細(xì)葉石仙桃乙酸乙酯部位化學(xué)成分的分離與鑒定

劉 量, 王 委, 殷啟蒙, 嚴(yán) 鑫, 黃怡新, 樊逸云, 范 云, 邵夢(mèng)楠, 倪晨暉, 劉 濤

(揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院, 江蘇 揚(yáng)州 225009)

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細(xì)葉石仙桃乙酸乙酯部位化學(xué)成分的分離與鑒定

劉 量*, 王 委, 殷啟蒙, 嚴(yán) 鑫, 黃怡新, 樊逸云, 范 云, 邵夢(mèng)楠, 倪晨暉, 劉 濤

(揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院, 江蘇 揚(yáng)州 225009)

采用硅膠柱色譜、ODS柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜及半制備高效液相色譜等方法對(duì)細(xì)葉石仙桃進(jìn)行分離純化,研究細(xì)葉石仙桃乙酸乙酯部位的化學(xué)成分,并運(yùn)用核磁共振波譜法鑒定化合物的結(jié)構(gòu). 結(jié)果表明,從細(xì)葉石仙桃乙酸乙酯部位分離得到的6種化合物分別是1,5-二羥基-2,7-二甲氧基-9,10-二氫菲(Ⅰ)、佛手柑內(nèi)酯(Ⅱ)、甲氧基歐芹酚(Ⅲ)、異香草酸(Ⅳ)、阿魏酸二十六酯(Ⅴ)和二十四亞甲基環(huán)阿爾廷醇(Ⅵ),且化合物Ⅰ～Ⅴ為首次從該植物中分離得到.

細(xì)葉石仙桃; 分離純化; 化學(xué)成分

細(xì)葉石仙桃(PholidotacantonensisRolfe.)是中藥小石仙桃的基源植物,為蘭科石仙桃屬,以干燥全草或假鱗莖入藥,主要分布在湖南、貴州、重慶等地,具有清熱涼血、滋陰潤(rùn)肺和解毒等功效[1]. 細(xì)葉石仙桃資源豐富,民間應(yīng)用歷史悠久,可用于多種炎癥的治療且療效確切,具有潛在的開發(fā)應(yīng)用前景.目前關(guān)于細(xì)葉石仙桃的化學(xué)成分和藥理作用方面的報(bào)道較少,僅李建晨[2],李斌[3]等從細(xì)葉石仙桃中分離得到以9,10-二氫菲、菲醌、聯(lián)芐為主的十幾種化合物. 9,10-二氫菲類為石仙桃屬植物的特征性成分,且廣泛存在于該屬植物中[4-7]．9,10-二氫菲類成分具有抗腫瘤[8]、抗感染[9-10]、抗氧化[11]等多種生物活性,研究?jī)r(jià)值頗高. 本課題組擬利用多種色譜方法從細(xì)葉石仙桃的乙酸乙酯部位分離提取各化合物,然后運(yùn)用核磁共振波譜法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,以期豐富細(xì)葉石仙桃化學(xué)成分的相關(guān)研究成果,并為深入研究和開發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)．

1 儀器與材料

Avance 600型核磁共振儀(Bruker公司,瑞士);LC 3000型高效液相色譜儀(北京創(chuàng)新通恒科技有限公司,北京);Trace DSQ II氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、LCQ Deca XP Max液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(Thermo公司,美國(guó));半制備色譜柱Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ(10 mm×250 mm, 填料粒徑5 μm, Nacalai Tesque公司,日本); Sephadex LH-20色譜柱(Parmacia Bioteck公司,美國(guó));ODS色譜柱(40～63 μm, Merck公司,德國(guó));硅膠(孔徑為0.074～0.147 mm和0.048～0.074 mm, 即100～200目和200～300目)、薄層層析硅膠H和硅膠GF254(青島海洋化工廠,青島).

高效液相色譜用色譜甲醇(體積分?jǐn)?shù)≥99.8%, 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,色譜純);分離純化用石油醚、乙酸乙酯、丙酮和氯仿(體積分?jǐn)?shù)≥99%,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,分析純);工業(yè)乙醇(體積分?jǐn)?shù)為95%,上海凌峰化學(xué)試劑有限公司,工業(yè)純).

實(shí)驗(yàn)所用細(xì)葉石仙桃(PholidotacantonensisRolfe.)的帶根全草,于2014年3月采集自浙江麗水,憑證標(biāo)本(No. XYSXT20140328) 存放于揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系標(biāo)本室.

