄90 s內(nèi)找到平臺所需時間 （逃避潛伏期）及搜索距離，若90 s內(nèi)未找到平臺，將大鼠置于平臺上停留20 s后移出迷宮，潛伏期記為90 s。每次至少間隔30 min，訓(xùn)練4 d，第5天撤除平臺，任選1個入水點將大鼠面向池壁投入水中，記錄其在90 s內(nèi)跨過虛擬平臺的穿越次數(shù)及目標(biāo)象限 （原站臺象限）的游泳時間。

2.3 取材與標(biāo)本處理 水迷宮實驗結(jié)束后，禁食不禁水12 h，每組隨機選取4只大鼠，麻醉后，4%多聚甲醛0.1 mol/L磷酸緩沖液（pH 7.4）灌注固定，開顱取腦，冠狀位取視交叉向尾端3～4 mm組織塊，投入相同固定液于4℃固定1周后，常規(guī)石蠟包埋，冠狀切片，進行RAGE和NF-κB免疫組化染色；各組選取海馬部位共8個不重復(fù)視野，運用BI-2 000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)對切片進行分析，統(tǒng)計平均灰度值。每組剩余大鼠稱重，尾靜脈采血測血糖后處死，迅速取腦，放在冰冷生理鹽水中漂洗，濾紙吸干水分，分離海馬組織，稱重，在冰浴下用勻漿器勻漿，制成質(zhì)量體積比為10%的組織勻漿，離心（3 500 r/min）10 min，取上清液嚴格按試劑盒說明測定AchE、AGEs和ChAT。

3 結(jié)果

3.1 對糖尿病腦病模型大鼠水迷宮實驗成績的影響 水迷宮實驗第1天各組間潛伏期、探索距離基本無顯著性差異，與空白組比較，從第2天起，模型組逃避潛伏期、探索距離顯著延長 （P＜0.01或P＜0.05），目標(biāo)象限 （Ⅱ象限）游泳時間明顯縮短（P＜0.01），站臺穿越次數(shù)明顯減少 （P＜0.01）；而與模型組相比，第3天吡拉西坦組潛伏期明顯縮短 （P＜0.05），第4天吡拉西坦組、石杉堿甲組、生慧湯高劑量組潛伏期明顯縮短 （P＜0.05或P＜0.01），第4天石杉堿甲組探索距離明顯縮短 （P＜0.05），從第2天起，生慧湯高劑量組探索距離明顯縮短 （P＜0.05），生慧湯高劑量組目標(biāo)象限 （Ⅱ象限）的游泳時間明顯延長 （P＜0.05），吡拉西坦組、石杉堿甲組、生慧湯高劑量組站臺穿越次數(shù)增多 （P＜0.05） （見表1～3，圖1）。

表1 生慧湯對糖尿病腦病模型大鼠水迷宮試驗潛伏期的影響 （，n=10）Tab.1 Effect of Shenghui Decoction on the latency time in M orriswater maze in DE rats（，n=10）

表1 生慧湯對糖尿病腦病模型大鼠水迷宮試驗潛伏期的影響 （，n=10）Tab.1 Effect of Shenghui Decoction on the latency time in M orriswater maze in DE rats（，n=10）

注：與空白組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組別 劑量潛伏期/s第1天 第2天 第3天 第4天空白組 —75.50±17.48 59.86±14.35 37.18±12.89 24.80±23.54模型組 — 89.14±0.38 87.91±3.51△△ 60.17±26.40△ 56.15±21.65△△吡拉西坦組 0.48 g/kg 89.25±0.50 64.85±29.07 23.52±29.87▲ 29.66±32.28▲石杉堿甲組 40μg/kg 89.29±0.49 70.34±29.94 44.59±35.68 21.99±15.55▲▲生慧湯低劑量組 5.175 g/kg 87.94±3.39 61.97±29.07 52.36±35.09 41.19±34.53生慧湯高劑量組 10.35 g/kg 89.00±0.00 55.43±39.60 35.12±37.72 26.37±23.52▲

