• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    阿維A聯(lián)合克拉霉素對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及腫瘤血管生成的影響

    2015-11-29 11:19:44趙雁葉郁紅吳麗賢方芳程波
    中華皮膚科雜志 2015年3期
    關(guān)鍵詞:阿維瘤體克拉

    趙雁 葉郁紅 吳麗賢 方芳 程波

    阿維A聯(lián)合克拉霉素對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及腫瘤血管生成的影響

    趙雁 葉郁紅 吳麗賢 方芳 程波

    目的 觀察阿維A聯(lián)合克拉霉素對(duì)人口腔表皮樣癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響,探討藥物對(duì)腫瘤抑制的作用機(jī)制。方法 用人口腔表皮樣癌細(xì)胞建立裸鼠皮下移植瘤模型。采用隨機(jī)雙盲設(shè)計(jì),將31只裸鼠隨機(jī)分6組,對(duì)照組、安慰劑組、阿維A組、克拉霉素組、阿維A+安慰劑組、阿維A+克拉霉素組。對(duì)照組6只,余各組均為5只裸鼠。各組治療3周后測(cè)量移植瘤體積和重量,用RT-PCR檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)mRNA的表達(dá)。對(duì)移植瘤體進(jìn)行病理學(xué)分析,采用免疫組化染色檢測(cè)各組腫瘤中VEGF、細(xì)胞增殖指數(shù)Ki-67的表達(dá)及其微血管密度(MVD)。采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料的均數(shù)比較采用方差分析,組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。結(jié)果 阿維A+克拉霉素組瘤體體積、瘤體重量均低于其他5組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè),阿維A+克拉霉素組VEGF、NF-κB mRNA的表達(dá)均低于對(duì)照組、克拉霉素組、阿維A組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。免疫組化檢測(cè),與對(duì)照組、克拉霉素組、阿維A組相比,阿維A+克拉霉素組VEGF表達(dá)率均下調(diào)(均P<0.01),著色淺;MVD顯著降低(均P<0.01),微血管分布較稀疏;Ki-67陽(yáng)性指數(shù)均降低(均P<0.05),腫瘤細(xì)胞增殖減少。結(jié)論 阿維A聯(lián)合克拉霉素能協(xié)同抑制人口腔表皮樣癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng),并下調(diào)VEGF表達(dá),抑制血管生成和腫瘤增殖。

    異種移植模型抗腫瘤試驗(yàn);阿維A;克拉霉素;癌,鱗狀細(xì)胞;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子類;NF-κB;Ki-67

    我們?cè)谂R床中偶然應(yīng)用阿維A聯(lián)合克拉霉素配合CO2激光治愈1例女性面部鱗狀細(xì)胞癌患者[1]。為進(jìn)一步研究它們的抗腫瘤機(jī)制,我們建立了人口腔表皮樣癌裸鼠移植瘤模型,應(yīng)用阿維A和克拉霉素進(jìn)行干預(yù),觀察瘤體體積、重量、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)的表達(dá)及各組移植瘤體病理變化,免疫組化檢測(cè)VEGF表達(dá)率、細(xì)胞增殖指數(shù)Ki-67、微血管密度(microvessel density,MVD)的差異。

    一、材料

    人口腔表皮樣癌細(xì)胞株(福建醫(yī)科大學(xué)新藥物研究所贈(zèng)送),RPMI 1640培養(yǎng)基、胰蛋白酶、胎牛血清(美國(guó)Gibco公司),胰蛋白酶(美國(guó)Amresco公司),Trizol RNA提取試劑(美國(guó)Invitrogen公司),阿維A膠囊(重慶華邦制藥有限公司),克拉霉素(江蘇恒瑞公司),RT-PCR引物(上海鉑尚生物技術(shù)服務(wù)有限公司合成)。無(wú)特定病原體(SPF)級(jí)飼養(yǎng)裸鼠,雌性,4~5周齡,體重16~18 g,購(gòu)于福建醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室(動(dòng)物檢疫合格證號(hào):201200056005)。鼠抗人CD34免疫組化單克隆抗體、兔抗鼠VEGF多克隆抗體為福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司產(chǎn)品,鼠抗人Ki-67單克隆抗體為北京中杉金橋公司產(chǎn)品。

    二、方法

    1.細(xì)胞培養(yǎng):人口腔表皮樣癌KB腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)于RPMI 1640培養(yǎng)基中,培養(yǎng)液含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 g/L鏈霉素,置于37℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞以0.25%胰酶消化傳代。

