精甲霜靈·咯菌腈·嘧菌酯11%懸浮種衣劑高效液相色譜分析

劉春杰，葉 珊，吳婷燕，姚二艷，夏 俊

（浙江新安化工集團(tuán)股份有限公司，浙江 建德 311600）

精甲霜靈（metalaxyl-M，CAS號：70630-17-0，分子式：C15H21NO4）屬于酰胺類殺菌劑，主要用于處理種子、莖葉及土壤，對由卵菌綱病原菌引起的煙草白粉病、黑脛病及蔬菜、果樹等作物的疫病、霜霉病都具有高效的防治效果[1]，但容易產(chǎn)生抗藥性，所以將它常與其他藥劑混配使用。

嘧菌酯（Azoxystrobin，CAS號：131860-33-8，分子式：C22H17N3O5）是甲氧基丙烯酸酯類殺菌農(nóng)藥，是新型高效、廣譜、內(nèi)吸性殺菌劑，與目前已有殺菌劑無交互抗性，對14-脫甲基化酶抑制劑、苯甲酰胺類、二羧酰胺類和苯并咪唑類產(chǎn)生抗性的菌株有效。它可用于莖葉噴霧、種子處理，也可進(jìn)行土壤處理，對幾乎所有真菌綱(子囊菌綱、擔(dān)子菌綱、卵菌綱和半知菌類)病害如白粉病、銹病、穎枯病、網(wǎng)斑病、霜霉病、稻瘟病等均有良好的活性。它用于谷物、水稻、葡萄、馬鈴薯、蔬菜、果樹及其他作物，均較安全[2]。

咯菌腈（Fludioxonil，CAS號：131341-86-1，分子式：C12H6F2N2O2）是一種超廣譜、非內(nèi)吸吡咯類觸殺性殺菌劑，作用機(jī)理是通過抑制葡萄糖磷酰化的有關(guān)轉(zhuǎn)移，并抑制真菌菌絲體的生長，最終導(dǎo)致病原菌死亡，與現(xiàn)有殺菌劑無交互抗性，是一種新型的高效、低毒、低殘留的仿生殺菌劑[3]。它對主要的擔(dān)子菌、半知菌、子囊菌和卵菌等植物病原菌的EC95均＜1mg ai/L。對柄銹菌屬、禾生球腔菌（小麥殼針孢）、穎枯殼針孢（小麥穎枯病菌）和圓核腔菌（大麥網(wǎng)斑病菌）有很好的防效，而且持效性好，并能提高作物產(chǎn)量。它可用于種子處理，也可防治種子帶菌及土壤傳播的真菌病害。

精甲霜靈、嘧菌酯和咯菌腈的結(jié)構(gòu)式分別見圖1、圖2和圖3。

圖1 精甲霜靈

圖2 嘧菌酯

圖3 咯菌腈

目前國內(nèi)精甲霜靈、嘧菌酯、咯菌腈等原藥或單劑的分析方法已有報(bào)道[4-8]，但是這3種農(nóng)藥的混配制劑的分析方法并未見報(bào)道。本研究采用反相高效液相色譜法，在同一個色譜條件下實(shí)現(xiàn)了精甲霜靈、嘧菌酯、咯菌腈與雜質(zhì)的有效分離。該方法操作簡便、快速、準(zhǔn)確，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求，適用于該制劑產(chǎn)品的質(zhì)量監(jiān)督和檢測。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑和溶液

甲醇：色譜純；水：新蒸二次蒸餾水；精甲霜靈標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%（來自Dr.Ehrenstorfer）；嘧菌酯標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%（來自沈陽化工研究院有限公司）；咯菌腈標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99%（來自Dr.Ehrenstorfer）；11%精甲霜靈·咯菌腈·嘧菌酯懸浮種衣劑（自制）。

1.2 儀器和設(shè)備

高效液相色譜儀：Agilent1200，具有二極管陣列檢測器和自動進(jìn)樣器；Agilent1200色譜工作站；色譜柱：250mm×4.6mm（i.d.）不銹鋼柱，內(nèi)裝CAPCELLPAKC18、5μm填充物；Millipore超純水制備系統(tǒng)；過濾器：濾膜孔徑約0.45μm；超聲波清洗器。

1.3 色譜操作條件

流動相：甲醇+水(體積比60∶40)；流速：0.8 mL/min；檢測波長：270 nm；進(jìn)樣量：5μL；柱溫：30℃；上述條件下的保留時間：精甲霜靈12.4 min，嘧菌脂18.4min，咯菌腈23.9min。

