蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶6調(diào)控前列腺癌發(fā)生的分子機(jī)制＊

徐 瑩，閻 英，柳云恩

1.沈陽軍區(qū)總醫(yī)院 放射治療科（沈陽 110840）；2.沈陽軍區(qū)總醫(yī)院 急診醫(yī)學(xué)部，全軍重癥戰(zhàn)創(chuàng)傷救治中心實(shí)驗(yàn)室（沈陽 110840）

前列腺癌（prostate cancer，PCa）是世界常見惡性腫瘤之一，多見于歐美等國家［1－2］。雄激素受體（androgen receptor，AR）作為核受體超家族蛋白成員，是一種配體依賴的轉(zhuǎn)錄因子，其結(jié)構(gòu)主要包括轉(zhuǎn)錄激活功能域 1（activation function 1，AF－1）及AF－2。AF－1不依賴于配體的結(jié)合，AF－2需要同源配體結(jié)合，通過招募大多數(shù)的 AR輔助因子［3－4］，參與蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)間的相互作用。當(dāng)AR與配體（如雄激素）結(jié)合后，AR與其分子伴侶解離，從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核，同時(shí)招募特定的轉(zhuǎn)錄輔助調(diào)節(jié)因子形成復(fù)合物［5］，結(jié)合到靶基因的反應(yīng)元件上，通過改變?nèi)旧w結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄［6－7］。 研究［8－9］發(fā)現(xiàn)，AR在PCa的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，它通過調(diào)控AR下游PCa相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)PCa的發(fā)生發(fā)展。迄今為止，研究發(fā)現(xiàn)大量的AR輔助調(diào)控因子，如 p68［10］、LSD1［11］、RNF6［12］、ARD1［13］、JARID1B［14］和 FLH2［15］等，在 PCa中過表達(dá)，并促進(jìn)癌癥細(xì)胞的增殖。因此，研究AR活性調(diào)控的分子機(jī)制對于PCa的治療具有重要意義。

蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶（protein arginine methyltransferases，PRMTs）家族具有催化精氨酸甲基化的作用，其功能取決于底物特異性及其亞細(xì)胞定位［16］。PRMTs根據(jù)其催化甲基化的類型可以分為3類，蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶6（protein arginine methyltransferase 6，PRMT6）屬于Ⅰ類，催化酶胍基氮的精氨酸殘基甲基化［17－18］。研究［19］發(fā)現(xiàn)，PRMT6可以抑制腫瘤抑制基因p53的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（the cyclindependent kinase，CDK）的抑制基因 p21 是PRMT6重要的直接下游靶基因，通過抑制p21從而促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞衰老。PRMT6基因敲除可以使細(xì)胞周期停滯，提示PRMT6在細(xì)胞周期調(diào)控中也起重要作用［20］。p21是多種腫瘤抑制基因和癌基因的下游基因，它參與了乳腺癌［21－22］、骨肉瘤［18］和肝癌［23］等腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

目前，PRMT6是AR的一種輔助激活因子，它不僅可以激活正常表達(dá)的AR，也可以顯著激活突變的AR。PRMT6的類固醇受體基序可以與AR的AF－2相互作用，從而起到激活作用［24］。然而，PRMT6調(diào)控PCa發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制尚不清楚。因此，本研究旨在探討PRMT6在PCa細(xì)胞中的作用及調(diào)控機(jī)制，為PCa的診斷及治療提供新的靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 前列腺增生（BPH）和PCa的免疫組織化學(xué)分析

福爾馬林固定石蠟包埋的BPH和PCa的病理切片來源于沈陽軍區(qū)總醫(yī)院。數(shù)據(jù)采集及組織應(yīng)用研究通過人體倫理研究委員會批準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)共有100例組織，其中BPH標(biāo)本50例，PCa組織標(biāo)本50例。對所有組織行免疫組織化學(xué)染色，檢測標(biāo)本PRMT6的表達(dá)水平。抗鼠的多克隆抗體PRMT6（santa，sc－271744，1∶100）、親和素生物素標(biāo)記的第2抗體及堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉素工作液孵育，DAB顯色后，核用蘇木精復(fù)染。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

CWR22Rv1、LNCaP、DU145和 VCaP細(xì)胞（購自沈陽匯佰生物科技有限公司）維持在RPMI1640（GIBCO－BRL）培養(yǎng)基中。PC3細(xì)胞維持在F12培養(yǎng)基中。所有細(xì)胞培養(yǎng)基含有10%胎牛血清（FBS）、2mmol/L谷氨酰胺、100U/mL鏈霉素和青霉素。細(xì)胞于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