2 提取與分離

稱取細(xì)葉石仙桃干燥帶根全草15 kg,粉碎,參照文獻(xiàn)[12]中藥材的提取和萃取方法,用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇在85 ℃下回流提取4次,每次2 h,提取液經(jīng)過濾后減壓回收溶劑,得總浸膏.待總浸膏中乙醇自然揮發(fā),加入10倍體積的蒸餾水進(jìn)行分散,得到水分散液,分別用等體積的乙酸乙酯、正丁醇依次萃取水分散液4～6次,得到乙酸乙酯萃取部位和正丁醇萃取部位.稱取乙酸乙酯部位浸膏780 g,經(jīng)硅膠柱色譜分離,然后用V(二氯甲烷)∶V(甲醇)為100∶0～0∶100進(jìn)行梯度洗脫得到18個(gè)流分(Fr.1, Fr.2, …, Fr.18); Fr.2分別經(jīng)硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜、ODS柱色譜分離純化得化合物Ⅵ(39 mg); Fr.4分別經(jīng)硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜分離,制備薄層純化得化合物Ⅲ(30 mg)和Ⅴ(22 mg); Fr.5分別經(jīng)硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜分離,得到化合物Ⅰ(320 mg)、Ⅱ(450 mg)和 Ⅳ(130 mg).

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物Ⅰ: 無色片晶(丙酮); EI-MSm/z272 [M]+;1H-NMR(acetone-d6, 600 MHz)δ: 8.53(1H,s,5-OH),7.90(1H,d,J=9.0 Hz, H-4), 7.25(1H, s, 1-OH), 6.80(1H,d,J=9.0 Hz, H-3), 6.44(1H, d,J=2. 4 Hz, H-8), 6.40(1H, d,J=2.4 Hz, H-6), 3.85(3H, s, 7-OCH3), 3.75(3H, s, 2-OCH3), 2.77(2H,m,CH2), 2.67(2H,m,CH2);13C-NMR(acetone-d6, 150 Hz)δ: 143.0(C-1), 146.2(C-2), 109.1(C-3), 120.3(C-4), 127.9(C-4a), 115.9(C-4b), 156.3(C-5), 101.7(C-6), 159.6(C-7), 106.0(C-8), 141.8(C-8a), 31.2(C-9), 22.3(C-10), 124.7(C-10a), 56.3(2-OCH3),55.4(7-OCH3). 以上數(shù)據(jù)與畢志明等[7]256報(bào)道的1,5-二羥基-2,7-二甲氧基-9,10-二氫菲的數(shù)據(jù)基本一致, 故鑒定為1,5-二羥基-2,7-二甲氧基-9,10-二氫菲.

化合物Ⅱ: 白色針晶(氯仿); EI-MSm/z216 [M]+;1H-NMR(acetone-d6, 600 MHz)δ: 8.21(1H,d,J=9.6 Hz, H-4), 7.87(1H,br s, H-2′), 7.32(1H, s, H-8), 7.16(1H, br s, H-3′), 6.25(1H, d,J=9.6 Hz, H-3), 4.34(3H, s, 5-OCH3);13C-NMR(acetone-d6, 150 Hz)δ: 160.9(C-2), 113.4(C-3), 140.0(C-4), 150.9(C-5), 113.6(C-6), 159.4(C-7), 94.0(C-8), 153.9(C-9), 107.1(C-10), 146.3(C-2′), 106.4(C-3′), 60.9(5-OCH3). 以上數(shù)據(jù)與孫希彩等[13]報(bào)道的佛手柑內(nèi)酯的數(shù)據(jù)基本一致, 故鑒定為佛手柑內(nèi)酯.

化合物Ⅲ: 無色針晶(氯仿); EI-MSm/z244 [M]+;1H-NMR(CDCl3, 600 MHz)δ: 7.61(1H,d,J=9.0 Hz,H-4),7.29(1H,d,J=8.4 Hz, H-5), 6.83(1H,d,J=8.4 Hz,H-6), 6.22(1H,d,J=9.6 Hz, H-3), 5.23(1H,t,J=7.2 Hz,H-2′),3.91(3H,s,7-OCH3), 3.53(2H,d,J=7.8 Hz, H-1′), 1.84(3H,s,3′-CH3),1.67(3H,s,3′-CH3);13C-NMR(CDCl3, 150 MHz)δ: 160.4(C-2), 113.1(C-3), 144.0(C-4), 126.4(C-5), 107.6(C-6), 161.6(C-7), 118.1(C-8), 153.0(C-9), 113.2(C-10), 22.1(C-1′), 121.3(C-2′), 132.8(C-3′), 18.1(3′-CH3), 26.0(3′-CH3), 56.2(7-OCH3). 以上數(shù)據(jù)與孫希彩等[13]2046報(bào)道的甲氧基歐芹酚的數(shù)據(jù)基本一致, 故鑒定為甲氧基歐芹酚.

