復(fù)脈膏外敷的安全性及對兔耳緣化療性靜脈炎的影響※

單珍珠 周留勇 尤建良 張辰岑 龔時夏

(江蘇省無錫市中醫(yī)醫(yī)院內(nèi)科，江蘇 無錫 214071)

1 江蘇省無錫市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科，江蘇 無錫 214071

化療性靜脈炎主要是由于化療藥物對血管的刺激而引起的管壁化學性炎癥?；熕幬锍Ｔ斐裳芷交’d攣、血管內(nèi)膜損傷等，導致不同程度的靜脈炎［1］。有調(diào)查顯示，單純外周靜脈輸注長春瑞濱注射液引起的靜脈炎可高達89．5%［2］。如何預(yù)防或減輕化療藥物所引起的靜脈炎，保證化療順利完成，是腫瘤內(nèi)科護理工作的一項重要內(nèi)容。

我們在臨床上應(yīng)用復(fù)脈膏預(yù)防和治療化療性靜脈炎10余年，療效顯著，無任何不良反應(yīng)。本研究擬通過安全性實驗(皮膚過敏性實驗、皮膚刺激性實驗)觀察復(fù)脈膏外敷的安全性;通過復(fù)脈膏外敷觀察對兔耳緣靜脈化療性靜脈炎的影響，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 實驗動物 普通級白色豚鼠30只，體質(zhì)量250～300 g，雌雄各半，由江蘇省無錫市惠山江南實驗動物場提供，動物許可證號 SCXK(蘇)2009-0005;普通級健康成年白色家兔53只，體質(zhì)量2．0～2．5 kg，雌雄不限，由南京安立默科技有限公司提供，動物許可證號SCXK(蘇)2010-0002。

1．1．2 藥材及試劑 復(fù)脈膏(江蘇省無錫市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，批號20110302)、基質(zhì)(主要含有羧甲基纖維素鈉、甘油、氮酮等);1%2，4-二硝基氯苯(河南洛染股份有限公司，CAS號97-00-7，質(zhì)量標準HG/T2553-2003);酒石酸長春瑞濱注射液(江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，國藥準字H19990278，規(guī)格10 mg/瓶);50%硫酸鎂(上海鶴善實業(yè)有限責任公司，批號1109165);氯胺酮(江蘇恒瑞制藥股份有限公司，批號03020832);安爾碘Ⅱ型皮膚消毒劑(上海利康消毒高科技有限公司，批號20111105);10%福爾馬林等。

1．1．3 主要儀器及用品 XDS-1B倒置光學顯微鏡，重慶光電儀器有限公司。其他用品有備皮刀、油紙、無菌紗布、膠布、繃帶、6號針頭、5號頭皮針、5 mL注射器、20 mL注射器、脫毛露、手電筒、體質(zhì)量秤。

1．2 實驗方法

1．2．1 皮膚過敏性實驗［3］

1．2．1．1 動物分組 將30只豚鼠按體質(zhì)量、性別分為3組，即復(fù)脈膏組、基質(zhì)組及對照組，每組各10只，雌雄各半。實驗前24 h用備皮刀將3組豚鼠背部兩側(cè)皮膚脫毛，面積約為3 cm×3 cm，觀察24 h，脫毛部位皮膚完好，無損傷及異常。

1．2．1．2 致敏接觸 復(fù)脈膏組取復(fù)脈膏0．2 g、基質(zhì)組取基質(zhì)0．2 g、對照組取1%2，4-二硝基氯苯0．2 mL分別涂在豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)，然后用1層油紙、2層無菌紗布覆蓋，以無刺激性膠布和繃帶固定，持續(xù)6 h。第7、14 d各同法重復(fù)1次。

1．2．1．3 激發(fā)接觸 于末次致敏后14 d，分別取復(fù)脈膏0．2 g、基質(zhì) 0．2 g、1%2，4- 二硝基氯苯0．2 mL，分別涂于相應(yīng)組豚鼠的左、右側(cè)脫毛區(qū)，固定方法同1．2．1．2項，持續(xù)6 h。6 h后用溫清水去除藥物后即刻觀察，然后于24、48、72 h分別觀察皮膚過敏反應(yīng)情況。