1.3 質(zhì)粒、siRNA轉(zhuǎn)染

PRMT6（ID：55170）表達(dá)質(zhì)粒及siRNA由沈陽匯佰生物科技有限公司制作，體外轉(zhuǎn)染CWR22Rv1和LNCaP細(xì)胞利用LipofectamineTM 2000（Invitrogen）試劑盒，具體步驟請參照試劑說明書。

1.4 Real Time PCR

總RNA 提取應(yīng)用Trizol試劑（Invitrogen）。反轉(zhuǎn)錄使用Super－ScriptⅡ（Invitrogen），cDNAs通過Real Time PCR量化使用SYBR Premix Ex Taq（TaKaRa）和 aMx3000Pinstrument（Agilent StrataGene）儀器。PSA和KLKZ基因表達(dá)分析采用Stratagene Mx3000P軟件。

1.5 Western blot檢測

實(shí)驗(yàn)蛋白樣品加入相應(yīng)比例的SDS凝膠上樣緩沖液（6×Loading Buffer），煮沸變性5min，SDSPAGE電泳，轉(zhuǎn)膜，然后將膜移至5% 的脫脂奶粉PBST緩沖液室溫封閉1h，PBST洗膜3次。加入一抗 PRMT6（santa，sc－271744，1∶2 000）和 GAPDH（santa，sc－365062，1∶4 000），4 ℃ 孵育過夜。用PBST洗膜3次，加辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗鼠二抗，室溫孵育1h。洗膜3次，ECL顯影。

1.6 繪制細(xì)胞生長曲線和細(xì)胞增殖

分別接種22Rv1和LNCaP于12孔板中，每孔約5萬個(gè)細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染siPRMT6及對照siRNA，DHT處理及不處理。于0、24、48、72、96、120h時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，繪制細(xì)胞生長曲線。分別接種22Rv1和LNCaP于6孔板中，每孔約5萬個(gè)細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染siPRMT6及對照siRNA，DHT處理及不處理后5d，多聚甲醛固定，錐蟲藍(lán)染色，照相。

1.7 Transwell小室培養(yǎng)

22Rv1和LNCaP細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染siPRMT6及對照siRNA后，撤血清饑餓12～24h。接種5萬個(gè)細(xì)胞于Transwell小室。加入500μL含F(xiàn)BS或趨化因子的培養(yǎng)基。培養(yǎng)48h后，95%乙醇固定10 min，錐蟲藍(lán)染色，棉簽擦去小室上室內(nèi)多余的細(xì)胞，照相。

1.8 流式細(xì)胞技術(shù)

22Rv1和LNCaP分別轉(zhuǎn)染siPRMT6及對照siRNA，DHT處理及不處理24h后，胰酶消化，制成單細(xì)胞懸液，75%乙醇固定，IP染液染色，37℃孵育1h，上機(jī)檢測。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，根據(jù)資料的分布特征，分別選擇χ2檢驗(yàn)、mann－whitney U和方差分析方法進(jìn)行比較，所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)概率檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α設(shè)定為0.05。

2 結(jié)果

2.1 PRMT6在PCa中高表達(dá)

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PRMT6在PCa中高表達(dá)，而在BPH中表達(dá)較低，對PRMT6的表達(dá)情況評分并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。此外，采用Western blot檢測PRMT6在5種PCa細(xì)胞系中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PRMT6均有表達(dá)（圖1）。

圖1 PRMT6在PCa中高表達(dá)

2.2 PRMT6促進(jìn)AR下游靶基因PSA和KLK2的轉(zhuǎn)錄

本研究定制了1種PRMT6的表達(dá)質(zhì)粒及3種PRMT6的siRNA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PRMT6過表達(dá)促進(jìn)PSA和KLK2的轉(zhuǎn)錄，而敲除PRMT6后PSA和KLK2的轉(zhuǎn)錄水平降低（圖2）。

圖2 PRMT6促進(jìn)AR下游靶基因PSA和KLK2的轉(zhuǎn)錄

2.3 PRMT6促進(jìn)PCa細(xì)胞的增殖

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，PRMT6基因敲除可顯著減少PCa22Rv1和LNCaP細(xì)胞增殖。同時(shí)，通過將PRMT6基因敲除后分別轉(zhuǎn)染到22Rv1和LNCaP細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)PRMT6基因敲除明顯抑制細(xì)胞的增殖（圖3）。

2.4 PRMT6促進(jìn)PCa細(xì)胞周期的進(jìn)程

利用流式細(xì)胞技術(shù)研究PRMT6對PCa細(xì)胞周期的影響，結(jié)果顯示，敲除PRMT6后22Rv1和LNCaP細(xì)胞停滯在G1期的細(xì)胞明顯增多（圖4）。