    2.人口腔表皮樣癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及分組:裸鼠飼養(yǎng)于恒溫[(25±2)℃]、恒濕(45%~50%)、超凈化生物層流架環(huán)境內(nèi),定期紫外線消毒,飲水經(jīng)高壓蒸汽滅菌,實(shí)驗(yàn)操作都在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行。將培養(yǎng)基中人口腔表皮樣癌細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶消化后,調(diào)整至1×108/L,在裸鼠背部接種0.2ml,無(wú)菌飼養(yǎng)2周,瘤體生長(zhǎng)至1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm后開(kāi)始治療。按臨床實(shí)驗(yàn)隨機(jī)雙盲標(biāo)準(zhǔn),加入安慰劑,實(shí)驗(yàn)員不知治療藥物。裸鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為6組,對(duì)照組、安慰劑組、阿維A組、克拉霉素組、阿維A+安慰劑組、阿維A+克拉霉素組。對(duì)照組6只,余各組均為5只裸鼠。將阿維A、克拉霉素及面粉分別溶解于生理氯化鈉溶液,渦旋混勻,分別以灌胃器經(jīng)口將藥直接灌入各組裸鼠胃中,以患者臨床治療劑量換算為裸鼠治療劑量,克拉霉素100 mg·kg-1·d-1,阿維A 7.2 mg·kg-1·d-1,安慰劑為面粉,除對(duì)照組外,各組每天給藥1次。3周后處死裸鼠,測(cè)量瘤塊體積和重量。

    3.實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)瘤體中VEGF及NF-κB mRNA的表達(dá):取20 mg新鮮瘤體,加入Trizol后勻漿,按Invitrogen Trizol說(shuō)明書提取RNA,隨后反轉(zhuǎn)錄成cDNA,稀釋后進(jìn)行定量PCR檢測(cè)。引物序列:VEGF 正向 5′-CATTGGAGCCTTGCCTTG-3′,反向5′-TTCGTGGGGTTTCTGGTCT-3′,產(chǎn)物大小 90 bp;NF-κB 正向 5′-CCGCACCTCCACTCCATCC-3′,反向 5′-ACATCAGCACCCAAGGACACC-3′,產(chǎn)物大小121 bp;內(nèi)參引物GAPDH正向5′-CCGTCTAGAAA AACCTGCC-3′,反向 5′-GCCAAATTCGTTGTCATACC-3′,產(chǎn)物大小217 bp。實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性5min,95℃變性15 s,60℃退火15 s,72℃延伸30 s共40個(gè)循環(huán),60~95℃以5℃為梯度采集熔解曲線。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    4.免疫組化檢測(cè)移植瘤中VEGF、Ki-67的表達(dá)及其MVD:將人口腔表皮樣癌移植瘤塊以4%多聚甲醛固定,常規(guī)病理切片檢查,免疫組化EnVision法染色。主要步驟:①切片經(jīng)脫蠟、水化;②預(yù)處理組織切片,熱修復(fù)(CD34染色前需用10 mmol/L pH 6.0的枸櫞酸鹽緩沖液高壓加熱抗原修復(fù));③滴加3%H2O2阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫孵育10min;④加一抗室溫孵育30min,分別加鼠抗人單克隆VEGF(1∶100)、CD34(1 ∶100)、Ki-67(1 ∶100);⑤加 EnVision 二抗室溫孵育30min。二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色,顯微鏡下觀察顯色。用已知VEGF、Ki-67陽(yáng)性乳腺癌和CD34陽(yáng)性扁桃體組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照。光鏡下(×200)觀察,VEGF陽(yáng)性細(xì)胞為腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒,Ki-67陽(yáng)性部位為細(xì)胞核內(nèi)棕黃色,每張切片計(jì)數(shù)5個(gè)視野,觀察不少于1 000個(gè)細(xì)胞,分別計(jì)算VEGF與Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞百分比。CD34陽(yáng)性為棕色血管內(nèi)皮細(xì)胞,光鏡下(×200)計(jì)數(shù)10個(gè)區(qū)域,計(jì)數(shù)每個(gè)區(qū)域內(nèi)血管數(shù),取平均數(shù)作為該組瘤塊的MVD。

    5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料的均數(shù)比較采用方差分析,組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn),P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    三、結(jié)果

    1.各組裸鼠皮下移植瘤體的體積、重量的比較:裸鼠喂藥3周后處死。各組動(dòng)物至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)無(wú)死亡,均全部進(jìn)入指標(biāo)檢測(cè)。測(cè)量體重;剝離瘤體稱重和體積測(cè)量,結(jié)果見(jiàn)表1。治療后各組移植瘤體積、重量比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。組間兩兩比較,阿維A+克拉霉素組瘤體體積、瘤體重量均低于其他各組(均P<0.05);阿維A組與克拉霉素組分別與對(duì)照組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各組裸鼠體重總體比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    表1 裸鼠移植瘤各組經(jīng)治療后移植瘤體積、重量及裸鼠體重比較(±s)