1．2．1．4 觀察指標 ①皮膚過敏反應(yīng)平均值:根據(jù)表1皮膚過敏反應(yīng)評分標準進行評分［3］，計算反應(yīng)平均值。反應(yīng)平均值=(紅斑形成總分+水腫形成總分)/10。②皮膚過敏反應(yīng)致敏強度［3］:根據(jù)致敏率判斷3組致敏強度。致敏率0～10%為弱致敏性，20% ～30%為輕度致敏性，40%～60%為中度致敏性，70% ～80%為高度致敏性，90% ～100%為極度致敏性。致敏率=［出現(xiàn)皮膚紅斑或水腫(不論程度輕重)的豚鼠例數(shù)/受試豚鼠總數(shù)］×100%。

表1 皮膚過敏反應(yīng)評分標準

1．2．2 皮膚刺激性實驗［3］

1．2．2．1 一次給藥皮膚刺激實驗 取健康成年白色家兔4只，雌雄各半，實驗前24 h在每只家兔背部脊柱兩側(cè)對稱區(qū)，用備皮刀脫毛4塊區(qū)域，每塊脫毛區(qū)面積約5 cm×5 cm。左上區(qū)、左下區(qū)脫毛部位皮膚保持完好，無損傷及異常;右上區(qū)、右下區(qū)用6號針頭在脫毛部位皮膚上劃出“#”形擦傷，直徑2 cm，以刺傷表皮、不傷及真皮、有輕度滲血為度，右上區(qū)、右下區(qū)皮膚破損程度一致。

溫水清洗脫毛區(qū)域，無菌紗布拭干后，左上區(qū)、右上區(qū)直接涂以復(fù)脈膏0．2 g，左下區(qū)、右下區(qū)直接涂以基質(zhì)0．2 g，均勻涂抹，面積約 3cm×3 cm，并以1層油紙、2層無菌紗布覆蓋，無刺激膠布及繃帶固定。24 h后用溫水清洗去除復(fù)脈膏和基質(zhì)，去除藥物后1、24、48、72 h肉眼觀察并記錄涂敷部位紅斑和水腫形成情況。

1．2．2．2 多次給藥皮膚刺激實驗 另取健康成年白色家兔4只，雌雄各半，實驗方法同1．2．2．1項，每日給藥1次，連續(xù)1周。末次給藥后用溫水清洗去除復(fù)脈膏和基質(zhì)，1、24、48、72 h后肉眼觀察并記錄涂敷部位紅斑和水腫形成情況。

1．2．2．3 觀察指標 ①皮膚刺激反應(yīng)評分［3］:依據(jù)表2對家兔每個區(qū)的紅斑及水腫情況進行評分。②皮膚刺激反應(yīng)強度［3］:計算家兔每個區(qū)反應(yīng)平均分值［反應(yīng)平均分值=(紅斑形成總分+水腫形成總分)/4］，＜0．5分為無刺激性，0．5～2．99分為輕度刺激性，2．99～6．0分為中度刺激性，≥6．0分為強刺激性。

表2 皮膚刺激反應(yīng)評分標準 (分)

1．2．3 對兔化療性靜脈炎的影響實驗［4-8］

1．2．3．1 動物分組及備皮 取健康成年白色家兔45只，隨機分為3組，即復(fù)脈膏組、硫酸鎂組、對照組，每組各15只。各組白兔分別脫去右耳毛發(fā)，溫水清洗備用。觀察24 h，脫毛部位皮膚完好，無損傷及異常。

1．2．3．2 化療藥物注入 3組白兔均予氯胺酮(60 mg/kg)腹腔注射麻醉，然后安爾碘Ⅱ型皮膚消毒劑消毒右耳緣靜脈周圍皮膚;距耳根1 cm處為穿刺點，向耳尖方向穿刺;穿刺后行透光檢查，對疑有穿刺滲漏者棄去;穿刺成功后，將配制好的酒石酸長春瑞濱注射液(1．8 mg/kg)快速推注，約5 min內(nèi)注射完畢。行透光檢查，穿刺無滲漏，推注藥液后耳緣靜脈局部無滲液。