表2 生慧湯對糖尿病模型大鼠水迷宮試驗探索距離的影響 （，n=10）Tab.2 Effect of Shenghui Decoction on the path length in M orris water maze in DE rats（，n=10）

表2 生慧湯對糖尿病模型大鼠水迷宮試驗探索距離的影響 （，n=10）Tab.2 Effect of Shenghui Decoction on the path length in M orris water maze in DE rats（，n=10）

注：與空白組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05

組別 劑量 探索距離/m第1天 第2天 第3天 第4天空白組 —17.81±4.51 11.07±3.96 6.96±5.44 5.06±6.25模型組 — 20.55±4.63 20.13±5.40△△ 13.90±7.68△ 12.18±8.39△吡拉西坦組 0.48 g/kg 20.63±1.70 12.37±6.37 9.65±3.14 6.50±6.75石杉堿甲組 40μg/kg 21.68±3.38 14.14±9.62 9.29±7.51 5.65±4.86▲生慧湯低劑量組 5.175 g/kg 18.51±5.57 13.87±3.31 8.92±4.15 5.87±4.85生慧湯高劑量組 10.35 g/kg 18.14±3.93 11.95±7.40▲ 8.10±5.63▲ 5.71±5.16▲

表3 生慧湯對糖尿病腦病大鼠水迷宮試驗?zāi)繕?biāo)象限時間和穿越次數(shù)的影響（，n=10）Tab.3 Effects of Shenghui Decoction on the percentage of time and number of crossings in Morris water maze in DE rats（，n=10）

表3 生慧湯對糖尿病腦病大鼠水迷宮試驗?zāi)繕?biāo)象限時間和穿越次數(shù)的影響（，n=10）Tab.3 Effects of Shenghui Decoction on the percentage of time and number of crossings in Morris water maze in DE rats（，n=10）

注：與空白組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05

組別 劑量 Ⅱ象限時間/% 站臺穿越次數(shù)/次空白組 —31.77±6.94 9.17±2.14模型組 — 18.62±6.38△△ 2.29±1.70△△吡拉西坦組 0.48 g/kg 29.03±9.19 6.50±2.65▲石杉堿甲組 40μg/kg 26.87±6.47 5.40±2.61▲生慧湯低劑量組 5.175 g/kg 26.80±10.64 5.00±3.00生慧湯高劑量組 10.35 g/kg 28.53±7.26▲ 6.43±3.26▲

圖1 生慧湯對糖尿病腦病模型大鼠M orris水迷宮游泳軌跡的影響Fig.1 Effect of Shenghui Decoction on the sw im pattern in M orris water maze in DE rats

3.2 對糖尿病腦病模型大鼠血糖、體質(zhì)量、AchE、ChAT和AGEs的影響 與空白組比較，模型組血糖、AchE、AGEs水平顯著增加（P＜0.01），體質(zhì)量、ChAT水平顯著降低 （P＜0.01）；與模型組比較，生慧湯低、高劑量組血糖值顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），生慧湯高劑量組大鼠體質(zhì)量值顯著性升高 （P＜0.05），吡拉西坦組、石杉堿甲組、生慧湯高劑量組AchE水平顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），吡拉西坦組、石杉堿甲組、生慧湯低、高劑量組ChAT水平顯著增加，AGEs水平顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），見表4、5。

表4 生慧湯對糖尿病腦病模型大鼠血糖、體質(zhì)量指標(biāo)測試結(jié)果（，n=10）Tab.4 Effects of Shenghui Decoction on the blood glucose level and the body weigh t in DE rats（，n= 10）

表4 生慧湯對糖尿病腦病模型大鼠血糖、體質(zhì)量指標(biāo)測試結(jié)果（，n=10）Tab.4 Effects of Shenghui Decoction on the blood glucose level and the body weigh t in DE rats（，n= 10）