化合物Ⅳ: 白色粉末(氯仿); ESI-MSm/z167 [M-H]-;1H-NMR(acetone-d6, 600 MHz)δ: 7.58(1H,d,J=2.4 Hz, H-2), 7.57(1H, dd,J=7.8, 2.4 Hz, H-6), 6.91(1H,d,J=7.8 Hz, H-5), 3.90(3H,s,4-OCH3);13C-NMR(acetone-d6, 150 MHz)δ: 125.0(C-1), 115.6(C-2), 148.1(C-3),152.1(C-4),113.6(C-5),123.0(C-6),56.4(4-OCH3),170.0(COOH)．以上數(shù)據(jù)與楊素珍等[14]報(bào)道的異香草酸的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定為異香草酸.

化合物Ⅴ: 白色粉末(乙酸乙酯); EI-MSm/z558 [M]+;1H-NMR(CDCl3, 600 MHz)δ: 7.63(1H,d,J=15.6 Hz, H-7), 7.08(1H,dd,J=7.8, 1.8 Hz, H-6), 7.05(1H,d,J=1.8 Hz, H-2), 6.93(1H,d,J=7.8 Hz, H-5), 6.31(1H,d,J=15.6 Hz, H-8), 4.21(2H,t,J=6.6 Hz, OCH2CH2), 3.93(3H,s,OCH3),1.71(2H,m,OCH2CH2), 1.27[46H,br s,(CH2)23],0.90(3H,t,J=7.2 Hz,CH3);13C-NMR(CDCl3, 150 MHz)δ: 14.4,23.0,26.3,29.0,29.6,29.6,29.8,29.9,29.9,30.0,32.2,56.2,64.9,109.6,115.0,116.0,123.3,127.3,144.9,147.0,148.2,167.6. 以上數(shù)據(jù)與王國(guó)艷等[15]報(bào)道的阿魏酸二十六酯基本一致,故鑒定為阿魏酸二十六酯.

化合物Ⅵ: 白色粉末(氯仿); EI-MSm/z440 [M]+;1H-NMR(CDCl3, 600 MHz) δ: 4.72(1H,br s,H-31b),4.67(1H,br s,H-31a), 3.29(1H, dd,J=11.4, 4.2 Hz, H-3), 1.04(6H,d,J=6.8 Hz, H-26, 27), 0.98(6H,s,H-18,29),0.91(3H, overlapped, H-28), 0.91(3H, overlapped, H-21), 0.82(3H, s, H-30), 0.56(1H,d,J=4.2 Hz, H-19b), 0.34(1H,d,J=4.2 Hz, H-19a);13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ: 32.2(C-1), 30.6(C-2), 78.9(C-3), 40.7(C-4), 47.4(C-5), 21.4(C-6), 28.4(C-7), 48.2(C-8), 20.3(C-9), 26.3(C-10), 26.3(C-11), 35.8(C-12), 45.6(C-13), 49.1(C-14), 33.2(C-15), 26.7(C-16),52.5(C-17), 18.3(C-18), 30.1(C-19), 36.4(C-20), 18.6(C-21),35.3(C-22),31.6(C-23),157.1(C-24),34.1(C-25),22.1(C-26),22.3(C-27),19.6(C-28),25.7(C-29),14.3(C-30),106.2(C-31). 以上數(shù)據(jù)與Lee等[16]報(bào)道的二十四亞甲基環(huán)阿爾廷醇的數(shù)據(jù)基本一致, 故鑒定為二十四亞甲基環(huán)阿爾廷醇.

4 討論

本文報(bào)道了從細(xì)葉石仙桃的乙酸乙酯部位分離得到6種單體化合物,且化合物I ～ V均為首次從該植物中分離得到,該研究結(jié)果豐富了細(xì)葉石仙桃的化學(xué)成分. 1,5-二羥基-2, 7-二甲氧基-9,10-二氫菲(Ⅰ)為9,10-二氫菲類,文獻(xiàn)[2-3]也曾從細(xì)葉石仙桃中分離得到2種該類化合物,說明9,10-二氫菲類為細(xì)葉石仙桃特征性成分.同屬植物云南石仙桃Pholidotayunnanensis[4]165和石仙桃Pholidotachinensis[5]2122中也曾分離得到1,5-二羥基-2,7-二甲氧基-9,10-二氫菲,表明親緣關(guān)系越近的植物所含的化學(xué)成分越相似,故本研究結(jié)果也從化學(xué)分類學(xué)的角度提供了一定的證據(jù)．

[1] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì). 中華本草 [M]. 第24卷. 上海： 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社， 1999: 748.

[2] 李建晨, 馮麗, 野原稔弘. 細(xì)葉石仙桃的化學(xué)成分 [J]. 中國(guó)中藥雜志, 2008, 33(14): 1691-1693.