1．2．3．3 用藥方法 復(fù)脈膏組:在右耳緣穿刺點上方約0．5 cm處沿耳緣靜脈予復(fù)脈膏外敷，范圍約為5 cm×2 cm，厚度為0．3 cm，外用保鮮膜覆蓋，并固定防止脫落，4 h后去除，清水洗凈。硫酸鎂組:在右耳緣穿刺點上方約0．5 cm處沿耳緣靜脈予50%硫酸鎂濕敷，范圍約為5 cm×2 cm，外用保鮮膜覆蓋，并固定防止脫落，4 h后去除，清水洗凈。對照組:不采用任何防治措施。

1．2．3．4 標本采集及觀察方法 清除藥物后24 h、7 d、14 d，分別隨機取各組白兔5只，切取右側(cè)耳緣靜脈標本。具體方法:以穿刺點前2 cm處為中心，切下面積為0．8 cm2(2．0 cm ×0．4 cm)、厚4 μm左右的耳廓組織，用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，常規(guī)病理切片，蘇木精—伊紅(HE)染色，光學顯微鏡下觀察耳緣靜脈病理學變化，包括血管內(nèi)皮細胞腫脹、血管周圍水腫、管腔淤血、管壁增厚、纖維增生程度、炎癥細胞浸潤等。所有白兔耳緣靜脈標本均由江蘇省無錫市中醫(yī)醫(yī)院病理科從事病理診斷工作10余年的專職人員進行觀察，并由2人一致判定，且整個實驗過程中不知標本的分組。輕、中、重判斷標準，根據(jù)參考文獻［4-8］，由病理科從事病理診斷工作10余年的3位醫(yī)師共同制訂。

1．3 統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17．0軟件包進行統(tǒng)計分析，等級資料采用秩和檢驗，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2．1 皮膚過敏性實驗結(jié)果 對照組豚鼠在使用1%2，4-二硝基氯苯激發(fā)給藥6 h后，均有輕度至中度紅斑出現(xiàn)，但無水腫形成，致敏率100%，為極度致敏性;復(fù)脈膏及基質(zhì)組豚鼠在激發(fā)用藥后，均無紅斑及水腫形成，致敏率為0，為弱致敏性。見表3。

表3 皮膚過敏性實驗結(jié)果

2．2 皮膚刺激性實驗結(jié)果 一次給藥皮膚刺激實驗及多次給藥皮膚刺激實驗結(jié)果均為:經(jīng)肉眼觀察，復(fù)脈膏及基質(zhì)對健康成年白色家兔完整皮膚及破損皮膚在去除受試藥物后1、24、48、72 h，均未致紅斑、水腫形成，皮膚刺激反應(yīng)評分均為0，皮膚刺激反應(yīng)強度均為0，即無刺激性。

2．3 對兔化療性靜脈炎的影響實驗結(jié)果

2．3．1 顯微鏡下3組兔耳緣靜脈損傷情況 去除藥物24 h后，對照組兔耳緣靜脈損傷嚴重，顯微鏡下示血管內(nèi)皮嚴重破壞，內(nèi)皮細胞腫脹、局部水腫，管腔淤血，管壁增厚，纖維增生，大量紅細胞和炎癥細胞浸潤;硫酸鎂組兔耳緣靜脈血管內(nèi)皮破壞，內(nèi)皮細胞輕到中度腫脹，局部輕到中度水腫，管腔輕到中度淤血，管壁輕到中度增厚，纖維輕到中度增生，有炎癥細胞浸潤;復(fù)脈膏組兔耳緣靜脈大致為正常血管。7 d后，對照組兔耳緣靜脈損傷仍較嚴重;硫酸鎂組靜脈血管破壞得到一定改善;復(fù)脈膏組靜脈大致為正常血管。14 d后，對照組靜脈損傷仍偏重;硫酸鎂組靜脈血管破壞進一步改善;復(fù)脈膏組靜脈大致為正常血管。