注：與空白組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

/g空白組 —組別 劑量 血糖/（mmol·L-1）體質(zhì)量5.47±0.64 473.00±27.99模型組 — 20.74±3.55△△ 360.62±50.39△△吡拉西坦組 0.48 g/kg 18.03±2.43 362.50±53.31石杉堿甲組 40μg/kg 18.34±1.98 331.43±51.21生慧湯低劑量組 5.175 g/kg 13.95±4.87▲ 410.00±40.21生慧湯高劑量組 10.35 g/kg 12.05±5.94▲▲ 424.29±38.23▲

3.3 對各組大鼠海馬組織病理改變的影響 免疫組化染色顯示，與空白組比較，模型組大鼠海馬DG區(qū)RAGE免疫陽性細胞數(shù)明顯增多，著色明顯加深，平均灰度值明顯降低 （P＜0.01）；與模型組比較，吡拉西坦組、石杉堿甲組、生慧湯組大鼠海馬DG區(qū)RAGE免疫陽性細胞數(shù)明顯降低，著色較淺，平均灰度值明顯升高 （P＜0.01），見圖2、表6；與空白組比較，模型組大鼠海馬DG區(qū)顆粒細胞層和皮質(zhì)神經(jīng)元NF-κB免疫反應(yīng)陽性細胞多且著色深，平均灰度值明顯降低 （P＜0.01）；與模型組比較，吡拉西坦組、石杉堿甲組、生慧湯組大鼠海馬DG區(qū)顆粒細胞層和皮質(zhì)神經(jīng)元NF-κB免疫反應(yīng)陽性細胞較少，平均灰度值明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）見圖3、表6。

表5 生慧湯對糖尿病腦病模型大鼠AchE、ChAT和AGEs指標(biāo)測試結(jié)果（，n=10）Tab.5 Effect of Shenghui Decoction on ChAT，AchE enzymes activities and AGEs content in DE rats（，n=10）

表5 生慧湯對糖尿病腦病模型大鼠AchE、ChAT和AGEs指標(biāo)測試結(jié)果（，n=10）Tab.5 Effect of Shenghui Decoction on ChAT，AchE enzymes activities and AGEs content in DE rats（，n=10）

注：與空白組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組別 劑量 AchE/（U·L-1） ChAT/（U·L-1） AGEs/（ng·m L-1）空白組 — 130.32±16.25 62.28±9.72 345.68±10.31模型組 — 206.83±20.32△△ 37.00±4.65△△ 515.34±25.65△△吡拉西坦組 0.48 g/kg 145.80±23.68▲ 55.15±7.68▲ 443.01±11.24▲石杉堿甲組 40μg/kg 141.76±22.53▲▲ 51.61±1.71▲ 388.00±72.08▲▲生慧湯低劑量組 5.175 g/kg 181.51±10.99 52.15±4.88▲ 442.50±45.75▲生慧湯高劑量組 10.35 g/kg 141.20±30.93▲▲ 49.13±3.19▲▲ 394.79±94.02▲

圖2 生慧湯對糖尿病腦病模型大鼠海馬組織凋亡的影響（RAGE染色）Fig.2 Effect of Shenghui Decoction on RAGE expressions in hippocam pus in DE rats

圖3 生慧湯對糖尿病腦病模型大鼠海馬組織凋亡的影響（NF-κB染色）Fig.3 Effect of Shenghui Decoction on the NF-κB expressions in hippocam pus in DE rats