2.5 PRMT6促進(jìn)PCa細(xì)胞的遷移

通過Transwell小室實(shí)驗(yàn)研究PRMT6對PCa細(xì)胞遷移的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，敲除PRMT6后，22Rv1和LNCaP細(xì)胞的遷移率降低（圖5）。

圖3 PRMT6促進(jìn)PCa細(xì)胞的增殖

圖4 PRMT6促進(jìn)PCa細(xì)胞周期的進(jìn)程

圖5 PRMT6促進(jìn)PCa細(xì)胞的遷移

3 討論

PCa是歐美國家常見的惡性腫瘤之一，是男性致死的第2大癌癥。中國PCa的發(fā)病率較低，但近年來有逐漸上升的趨勢［25－26］。目前，PCa的治療方法主要以內(nèi)分泌治療為主，但大多僅在早期有效，最終發(fā)展成趨勢抵抗的PCa，難以治愈［27］。本研究發(fā)現(xiàn)，PRMT6在PCa中高表達(dá)，它通過促進(jìn)AR下游靶基因PSA和KLK2的轉(zhuǎn)錄，調(diào)控PCa的進(jìn)程。此外，PRMT6還促進(jìn)PCa細(xì)胞增殖，加快細(xì)胞周期的進(jìn)程和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移。

本研究通過免疫組織化學(xué)檢測BPH和PCa患者的病理石蠟切片，發(fā)現(xiàn)PCa組織中PRMT6的表達(dá)水平明顯高于BPH，同時(shí)通過Western blot技術(shù)檢測5種PCa細(xì)胞系中PRMT6的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)PRMT6在5種細(xì)胞系中均有表達(dá)，結(jié)果提示PRMT6在PCa中呈高表達(dá)。研究［24］證 實(shí)，PRMT6在多種癌癥中具有生理功能，它是AR的一種輔助激活因子，可以與ARAF－2相互作用，激活A(yù)R。研究［28］發(fā)現(xiàn)，PCa組織中PRMT6表達(dá)水平顯著高于正常的前列腺組織，它能較好地區(qū)分正常組織和腫瘤組織，本研究結(jié)果與其相似。結(jié)果提示，PRMT6作為AR的一種輔助激活因子，可能在PCa的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮著重要調(diào)控作用。然而，PRMT6調(diào)控PCa發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，目前尚不清楚。

PCa發(fā)生發(fā)展與AR密切相關(guān)，AR是核受體超家族蛋白的成員之一，它在前列腺生長發(fā)育及生理功能方面起重要作用。AR表達(dá)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控受其轉(zhuǎn)錄輔助調(diào)控因子的調(diào)節(jié)，一旦AR的轉(zhuǎn)錄輔助調(diào)控因子發(fā)生改變，會引起AR及其下游靶基因的表達(dá)異常，導(dǎo)致PCa和雄激素不敏感癥等AR相關(guān)疾病。PRMT6是正常和突變AR的特異性輔助激活因子，其與AR相互作用在AR突變時(shí)顯著增強(qiáng)，通過PRMT6類固醇受體相互作用區(qū)域LXXLL和AR激活功能2。AR的轉(zhuǎn)錄激活需要PRMT6的催化活性和Akt結(jié)構(gòu)域精氨酸殘基的甲基化參與［24］。本研究選取AR陽性激素非依賴的22Rv1細(xì)胞和AR陽性激素依賴的LNCaP細(xì)胞進(jìn)行研究。通過將過表達(dá)及敲除PRMT6的siRNA轉(zhuǎn)染至22Rv1和LNCaP細(xì)胞中，采用Real Time PCR研究PRMT6表達(dá)改變對AR下游促癌基因PSA和KLK2的轉(zhuǎn)錄影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PRMT6可以促進(jìn)PSA和KLK2的轉(zhuǎn)錄，提示PRMT6可能通過調(diào)控AR下游靶基因的轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)PCa的發(fā)生發(fā)展。