    表1 裸鼠移植瘤各組經(jīng)治療后移植瘤體積、重量及裸鼠體重比較(±s)

    組別 只數(shù) 瘤體體積(mm3) 瘤體重量(g) 裸鼠體重(g)對(duì)照組 6 1750.10±156.76 1.48±0.13 21.64±1.67安慰劑組 5 1745.92±192.21 1.72±0.24 23.09±1.96克拉霉素組 5 1822.34±334.31 1.64±0.47 22.81±0.83阿維A組 5 1470.92±143.65 1.40±0.09 22.18±1.32阿維A+安慰劑組 5 1621.34±195.64 1.45±0.10 22.01±0.36阿維A+克拉霉素組 5 1185.10±177.71 1.12±0.16 21.97±0.76 F值 4.66 3.19 0.52 P值 0.04 0.02 0.76

    2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)瘤體中VEGF、NF-κB mRNA的表達(dá):治療后對(duì)照組、克拉霉素組、阿維A組、阿維A+克拉霉素組瘤體中VEGF、NF-κB mRNA的表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.53、6.10,均P<0.05)。組間兩兩比較,阿維A+克拉霉素組VEGF、NF-κB mRNA的表達(dá)均低于其他各組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);阿維A組與對(duì)照組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);克拉霉素組與對(duì)照組比較,VEGF mRNA的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而NF-κB mRNA的表達(dá)明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)圖1。

    3.移植瘤體的組織學(xué)及免疫組化觀察:組織切片HE染色(圖2),阿維A+克拉霉素組瘤組織排列疏松,瘤細(xì)胞分裂較少,胞質(zhì)豐富,組織中可見(jiàn)到蛋白物質(zhì)及細(xì)胞碎片。其他各組癌巢體積較大,瘤細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,核質(zhì)較大,病理性核分裂較多。克拉霉素組見(jiàn)較多單核細(xì)胞。

    免疫組化結(jié)果顯示(表2),對(duì)照組、克拉霉素組、阿維A組、阿維A+克拉霉素組裸鼠瘤體VEGF、MVD、Ki-67表達(dá)比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。與其他3組比較,阿維A+克拉霉素組VEGF表達(dá)率降低(均P<0.01),著色淺;MVD顯著降低(均P<0.01),微血管分布較稀疏;Ki-67陽(yáng)性指數(shù)均低于其他3組(均P<0.05),腫瘤細(xì)胞增殖減少。阿維A組與對(duì)照組比較,VEGF、MVD和Ki-67均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);克拉霉素組與對(duì)照組比較,VEGF、MVD和Ki-67的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    圖1 裸鼠移植瘤組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和核轉(zhuǎn)錄因子 κB(NF-κB)mRNA 相對(duì)表達(dá)量

    表2 裸鼠移植瘤瘤體血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、微血管密度(MVD)、Ki-67表達(dá)(%,±s)

    表2 裸鼠移植瘤瘤體血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、微血管密度(MVD)、Ki-67表達(dá)(%,±s)

    組別 只數(shù) VEGF MVD Ki-67對(duì)照組 5 78.21±2.83 6.40±1.14 82.34±2.35克拉霉素組 5 81.45±3.57 5.80±0.84 78.43±3.07阿維A組 5 69.77±2.58 4.40±0.55 64.56±2.45阿維A+克拉霉素組 5 53.64±3.04 2.00±0.71 48.72±3.46 F值 20.32 27.31 28.49 P值 <0.01 <0.01 <0.01

    四、討論

    研究發(fā)現(xiàn),干預(yù)腫瘤組織中已有和(或)正在形成的血管,阻斷血管生成的通路,能夠有效抑制腫瘤生長(zhǎng)和增殖,使其處于休眠狀態(tài)[2]。有研究表明,抑制移植瘤中VEGF的表達(dá)即血管生成,可抑制腫瘤的生長(zhǎng)[3]。有研究表明,NF-κB與鱗狀細(xì)胞癌、黑素瘤、結(jié)腸癌的轉(zhuǎn)移有關(guān)[4],還在抗細(xì)胞凋亡中起著重要作用[5]。抑制NF-κB、VEGF靶向治療的新型藥物與惡性腫瘤治療策略是目前研究熱點(diǎn)[3,6]。

    體外實(shí)驗(yàn)[7-8]表明,阿維A能抑制鱗癌細(xì)胞的增殖,促進(jìn)鱗癌細(xì)胞的凋亡。溫炬等[9]的研究顯示,銀屑病患者經(jīng)阿維A治療后,皮損的MVD值、VEGF蛋白的表達(dá)及血清中VEGF水平較治療前明顯減低。Mikasa等[10]應(yīng)用克拉霉素治療非小細(xì)胞肺癌。Yatsunami等[11]研究表明,羅紅霉素和克拉霉素有抑制小鼠B16BL6黑素細(xì)胞瘤生長(zhǎng)的作用。腫瘤組織中的MVD是間接測(cè)量腫瘤血管生成的指標(biāo)之一,它與多種腫瘤的臨床分期、病理分級(jí)以及預(yù)后有關(guān)[12]。