2．3．2 3組兔耳緣靜脈損傷程度分級比較 見表4。

表4 3組兔耳緣靜脈損傷程度分級比較只

表4數(shù)據(jù)經(jīng)秩和檢驗，觀察24 h、7 d及14 d，硫酸鎂組及復(fù)脈膏組兔耳緣靜脈損傷較對照組同期減輕，復(fù)脈膏組較硫酸鎂組減輕，比較差異均有統(tǒng)計學意義(P ＜0．05)。

3 討論

化療性靜脈炎屬中醫(yī)學脈痹、惡脈等范疇，乃因藥石攻伐，傷及脈絡(luò)，濕、熱、邪、毒外侵，搏結(jié)脈道，脈絡(luò)滯塞不通，氣血瘀滯，凝聚肌膚，而成紅、腫、熱、痛。故治當以清熱解毒、活血祛瘀、祛濕消結(jié)、通絡(luò)止痛、扶正祛邪為法。復(fù)脈膏以此法組方，由生大黃、野菊花、三棱、莪術(shù)、丹參、乳香、沒藥、黨參、冰片組成。方中生大黃清熱解毒，活血祛瘀，瀉下攻積，清熱利濕，達到祛瘀生新之功效，是為君藥;野菊花清熱解毒，三棱、莪術(shù)破血逐瘀，行氣消積、止痛，共為臣藥，輔助君藥清熱解毒、活血祛瘀，散結(jié)止痛;丹參活血化瘀，涼血消癰，乳香、沒藥活血止痛，消腫生肌，共為佐藥，佐助君、藥清熱解毒，活血祛瘀，祛濕散結(jié)，通絡(luò)止痛;黨參益氣、生津、養(yǎng)血，亦為佐藥，佐助君藥扶正祛邪;冰片清熱解毒，消腫止痛，性善走竄開竅，無往不達，是為使藥?，F(xiàn)代藥理研究表明，生大黃、野菊花、莪術(shù)、丹參、乳香、沒藥、冰片均具有不同程度的抗菌、消炎作用;生大黃、三棱、莪術(shù)、丹參可抑制血小板聚集，抗血栓形成，改善微循環(huán);三棱、丹參、乳香、沒藥、冰片有止痛作用;黨參、莪術(shù)能增強機體免疫功能［9-10］。

本研究通過皮膚過敏性實驗、皮膚刺激性實驗證實，復(fù)脈膏及其基質(zhì)經(jīng)反復(fù)致敏、激發(fā)接觸后對豚鼠皮膚均無致敏作用;復(fù)脈膏及其基質(zhì)經(jīng)一次和多次給藥對家兔完整及破損皮膚均未引起紅斑或水腫。提示復(fù)脈膏經(jīng)皮膚局部給藥具有非常好的安全性，臨床上可放心使用。

長春瑞濱具有高滲透性，能透過血管滲入皮下組織間隙，可直接刺激神經(jīng)末梢，引起局部炎癥性反應(yīng);能破壞細胞膜內(nèi)外滲透壓平衡，使pH值改變而引起靜脈炎或毛細血管痙攣，導致局部供血減少，組織缺血、缺氧，進而極易形成化療性靜脈炎［11］。因此，本研究以長春瑞濱兔耳緣靜脈注射造成靜脈損傷。50%硫酸鎂濕敷對化療性靜脈炎有一定的防治作用，可消除化療藥物引起的血管痙攣和內(nèi)膜細胞水腫，使血管平滑肌松弛，減輕血管炎性反應(yīng)，是臨床上常用的方法，因此本研究以此為對照藥物［12］。

本研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)脈膏外敷可以很好的防止化療藥物酒石酸長春瑞濱注射液所致的兔耳緣靜脈血管內(nèi)皮細胞腫脹、局部水腫、管腔淤血、管壁增厚、纖維增生、炎癥細胞浸潤，進而達到防治化療性靜脈炎的目的，且防治效果優(yōu)于50%硫酸鎂濕敷。

綜上所述，復(fù)脈膏外敷可以安全有效的防治實驗性化療性靜脈炎，可應(yīng)用于臨床研究使用。

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