本研究通過繪制細(xì)胞生長曲線、克隆實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞技術(shù)和Transwell實(shí)驗(yàn)，研究PRMT6對22Rv1和LNCaP細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及遷移的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PRMT6可以促進(jìn)22Rv1和LNCaP的細(xì)胞增殖，調(diào)控細(xì)胞周期的進(jìn)程，敲除PRMT6后細(xì)胞周期進(jìn)程中主要作用于G1期，同時(shí)PRMT6可以促進(jìn)22Rv1和LNCaP的遷移。研究［29］發(fā)現(xiàn)，p21是一種強(qiáng)效的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑，在促進(jìn)G1細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞衰老方面發(fā)揮重要作用。p21是多種腫瘤抑制基因和癌基因的下游靶基因，它在大多數(shù)的腫瘤包括乳腺癌中表達(dá)下調(diào)。PRMT6作為一種已知的轉(zhuǎn)錄輔助因子直接抑制p21啟動(dòng)子。PRMT6基因敲除導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞中p21抑制，同時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞衰老。結(jié)果提示，PRMT6作為乳腺癌細(xì)胞中癌基因，因具有促進(jìn)細(xì)胞生長和抑制衰老的特點(diǎn)，可以作為腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)。PELP1與PRMT6相互作用，并改變PRMT6的功能，抑制PRMT6，可以減輕PELP1介導(dǎo)的雌激素受體激活、細(xì)胞增殖和集落形成。PELP1與PRMT6被募集作為雌激素受體的靶基因，協(xié)同調(diào)節(jié)參與腫瘤形成的基因選擇性剪接，結(jié)果提示，PELP1－PRMT6軸可能是乳腺癌治療的潛在靶點(diǎn)。此外，研究［30］發(fā)現(xiàn)，PRMT6過表達(dá)抵消由野生型p16誘導(dǎo)的人肺腺癌細(xì)胞A549細(xì)胞周期阻滯在G1期，同時(shí)過表達(dá)的PRMT6能夠與p16相互作用，導(dǎo)致p16－CDK4關(guān)聯(lián)強(qiáng)度降低。此前文獻(xiàn)［31］報(bào)道，在PRMT6過表達(dá)的乳腺癌 MCF7細(xì)胞系中，細(xì)胞生長率和集落形成能力明顯滯后于正常對照組細(xì)胞，血小板反應(yīng)蛋白－1（TSP－1）是一種有效天然的血管生成抑制劑，它在PRMT6過表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞中明顯上調(diào)，由PRMT6過表達(dá)導(dǎo)致的轉(zhuǎn)移和侵襲的抑制可以通過特異性敲除TSP－1基因緩解，結(jié)果提示，PRMT6過表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲調(diào)節(jié)相關(guān)。

總之，PRMT6在PCa中高度表達(dá)并通過調(diào)節(jié)AR下游靶基因的表達(dá)促進(jìn)PCa的發(fā)生發(fā)展，同時(shí)PRMT6可調(diào)控PCa細(xì)胞的細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞的增殖及遷移。

［1］Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics［J］.CA：A cancer Journal for Clinicians，2011，61（2）：69－90.

［2］Torre LA，Bray F，Siegel RL，et al.Global cancer statistics［J］.CA：A Cancer Journal for Clinicians，2015，65（2）：87－108.

［3］Heinlein CA，Chang C. Androgen receptor（AR ）coregulators：an overview［J］.Endocrine Reviews，2002，23（2）：175－200.

［4］Dehm SM，Tindall DJ.Molecular regulation of androgen action in prostate cancer［J］.Journal of Cellular Biochemistry，2006，99（2）：333－344.

［5］Perissi V，Aggarwal A，Glass CK，et al.A corepressor/coactivator exchange complex required for transcriptional activation by nuclear receptors and other regulated transcription factors［J］.Cell，2004，116（4）：511－526.

［6］Garcia－BI，Kwon YS，Telese F，et al.Histone methylationdependent mechanisms impose ligand dependency for gene activation by nuclear receptors［J］.Cell，2007，128（3）：505－518.

［7］Zhao Y，Lang G，Ito S，et al.A TFTC/STAGA module mediates histone H2Aand H2Bdeubiquitination，coactivates nuclear receptors，and counteracts heterochromatin silencing［J］.Molecular Cell，2008，29（1）：92－101.

［8］Xu K，Wu ZJ，Groner AC，et al.EZH2oncogenic activity in castration－resistant prostate cancer cells is Polycombindependent［J］.Science，2012，338（6113）：1465－1469.

［9］Yu J，Yu J，Mani RS，et al.An integrated network of androgen receptor，polycomb，and TMPRSS2－ERG gene fusions in prostate cancer progression［J］.Cancer Cell，2010，17（5）：443－454.

［10］Clark EL，Coulson A，Dalgliesh C，et al.The RNA helicase p68is a novel androgen receptor coactivator involved in splicing and is overexpressed in prostate cancer［J］.Cancer Research，2008，68（19）：7938－7946.

［11］Metzger E，Wissmann M，Yin N，et al.LSD1demethylates repressive histone marks to promote androgen－receptordependent transcription［J］.Nature，2005，437（7057）：436－439.