    人口腔表皮樣癌裸鼠移植瘤具有惡性腫瘤原位移植的特點(diǎn),接近惡性實(shí)體腫瘤的組織學(xué)特征,可以更好地模擬臨床惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展和治療的過(guò)程。臨床中我們觀察到阿維A聯(lián)合克拉霉素對(duì)皮膚實(shí)體惡性腫瘤有抑制作用,但無(wú)法證實(shí)兩者的協(xié)同作用。我們?cè)诼闶篌w內(nèi)進(jìn)一步研究阿維A聯(lián)合克拉霉素藥物抗腫瘤作用機(jī)制。結(jié)果表明,阿維A聯(lián)合克拉霉素組VEGF、MVD、Ki-67表達(dá)都明顯低于對(duì)照和單獨(dú)用藥組。移植瘤瘤體體積、重量、實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)的VEGF、NF-κB mRNA表達(dá)結(jié)果與免疫組化顯示的血管生成、組織增殖表達(dá)結(jié)果基本一致,表明阿維A聯(lián)合克拉霉素對(duì)人口腔表皮樣癌移植瘤比單獨(dú)用藥和對(duì)照組有明顯的抑制作用,并且可以下調(diào)VEGF和NF-κB的表達(dá),抑制血管生成。與對(duì)照組比較,阿維A組免疫組化檢測(cè)VEGF、MVD、Ki-67表達(dá)均明顯降低,但瘤體體積、重量及VEGF、NF-κB mRNA的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明阿維A抗腫瘤血管生成作用先于瘤體重量、體積等指標(biāo)出現(xiàn)。阿維A聯(lián)合克拉霉素組所有觀察指標(biāo)均低于阿維A組,證實(shí)兩者聯(lián)合用藥有抗腫瘤的協(xié)同作用。

    本實(shí)驗(yàn)中,我們觀察到阿維A與克拉霉素的聯(lián)合應(yīng)用增強(qiáng)了藥物抗血管增生的作用,抑制了血管因子水平和腫瘤生長(zhǎng)。我們從臨床逆向?qū)嶒?yàn)室研究,可以驗(yàn)證臨床觀察到阿維A聯(lián)合克拉霉素聯(lián)合應(yīng)用后,腫瘤體積縮小。但這只是實(shí)驗(yàn)研究的初步探討,還需要深入的后續(xù)研究。

    圖2 各組裸鼠移植瘤組織病理學(xué)觀察(HE×200) 阿維A+克拉霉素組瘤組織排列疏松,瘤細(xì)胞分裂較少,胞質(zhì)豐富,組織中可見(jiàn)到蛋白物質(zhì)及細(xì)胞碎片。其他各組腫瘤癌巢體積較大,瘤細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,核質(zhì)較大,病理性核分裂較多。克拉霉素組見(jiàn)較多單核細(xì)胞

    [1]趙雁,林伯瀅,唐珊,等.阿維A聯(lián)合CO2激光治療鱗狀細(xì)胞癌一例[J].中華皮膚科雜志,2009,42(11):789.

    [2]Ohara T,Noma K,Urano S,et al.A novel synergistic effect of iron depletion on antiangiogenic cancer therapy[J].Int J Cancer,2013,132(11):2705-2713.

    [3]曹一鑫,馮新,王建力,等.荷人皮膚鱗狀細(xì)胞癌裸鼠移植瘤模型中干擾血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華皮膚科雜志,2012,45(8):569-573.

    [4]Li A,Varney ML,Singh RK.Expression of interleukin 8 and its receptors in human colon carcinoma cells with different metastatic potentials[J].Clin Cancer Res,2001,7(10):3298-3304.

    [5]Bernal-Mizrachi L,Lovly CM,Ratner L.The role of NF-κB-1 and NF-κB-2-mediated resistance to apoptosis in lymphomas[J].Proc Natl Acad Sci USA,2006,103(24):9220-9225.

    [6]Berenson JR,Matous J,Swift RA,et al.A phase I/II study of arsenic trioxide/bortezomib/ascorbic acid combination therapy for the treatment of relapsed or refractory multiple myeloma[J].Clin Cancer Res,2007,13(6):1762-1768.

    [7]Lin XY,He CD,Xiao T,et al.Acitretin induces apoptosis through CD95 signalling pathway in human cutaneous squamous cell carcinoma cell line SCL-1 [J].J Cell Mol Med,2009,13(9A):2888-2898.