[3] 李斌, 高潔瑩, 李娟, 等. 細(xì)葉石仙桃乙酸乙酯部位化學(xué)成分研究 [J]. 中藥材, 2014, 37(6): 987-989.

[4] GUO Xiaoyu, WANG Jue, WANG Naili, et al. 9,10-Dihydrophenanthrene derivatives fromPholidotayunnanensisand scavenging activity on DPPH free radical [J]. J Asian Nat Prod Res, 2007, 9(2): 165-174.

[5] YAO Sheng, TANG Chunping, LI Xiqiang, et al. Phochinenins A-F, dimeric 9,10-dihydrophenanthrene derivatives fromPholidotachinensis[J]. Helv Chim Acta, 2008, 91(11): 2122-2129.

[6] CHEN Yang, CAI Shining, DENG Liang, et al. Separation and purification of 9,10-dihydrophenanthrenes and bibenzyls fromPholidotachinensisby high-speed countercurrent chromatography [J]. J Sep Sci, 2015, 38(3): 453-459.

[7] 畢志明, 王崢濤, 徐珞珊, 等. 云南石仙桃中酚類成分的研究 [J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志, 2005, 40(4): 255-258.

[8] LEE C L, CHANG F R, YEN M H, et al. Cytotoxic phenanthrenequinones and 9,10-dihydrophenanthrenes fromCalanthearisanensis[J]. J Nat Prod, 2009, 72: 210-213.

[9] HWANG J S, LEE S A, HONG S S, et al. Phenanthrenes fromDendrobiumnobileand their inhibition of the LPS-induced production of nitric oxide in macrophage RAW 264.7 cells [J]. Bioorg Med Chem Lett, 2010, 20(12): 3785-3787.

[10] DATLA P, KALLURI M D, BASHA K, et al. 9,10-Dihydro-2,5-dimethoxyphenanthrene-1,7-diol, fromEulophiaochreata, inhibits inflammatory signalling mediated by Toll-like receptors [J]. British J Pharm, 2010, 160(5): 1158-1170.

[11] WANG Jue, WANG Liyan, KITANAKA S. Stilbene and dihydrophenanthrene derivatives fromPholidotachinensisand their nitric oxide inhibitory and radical-scavenging activities [J]. J Nat Med, 2007, 61(4): 381-386.

[12] 邵建華, 趙春超, 劉墨祥. 草玉梅抗腫瘤活性成分的分離與鑒定 [J]. 揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2011, 14(2): 48-50.

[13] 孫希彩, 張春夢(mèng), 李金楠, 等. 紫花前胡的化學(xué)成分研究 [J]. 中草藥, 2013, 44(15): 2044-2047.

[14] 楊素珍, 蔣建勤. 新疆芍藥的化學(xué)成分研究 [J]. 中草藥, 2014, 45(6): 760-764.

[15] 王國(guó)艷, 吳弢, 林平川, 等. 紫菀酚類化學(xué)成分的研究 [J]. 中國(guó)中藥雜志, 2003, 10(28): 946-948.

[16] LEE S Y, CHOI S U, LEE J H, et al. A new phenylpropane glycoside from the rhizome ofSparganiumstoloniferum[J]. Arch Pharm Res, 2010, 33(4): 515-521.

(責(zé)任編輯 林 子)

The sparation and identification of the chemical constituents from ethyl acetate extract ofPholidotacantonensis

LIU Liang*, WANG Wei, YIN Qimeng, YAN Xin, HUANG Yixin,FAN Yiyun, FAN Yun, SHAO Mengnan, NI Chenhui, LIU Tao

(Sch of Med, Yangzhou Univ, Yangzhou 225009, China)

This paper studies the chemical constituents of ethyl acetate extract ofPholidotacantonensis. Compounds are seperated through silica gel, Sephadex LH-20 and ODS column chromatography and semi-HPLC, and their structures are identified by spectroscopic data and compared with those reported in the literature. The results show that six compounds are obtained from the ethyl acetate extract ofPholidotacantonensis. Their structures are elucidated as eulophiol (Ⅰ), bergapten (Ⅱ), osthole (Ⅲ), isovanillic acid (Ⅳ),E-ferulic acid hexacosyl ester (Ⅴ), 24-methylenecycloartanol (Ⅵ), respectively. Further more, Ⅰ～Ⅴ are reported from this plant for the first time.

Pholidotacantonensis; separation and purification; chemical constituent

2015-09-08. * 聯(lián)系人, E-mail: enjoyyz@163.com.

江蘇省高校自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(14KJB360005).

劉量, 王委, 殷啟蒙, 等. 細(xì)葉石仙桃乙酸乙酯部位化學(xué)成分的分離與鑒定 [J]. 揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2015, 18(4): 53-56.

R 284.1

A

1007-824X(2015)04-0053-04