上述液相色譜操作條件是典型的，可根據(jù)不同的儀器特點(diǎn)，對給定的參數(shù)做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以期獲得最佳效果。典型的精甲霜靈、嘧菌酯和咯菌腈標(biāo)樣、11%精甲霜靈·咯菌腈·嘧菌酯懸浮種衣劑的高效液相色譜圖分別見圖4和圖5。

圖4 精甲霜靈、嘧菌酯和咯菌腈標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖5 11%精甲霜靈·咯菌腈·嘧菌酯懸浮種衣劑高效液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取精甲霜靈標(biāo)樣0.02g、嘧菌酯標(biāo)樣0.04g、咯菌腈標(biāo)樣0.01g(精確至0.00002g)置于同一個50mL容量瓶中，加入甲醇，超聲溶解，稀釋至刻度，搖勻。

1.4.2 樣品溶液的配制

稱取約0.65 g（精確至0.000 02 g）11%精甲霜靈·咯菌腈·嘧菌酯懸浮種衣劑于50mL容量瓶中，加入甲醇，超聲溶解，稀釋至刻度，搖勻。

1.4.3 測定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰兩針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對變化<1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

1.4.4 計(jì)算

將測得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中精甲霜靈（嘧菌酯或咯菌腈）峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中精甲霜靈（嘧菌酯或咯菌腈）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X（%），按式（1）計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中精甲霜靈（嘧菌酯或咯菌腈）峰面積的平均值；A2為試樣溶液中精甲霜靈（嘧菌酯或咯菌腈）峰面積的平均值；m1為標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；ω 為標(biāo)樣中精甲霜靈（嘧菌酯或咯菌腈）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

檢測波長的選擇：精甲霜靈在200～280 nm、嘧菌酯在200～290nm、咯菌腈在200～300nm均有較大的吸收，3個組分的最大吸收波長都是210nm附近，考慮到溶劑及助劑對吸收的影響，選定270nm為測定波長，該波長下各組分吸收較強(qiáng)，溶劑和助劑干擾小，吸收曲線較為平緩。

流動相的選擇：根據(jù)精甲霜靈、嘧菌酯和咯菌腈的物化性質(zhì)，選擇甲醇作為溶劑溶解樣品。流動相的選擇則根據(jù)化合物的特點(diǎn)，對甲醇和水按不同比例，在上述2.3色譜條件下進(jìn)行選擇比較。經(jīng)測定，甲醇+水比例在體積比100∶0～50∶50之間調(diào)節(jié)，同時考慮到色譜柱的承受壓力以及出峰時間，選擇流速為0.8mL/min和甲醇+水（體積比60∶40）為流動相時分離效果較好。該條件下3個組分及雜質(zhì)峰都可以得到很好的分離，峰形對稱，基線平穩(wěn)。

2.2 線性相關(guān)性試驗(yàn)

配制精甲霜靈、嘧菌酯和咯菌腈的質(zhì)量濃度分別為45～452mg/L、88～884mg/L和23～226 mg/L標(biāo)樣溶液，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，得出相應(yīng)值。分別以精甲霜靈、嘧菌酯和咯菌腈質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。精甲霜靈、嘧菌酯和咯菌腈線性方程分別為y＝0.4789x+11.591、y＝6.0968x+13.918和y＝14.238x+14.144，其線性相關(guān)系數(shù)分別為0.9998、0.9997和0.9997。

2.3 精密度試驗(yàn)

選取同一批次的11%精甲霜靈·咯菌腈·嘧菌酯懸浮種衣劑試樣，在上述的色譜條件下平行測定5次，測得精甲霜靈、嘧菌酯、咯菌腈的標(biāo)準(zhǔn)偏差為分別為0.03、0.05和0.03，變異系數(shù)分別為0.93%、0.82%和2.80%（見表1）。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

稱取5份已知含量的試樣，分別加入一定量的精甲霜靈、嘧菌酯和咯菌腈標(biāo)準(zhǔn)品，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測得精甲霜靈、嘧菌酯和咯菌腈的平均回收率分別為99.40%、100.10%和99.44%（見表2）。

表2 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明：本方法在同一色譜條件下測定3種有效成分，具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，良好的線性關(guān)系，具有簡便、準(zhǔn)確、快速及分離效果好的優(yōu)點(diǎn)，是一種可行的分析方法。

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