3 討論

糖尿病腦病臨床上表現(xiàn)為認知功能障礙及相應(yīng)的大腦形態(tài)學(xué)和生理學(xué)改變［9-10］，是導(dǎo)致患者癡呆的主要因素之一，目前認為，血糖紊亂引起的直接損害、血腦屏障結(jié)構(gòu)改變、氧化應(yīng)激、糖基化終末產(chǎn)物 （AGEs）增多、神經(jīng)營養(yǎng)因子缺乏、膽堿能神經(jīng)功能衰退等方面的改變均參與了其發(fā)病過程［10-11］。中醫(yī)藥在防治糖尿病及中樞認知疾病方面有悠久的歷史，糖尿病腦病應(yīng)歸屬于中醫(yī)消渴病合并呆病、健忘的范疇，在一些中醫(yī)古籍關(guān)于消渴病的兼癥中已有所認識，如李杲 《蘭室秘藏》中記載消渴可出現(xiàn) “上下齒皆麻，舌根強硬，腫痛，四肢痿弱……喜怒善忘”。生慧湯出自 《辨證錄》卷四，為傳統(tǒng)經(jīng)典名方，由熟地、山茱萸、遠志、生棗仁、柏子仁 （去油）、茯神、人參、菖蒲、白芥子9味藥物組成。為心腎兼補，上下互資，實治健忘之圣方。臨床研究表明，生慧湯對癡呆具有較好的防治效果［12］。陳氏認為治療健忘，石菖蒲與人參須同用，才能取得強記的真正效果?，F(xiàn)代藥理研究表明，熟地黃、遠志、茯神、石菖蒲等中藥對實驗性動物學(xué)習(xí)記憶障礙有著不同程度的保護和改善作用［13］。

表6 生慧湯對糖尿病腦病模型大鼠海馬組織中RAGE、NF-κB表達平均灰度值的影響 （）Tab.6 Effect of ShenghuiDecoction on RAGE，NF-κB average gray level in hippocampus in DE rats（）

表6 生慧湯對糖尿病腦病模型大鼠海馬組織中RAGE、NF-κB表達平均灰度值的影響 （）Tab.6 Effect of ShenghuiDecoction on RAGE，NF-κB average gray level in hippocampus in DE rats（）

注：與假手術(shù)組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

灰度值空白組 —組別 劑量 RAGE平均灰度值NF-κB平均128.66±7.19 121.44±11.1模型組 — 93.62±3.62△△ 91.99±2.83△△吡拉西坦組 0.48 g/kg 110.78±7.38▲▲ 104.99±5.16▲▲石杉堿甲組 40μg/kg 119.42±2.27▲▲ 113.68±5.20▲▲生慧湯低劑量組 5.175 g/kg 110.80±5.47▲▲ 111.08±4.07▲▲生慧湯高劑量組 10.35 g/kg 112.65±2.88▲▲ 117.04±1.60▲▲

本實驗通過水迷宮進行大鼠神經(jīng)認知模型的驗證和神經(jīng)認識治療可行性的評估［14-15］，大鼠逃避時間、摸索距離越短，穿越次數(shù)越多、目標(biāo)象限活動時間越長，提示大鼠學(xué)習(xí)記憶能力越強。本研究水迷宮實驗數(shù)據(jù)顯示，生慧湯能顯著減少大鼠逃避潛伏期和摸索距離，增加穿越次數(shù)和目標(biāo)象限活動時間，表明生慧湯可明顯改善糖尿病腦病模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

2型糖尿病在臨床上以血糖增高為主要表現(xiàn)，以高胰島素血癥和胰島素抵抗為病理基礎(chǔ)，本實驗采取高脂高糖飼料喂養(yǎng)誘導(dǎo)動物體內(nèi)葡萄糖和脂質(zhì)代謝紊亂，之后再給大鼠腹腔注射STZ，化學(xué)藥物STZ具有高特異性殺傷胰島β細胞的作用，造成β細胞大量破壞，胰島素合成和分泌減少，引起糖代謝紊亂，從而導(dǎo)致糖尿病。本研究顯示生慧湯明顯增加糖尿病腦病模型大鼠的血糖和體質(zhì)量，表明生慧湯在STZ誘導(dǎo)糖尿病實驗大鼠中具有一定的治療糖尿病效應(yīng)，這可能是其改善神經(jīng)病變的機制之一。因為高血糖是糖尿病的啟動因素，降低血糖本