    [8]劉梅,王珍,肖汀,等.黃芩素、阿維A誘導(dǎo)人皮膚鱗狀細(xì)胞癌SCL-12細(xì)胞凋亡的研究[J].中華皮膚科雜志,2010,43(11):753-757.

    [9]溫炬,羅權(quán),張錫寶,等.阿維A治療前后對(duì)銀屑病患者血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[J].中華皮膚科雜志,2005,38(9):540-542.

    [10]Mikasa K,Sawaki M,Kita E,et al.Significant survival benefit to patients with advanced non-small-cell lung cancer from treatment with clarithromycin[J].Chemotherapy,1997,43(4):288-296.

    [11]Yatsunami J,Fukuno Y,Nagata M,et al.Roxithromycin and clarithromycin,14-membered ring macrolides,potentiate the antitumor activity of cytotoxic agents against mouse B16 melanoma cells[J].Cancer Lett,1999,147(1-2):17-24.

    [12]Singhal S,Vachani A,Antin-Ozerkis D,et al.Prognostic implications of cell cycle,apoptosis,and angiogenesis biomarkers in non-small cell lung cancer:a review [J].Clin Cancer Res,2005,11(11):3974-3986.

    2014-05-06)

    (本文編輯:周良佳 顏艷)

    Effects of acitretin combined with clarithromycin on tumor growth and angiogenesis in human oral epidermoid carcinoma xenografts in nude mice

    Zhao Yan*,Ye Yuhong,Wu Lixian,Fang Fang,Cheng Bo.*First Affiliated Hospital of Fujian Medical University,Fujian Provincial Institute of Dermatology,F(xiàn)uzhou 350009,China

    Cheng Bo,Email:chengbofj@gmail.com

    ObjectiveTo evaluate the effects of acitretin combined with clarithromycin on tumor growth in human oral epidermoid carcinoma xenografts in nude mice,and to investigate their antitumor mechanisms.MethodsA cell line of human oral epidermoid carcinoma was subcutaneously inoculated into 31 Balb/c nude mice to establish a xenograft model of human skin tumor.Then,the nude mice were randomly classified into 6 groups according to a double blind protocol:control group(n=6)remaining untreated,placebo group(n=5)treated with wheat flour,acitretin group(n=5)treated with acitretin 7.2 mg/kg per day,clarithromycin group(n=5)treated with clarithromycin 100 mg/kg per day,acitretin+placebo group (n=5)treated with both acitretin (7.2 mg/kg per day)and wheat flour,and acitretin+clarithromycin group (n=5)treated with acitretin (7.2 mg/kg per day)and clarithromycin 100 mg/kg per day.All the drugs were intragastrically administrated once daily.After three weeks of treatment,mice were sacrificed and xenografts were removed.Then,the size and weight of xenografts were measured,and pathological analysis was conducted.Real time-PCR was performed to quantify the mRNA expressions of vascular endothelial growth factor(VEGF)and nuclear factor (NF)-κB,and immunohistochemistry was carried out to observe the expression of VEGF as well as to determine microvessel density(MVD)and Ki-67 proliferation index.By using the software SPSS 19.0,analysis of variance was performed for comparison of measurement data,and least significant difference (LSD)test for paired comparisons.ResultsBoth the size and weight of xenografts in the acitretin+clarithromycin group were significantly lower than those in the other groups (allP<0.05).Real-time fluorescence-based PCR revealed weaker mRNA expressions of VEGF and NF-κB in the acitretin+clarithromycin group compared with the control group,clarithromycin group and acitretin group (allP<0.05).As immunohistochemistry showed,the acitretin+clarithromycin group displayed a decrease in the expression rate (allP<0.01)and staining intensity of VEGF,MVD (allP<0.01)with a sparse distribution of microvessels,Ki-67 proliferation index(allP<0.05)and proliferative activity of tumor cells compared with the control group,clarithromycin group and acitretin group.Conclusion Acitretin combined with clarithromycin can synergistically inhibit the growth of human oral epidermoid carcinoma xenografts in nude mice,downregulate VEGF expression,and suppress angiogenesis and tumor proliferation.