［12］Xu K，Shimelis H，Linn DE，et al.Regulation of androgen receptor transcriptional activity and specificity by RNF6－induced ubiquitination［J］.Cancer Cell，2009，15（4）：270－282.

［13］Wang Z，Guo J，Li Y，et al.Inactivation of androgen－induced regulator ARD1inhibits androgen receptor acetylation and prostate tumorigenesis［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2012，109（8）：3053－3058.

［14］Xiang Y，Zhu Z，Han G，et al.JARID1Bis a histone H3lysine 4demethylase up－regulated in prostate cancer［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2007，104（49）：19226－19231.

［15］Kahl P，Gullotti L，Heukamp LC，et al.Androgen receptor coactivators lysine－specific histone demethylase 1and four and a half LIM domain protein 2predict risk of prostate cancer recurrence［J］.Cancer Research，2006，66（23）：11341－11347.

［16］Di Lorenzo A，Bedford MT.Histone arginine methylation［J］.FEBS Letters，2011，585（13）：2024－2031.

［17］Di Lorenzo A，Yang Y，Macaluso M.A gain－of－function mouse model identifies PRMT6as a NF－kappaB coactivator［J］.Nucleic Acids Research，2014，42（13）：8297－8309.

［18］Kleinschmidt MA，de Graaf P，van Teeffelen HA.Cell cycle regulation by the PRMT6arginine methyltransferase through repression of cyclin－dependent kinase inhibitors［J］.PloS One，2012，7（8）：41446.

［19］Neault M，Mallette FA，Vogel G，et al.Ablation of PRMT6 reveals a role as a negative transcriptional regulator of the p53 tumor suppressor［J］.Nucleic Acids Research，2012，40（19）：9513－9521.

［20］Stein C，Riedl S，Ruthnick D，et al.The arginine methyltransferase PRMT6regulates cell proliferation and senescence through transcriptional repression of tumor suppressor genes［J］.Nucleic Acids Research，2012，40（19）：9522－9533.

［21］Sun Y，Chung HH，Woo AR，et al.Protein arginine methyltransferase 6enhances ligand－dependent and －independent activity of estrogen receptor alpha via distinct mechanisms［J］.Biochimica Biophysica Acta，2014，1843（9）：2067－2078.

［22］Mann M，Zou Y，Chen Y，et al.PELP1oncogenic functions involve alternative splicing via PRMT6 ［J］.Molecular Oncology，2014，8（2）：389－400.

［23］Meerzaman DM，Yan C，Chen QR，et al.Genome－wide transcriptional sequencing identifies novel mutations in metabolic genes in human hepatocellular carcinoma［J］.Cancer Genomics ＆Proteomics，2014，11（1）：1－12.

［24］Scaramuzzino C，Casci I，Parodi S，et al.Protein arginine methyltransferase 6enhances polyglutamine－expanded androgen receptor function and toxicity in spinal and bulbar muscular atrophy［J］.Neuron，2015，85（1）：88－100.

［25］Lee MM，Wang RT，Hsing AW，et al.Case－control study of diet and prostate cancer in China［J］.Cancer Causes ＆Control，1998，9（6）：545－52.

［26］Li XM，Li J，Tsuji I，et al.Mass screening－based case－control study of diet and prostate cancer in Changchun，China［J］.Asian Journal of Andrology，2008，10（4）：551－560.

［27］Siegel R，Ward E，Brawley O，et al.Cancer statistics，2011：the impact of eliminating socioeconomic and racial disparities on premature cancer deaths［J］.CA：A Cancer Journal for Clinicians，2011，61（4）：212－236.

［28］Vieira FQ，Costa－PP，Pereira A，et al.Deregulated expression of selected histone methylases and demethylases in prostate carcinoma［J］.Endocrine－Related Cancer，2014，21（1）：51－61.

［29］Phalke S，Mzoughi S，Bezzi M，et al.p53－Independent regulation of p21Waf1/Cip1expression and senescence by PRMT6［J］.Nucleic Acids Research，2012，40（19）：9534－9542.

［30］Wang X，Huang Y，Zhao J，et al.Suppression of PRMT6－mediated arginine methylation of p16protein potentiates its ability to arrest A549cell proliferation［J］.The International Journal of Biochemistry ＆ Cell Biology，2012，44（12）：2333－2341.

［31］Kim NH，Kim SN，Seo DW，et al.PRMT6overexpression upregulates TSP－1and downregulates MMPs：its implication in motility and invasion［J］.Biochemical and Biophysical Research Communications，2013，432（1）：60－65.