身就能有效地延緩和減輕糖尿病腦病的發(fā)生發(fā)展，從而改善糖尿病大鼠學(xué)習(xí)記憶功能。

乙酰膽堿 （Ach）被認為是與學(xué)習(xí)、記憶相關(guān)最重要的神經(jīng)遞質(zhì)，其缺失的嚴重程度與癡呆程度密切相關(guān)［16］，Ach減少的程度與癡呆的嚴重性呈正相關(guān)。ChAT是催化Ach合成的酶，也是膽堿能神經(jīng)元的標(biāo)志物，乙酰膽堿又由AchE分解。

本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，生慧湯能增加ChAT的活性，增加Ach的合成，抑制AchE的活性，減少Ach的水解，且有顯著性差異。

高血糖導(dǎo)致腦組織中AGEs的沉積，AGEs的聚集能引起很多毒性反應(yīng)，它對細胞的毒性作用是通過與其特異性受體糖基化終末產(chǎn)物受體（RAGE）的結(jié)合來實現(xiàn)的。RAGE與糖尿病并發(fā)癥有密切關(guān)系。AGEs與其細胞表面受體RAGE結(jié)合后相互作用，產(chǎn)生活性氧簇 （ROS），進而活化細胞內(nèi)促炎性反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，活化的NF-κB可以刺激眾多靶基因表達，如組織因子 （TF）、血管細胞粘附分子-l（VCAM-l）以及RAGE本身的表達［17］。這些促氧化基因的激活可以造成一個促炎癥反應(yīng)的惡性循環(huán)，導(dǎo)致組織損傷的進一步發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，生慧湯能降低海馬組織中AGEs水平，降低糖尿病腦病大鼠海馬DG區(qū)RAGE和NF-κB的表達。

［1］ BiesselsG J，van der Heide L P，Kamnal A，et al.Ageing and diabetes：implications for brain function［J］.Eur JPharmacol，2002，441（1-2）：1-14.

［2］ Lupien S B，Bluhm E J，Ishii D N.Symstemic insulin-like growth factor-1 administration prevents congnitive impairment in diabetic rats，and brain IGF regulates learning/memory in normal adult rats［J］.JNeurosci Res，2003，74（4）：512-523.

［3］ 許淑蓮，金 星，任桂英，等.老年糖尿病患者某些認知功能的臨床探討［J］.中國心理衛(wèi)生雜志，1999，13（5）：307-309.

［4］ Kamal A，Biessels G J，Duis S E.Learing and hippocampal synaptic plasticity in streptozotocin-diabetic rats：interaction of diabetes and ageing［J］.Diabetologia，2000，43（4）：500-506.

［5］ Gispen W H，BiesselsG J.Cognition and synaptic plasticity in diabetes mellitus［J］.Trends Neurosci，2000，23（11）：542-549.

［6］ 盛樹力.糖尿病腦病與老年癡呆［J］.中華內(nèi)分泌代謝雜志，2001，17（1）：58-59.

［7］ Leibson C L，Rocca W A，Hawson V A，et al.Risk of dementia among persons with diabetes mellitus：a populationbased cohort study［J］.Am J Epidemiol，1997，145（4）：301-308.

［8］ 于德民，吳 銳，尹 濰，等.實驗性鏈脲佐菌素糖尿病動物模型的研究［J］.中國糖尿病雜志，1995，3（2）：105-109.

［9］ Reijmer Y D，vander Berg E，Ruis C，etal.Cognitive dysfunction in patients with type 2 diabetes［J］.Diabetes Metab Rev，2010，26（7）：507-519.

［10］ Zhou Y，Luo Y，Dai J.Axonal and dendritic changes are associated with diabetic encephalopathy in rats：an important risk factor for Alzheimer's disease［J］.JAlzheimersDis，2013，34（4）：937-947.