    Xenograft model antitumor assays;Acitretin;Clarithromycin;Carcinoma,squamous cell;Vascular endothelial growth factors;NF-kappa B;Ki-67

    10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2015.03.016

    福建省衛(wèi)生廳醫(yī)學(xué)創(chuàng)新課題(2011-CXB-11)

    350009福州,福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院,福建省皮膚病研究所(趙雁、方芳、程波),病理研究室(葉郁紅);福建醫(yī)科大學(xué)新藥物研究所(吳麗賢)

    程波,Email:chengbofj@gmail.com

    猜你喜歡
    阿維瘤體克拉
    腹主動(dòng)脈瘤腔內(nèi)修復(fù)術(shù)后瘤體直徑及體積變化的隨訪研究
    一克拉便利店
    液氮冷凍與阿維A口服聯(lián)合治療多發(fā)性跖疣療效觀察
    阿維迪安黃金公司簡(jiǎn)介
    《克拉戀人》夏日里的歡樂(lè)之戀
    《牛陰莖乳頭狀瘤的外科治療》圖版
    體表軟組織巨大神經(jīng)纖維瘤的手術(shù)治療
    逾100克拉的“巨鉆”臨沂出了5顆
    瘤體刮除骨水泥填充治療膝關(guān)節(jié)周圍骨巨細(xì)胞瘤的療效分析
    阿維A(方希)治療特殊皮膚病病例征集擂臺(tái)賽通知
    精品国产一区二区三区四区第35| 成人国语在线视频| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 午夜91福利影院| 母亲3免费完整高清在线观看| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 后天国语完整版免费观看| 日韩有码中文字幕| 老司机午夜十八禁免费视频| 99久久综合精品五月天人人| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 成人三级做爰电影| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久午夜综合久久蜜桃| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 真人做人爱边吃奶动态| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲三区欧美一区| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 91精品国产国语对白视频| 亚洲专区字幕在线| 少妇 在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 午夜影院日韩av| 国产欧美日韩一区二区三| 国产黄a三级三级三级人| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 免费搜索国产男女视频| 在线观看午夜福利视频| 99热国产这里只有精品6| 精品欧美一区二区三区在线| 国产人伦9x9x在线观看| 国产1区2区3区精品| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 女同久久另类99精品国产91| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 桃色一区二区三区在线观看| 国产激情久久老熟女| 国产精品一区二区免费欧美| 看片在线看免费视频| 国产精品久久久久成人av| 亚洲五月色婷婷综合| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 新久久久久国产一级毛片| 国产高清激情床上av| www.999成人在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 一级片免费观看大全| 一区在线观看完整版| 婷婷丁香在线五月| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日韩免费高清中文字幕av| 国产视频一区二区在线看| 黄色 视频免费看| 国产深夜福利视频在线观看| 国产又色又爽无遮挡免费看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 天天添夜夜摸| 电影成人av| 中文字幕人妻熟女乱码| 女人被狂操c到高潮| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲中文日韩欧美视频| 色老头精品视频在线观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 神马国产精品三级电影在线观看 | 久久精品国产亚洲av高清一级| 青草久久国产| 女人精品久久久久毛片| 正在播放国产对白刺激| 精品久久久久久久久久免费视频 | 精品国产亚洲在线| 亚洲在线自拍视频| 午夜福利影视在线免费观看| 麻豆成人av在线观看| 精品电影一区二区在线| 亚洲国产看品久久| 日韩三级视频一区二区三区| 国产有黄有色有爽视频| 黄片大片在线免费观看| 桃色一区二区三区在线观看| 制服人妻中文乱码| 午夜91福利影院| 妹子高潮喷水视频| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲av美国av| 黄频高清免费视频| 两性夫妻黄色片| 最新在线观看一区二区三区| 国产人伦9x9x在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 又紧又爽又黄一区二区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 真人一进一出gif抽搐免费| 精品日产1卡2卡| 久久 成人 亚洲| 少妇 在线观看| 国产野战对白在线观看| 亚洲av美国av| 69av精品久久久久久| 亚洲欧美激情综合另类| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲人成77777在线视频| 久久精品成人免费网站| 99热国产这里只有精品6| 国产精品久久电影中文字幕| 一级毛片精品| 久热爱精品视频在线9| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 精品乱码久久久久久99久播| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 欧美精品一区二区免费开放| 精品欧美一区二区三区在线| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲成人免费电影在线观看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 88av欧美| 免费搜索国产男女视频| av福利片在线| 高清在线国产一区| 国产伦一二天堂av在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 国产xxxxx性猛交| 国产一区二区激情短视频| 久久久久久久久久久久大奶| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 黑人欧美特级aaaaaa片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 制服人妻中文乱码| 国产精品 欧美亚洲| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产精品久久久久成人av| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 丰满的人妻完整版| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 成人黄色视频免费在线看| 午夜久久久在线观看| netflix在线观看网站| 激情视频va一区二区三区| 啦啦啦免费观看视频1| 久久久国产精品麻豆| 一区二区三区精品91| 亚洲男人的天堂狠狠| 咕卡用的链子| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 午夜福利欧美成人| 天天添夜夜摸| 黄色片一级片一级黄色片| 国产精品永久免费网站| 久久久久久久久中文| 一区二区三区激情视频| 精品一品国产午夜福利视频| 极品教师在线免费播放| 亚洲人成电影免费在线| 高清av免费在线| 国产成+人综合+亚洲专区| 色哟哟哟哟哟哟| 另类亚洲欧美激情| 欧美成人性av电影在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产激情欧美一区二区| 亚洲五月色婷婷综合| 国产又色又爽无遮挡免费看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 无人区码免费观看不卡| 久久青草综合色| 国产99白浆流出| 久热这里只有精品99| 中文字幕人妻丝袜制服| 99久久国产精品久久久| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 麻豆成人av在线观看| avwww免费| 精品免费久久久久久久清纯| 老司机午夜十八禁免费视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 国产精品国产av在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久这里只有精品19| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲成人久久性| 日韩欧美一区视频在线观看| а√天堂www在线а√下载| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产激情欧美一区二区| 黄色 视频免费看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产野战对白在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 热99re8久久精品国产| 中文字幕av电影在线播放| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲成人国产一区在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 精品欧美一区二区三区在线| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 18禁观看日本| 老汉色av国产亚洲站长工具| 成人手机av| 久久影院123| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产又爽黄色视频| 免费观看人在逋| 女人精品久久久久毛片| 91九色精品人成在线观看| 波多野结衣高清无吗| videosex国产| 三级毛片av免费| 在线观看免费高清a一片| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 中文亚洲av片在线观看爽| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 大型黄色视频在线免费观看| 国产三级黄色录像| 久久香蕉激情| 久久青草综合色| 午夜视频精品福利| 成年人免费黄色播放视频| 制服诱惑二区| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 天堂俺去俺来也www色官网| 欧美黄色片欧美黄色片| 中亚洲国语对白在线视频| 国产精品久久电影中文字幕| 午夜激情av网站| 一进一出好大好爽视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 国产欧美日韩精品亚洲av| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 最近最新中文字幕大全电影3 | 麻豆av在线久日| 99久久综合精品五月天人人| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 日韩大尺度精品在线看网址 | av天堂在线播放| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 在线国产一区二区在线| 韩国精品一区二区三区| 午夜福利免费观看在线| 亚洲欧美激情综合另类| netflix在线观看网站| 欧美在线黄色| a在线观看视频网站| 高清欧美精品videossex| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 丁香欧美五月| 久久这里只有精品19| 丰满饥渴人妻一区二区三| 51午夜福利影视在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 精品国产美女av久久久久小说| 国产亚洲欧美98| 999精品在线视频| 夜夜爽天天搞| 757午夜福利合集在线观看| 久久精品人人爽人人爽视色| av国产精品久久久久影院| 两个人免费观看高清视频| 亚洲一区高清亚洲精品| av中文乱码字幕在线| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 香蕉丝袜av| 精品国内亚洲2022精品成人| 88av欧美| 9色porny在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 在线av久久热| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久这里只有精品19| 国产一区二区三区视频了| 电影成人av| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲色图综合在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 两个人看的免费小视频| 他把我摸到了高潮在线观看| av网站在线播放免费| 日本五十路高清| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 一级,二级,三级黄色视频| 无限看片的www在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 中文字幕av电影在线播放| 岛国视频午夜一区免费看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲avbb在线观看| 欧美在线黄色| av网站在线播放免费| 国产亚洲精品第一综合不卡| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 久久国产精品男人的天堂亚洲| 美女 人体艺术 gogo| 免费在线观看影片大全网站| 男人操女人黄网站| 国产成人欧美| 99在线视频只有这里精品首页| 免费不卡黄色视频| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲国产精品sss在线观看 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产精品免费视频内射| 91精品三级在线观看| 99久久国产精品久久久| 欧美乱色亚洲激情| 日韩精品免费视频一区二区三区| 日韩大码丰满熟妇| 丰满迷人的少妇在线观看| 99久久人妻综合| www.www免费av| 色综合婷婷激情| 久热这里只有精品99| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 不卡av一区二区三区| 午夜福利,免费看| 夜夜夜夜夜久久久久| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 老司机福利观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲精品国产色婷婷电影| 日韩精品青青久久久久久| 高清黄色对白视频在线免费看| 精品一区二区三区av网在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 男人的好看免费观看在线视频 | 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| www.