［11］ Chen X，Mori T，Guo Q，Hu C，et al.Carbonyl stress induces hypertension and cardio-renal vascular injury in Dahl saltsensitive rats［J］.Hypertens Res，2013，36（4）：361-367.

［12］ 馬 捷，李 峰，宋月晗，等.“生慧湯”治療神經(jīng)類疾病的研究［J］.中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2012（17）：160-162.

［13］ 沈云輝，曹玉凈，崔 瑛，等.熟地黃對擬癡呆模型小鼠記憶力的影響及機制研究［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2007，41（4）：67-68.

［14］ Hartman R E，Lee J M，Zipfel G J，et al.Characterizing learning deficits and hippocampalneuron loss following transient global cerebral ischemia in rats［J］.Brain Res，2005，1043（1-2）：48-56.

［15］ 葉翠飛，張 麗，艾厚喜，等.兩種水迷宮實驗對擬癡呆模型學(xué)習(xí)記憶功能測試的比較［J］.中國行為醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志，2004，13（3）：256-261.

［16］ 王憲玲，賈建平，左萍萍，等.自發(fā)性2型糖尿病小鼠腦組織膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)研究［J］.首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006，27（3）：354-357.

［17］ Wantier M P，Chappey O，Corda S，et al.Activation of NADPH oxidase by AGE links oxidative stress to altered gene expression via RAGE［J］.Am J Physiol Endocrinol Metab，2001，280（5）：685-694.

Effects of Shenghui Decoction on cognitive function and nerve pathological change in rats with diabetic encephalopathy

CHENG Yue1， CHEN Shu-xian2， ZHANG Xue2， HU Zong-miao2， ZHANG Xiao-shuang2，LIU Ji-ping2*

（1.Laboratory of Pharmacology，Shanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712O46，China；2.Laboratory of Traditional Chinese Medicine Pharmacology，Shanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712O46，China）

AIM To observe Shenghui Decoction（Rehmanniae Radix praeparata，Corni Fructus，Polygalae Radix，Ziziphi spinosae Semen，Platycladi Semen，etc.）on cognitive function and nerve pathological change in ratswith diabetic encephalopathy.METHODS Ninety male SD rats，except the blank group（n=15），were given high fat and sugar feed，and intraperitoneal injection of STZ to establish type 2 diabetes encephalopathy rats. Themodeled ratswere equally and random ly divided into themodel group，huperzine A group，piracetam group，Shenghui Decoction low and high dose group.All drugs were administrated for 30 days.The behavior tests were performed on the Morris watermazemethod.The rats blood glucose，part of rats brain hippocampus tissue homogenates were taken tomeasure the levels of ChAT，AchE and AGEs.The rest of rats'brain tissuewere carried outon pathological observation（n=15）RAGE，and NF-kappa B immunohistochemical staining.RESULTS Shenghui Decoction obviously shortened the escape latency ofmodel rats and explore distance，significantly extended target quadrant swimming time，increased the platform through the number，reduced fasting blood glucose，increased

Shenghui Decoction；diabetic encephalopathy；cognitive impairment；nerve pathological changes

R285.5

A

1001-1528（2015）12-2579-06

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.002

2014-11-20

陜西中醫(yī)藥大學(xué)科研基金項目 （2015QN23）

程 玥 （1983—），女，實驗師，碩士，研究方向為中藥及復(fù)方藥理作用研究。Tel：13572761121，E-mail：13572761121@ 126.com

*通信作者：劉繼平 （1978—），男，副教授，博士，研究方向為中藥精神神經(jīng)藥理學(xué)。Tel：18391803781，E-mail：liwenjie780711@ 163.com

the weight of body，elevated ChAT activity in the hippocampus，lessened AchE and AGEs level.Immunohistochemical staining showed that Shenghui Decoction decreased hippocampus DG RAGE and the NF-kappa B expression.CONCLUSION Shenghui Decoction can obviously improve cognitive impairment，the function of cholinergic nerve，and hippocampal tissue lesions，with certain brain protection.