精华液| ponron亚洲| 久久精品国产亚洲av高清一级| 天堂影院成人在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产精品电影一区二区三区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久精品亚洲av国产电影网| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 宅男免费午夜| 精品欧美一区二区三区在线| 久久婷婷成人综合色麻豆| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产主播在线观看一区二区| 久久久国产成人免费| 欧美国产精品va在线观看不卡| 长腿黑丝高跟| 一级片'在线观看视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久人妻av系列| 久久久国产欧美日韩av| 嫁个100分男人电影在线观看| 精品久久久精品久久久| 亚洲第一青青草原| 国产亚洲欧美98| 丰满饥渴人妻一区二区三| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产高清videossex| 成人国产一区最新在线观看| a级毛片在线看网站| 久久久久久久久中文| 亚洲第一青青草原| 中出人妻视频一区二区| 国产又爽黄色视频| svipshipincom国产片| 婷婷六月久久综合丁香| 级片在线观看| 天堂动漫精品| 亚洲色图综合在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 9191精品国产免费久久| а√天堂www在线а√下载| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲色图av天堂| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久99久视频精品免费| 好男人电影高清在线观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产三级在线视频| 人妻久久中文字幕网| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 99久久综合精品五月天人人| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲在线自拍视频| videosex国产| 成人永久免费在线观看视频| 精品福利永久在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 欧美精品亚洲一区二区| 色精品久久人妻99蜜桃| 色哟哟哟哟哟哟| bbb黄色大片| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产亚洲欧美98| 国产xxxxx性猛交| 国产精品 欧美亚洲| 国产一卡二卡三卡精品| 人人澡人人妻人| 国产av一区二区精品久久| 久久久国产成人精品二区 | 在线观看免费日韩欧美大片| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美+亚洲+日韩+国产| 很黄的视频免费| 精品久久久久久,| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产激情欧美一区二区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产精品一区二区精品视频观看| 青草久久国产| 日韩精品青青久久久久久| 久久久国产成人精品二区 | 免费观看精品视频网站| 99精国产麻豆久久婷婷| 精品福利观看| 久久午夜亚洲精品久久| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 中文字幕色久视频| 国产一卡二卡三卡精品| 黄色毛片三级朝国网站| 天堂中文最新版在线下载| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久久久久九九精品影院| 91字幕亚洲| 成年女人毛片免费观看观看9| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 黄片播放在线免费| 黑丝袜美女国产一区| a级毛片黄视频| 大香蕉久久成人网| 久久久久亚洲av毛片大全| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产免费av片在线观看野外av| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 久久久精品欧美日韩精品| 岛国在线观看网站| 一区二区三区精品91| 好男人电影高清在线观看| 久久草成人影院| 亚洲视频免费观看视频| 国产成人免费无遮挡视频| 日本免费a在线| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 色尼玛亚洲综合影院| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 大型av网站在线播放| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 啦啦啦免费观看视频1| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产av精品麻豆| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产精品九九99| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲久久久国产精品| 精品第一国产精品| 婷婷六月久久综合丁香| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 天天影视国产精品| 中文字幕色久视频| 好男人电影高清在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久性视频一级片| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲黑人精品在线| 色老头精品视频在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产伦一二天堂av在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 午夜福利在线免费观看网站| 91精品国产国语对白视频| 久久精品影院6| 亚洲在线自拍视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| tocl精华| 久久伊人香网站| 啦啦啦免费观看视频1| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲伊人色综图| 在线观看午夜福利视频| 欧美中文日本在线观看视频| 91字幕亚洲| 国产国语露脸激情在线看| 国产精品综合久久久久久久免费 | 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 在线永久观看黄色视频| av天堂久久9| 在线免费观看的www视频| 9色porny在线观看| 国产成年人精品一区二区 | 一二三四社区在线视频社区8| 免费观看精品视频网站| 成人国产一区最新在线观看| 精品国产一区二区久久| av天堂在线播放| 十分钟在线观看高清视频www| 久久国产乱子伦精品免费另类| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 精品久久蜜臀av无| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 午夜激情av网站| 日本一区二区免费在线视频| 两个人免费观看高清视频| 丝袜美足系列| 久久精品91无色码中文字幕| 99国产极品粉嫩在线观看| 正在播放国产对白刺激| 丝袜美腿诱惑在线| 超碰97精品在线观看| 欧美一级毛片孕妇| 黄色视频不卡| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 免费在线观看黄色视频的| 精品一品国产午夜福利视频| 男男h啪啪无遮挡| 老鸭窝网址在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 级片在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久欧美精品欧美久久欧美| 欧美丝袜亚洲另类 | 日本a在线网址| 日韩国内少妇激情av| 亚洲av第一区精品v没综合| 激情在线观看视频在线高清| 99riav亚洲国产免费| 欧美日韩亚洲高清精品| 日本wwww免费看| 亚洲精品在线观看二区| 中文字幕色久视频| av欧美777| xxx96com| 长腿黑丝高跟| 韩国精品一区二区三区| 首页视频小说图片口味搜索| 久久狼人影院| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲精品国产色婷婷电影| 午夜免费观看网址| xxxhd国产人妻xxx| 嫩草影院精品99| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲av熟女| 欧美成人午夜精品| 青草久久国产| 成人国产一区最新在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 国产高清激情床上av| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产一区二区激情短视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 丰满饥渴人妻一区二区三| 免费在线观看黄色视频的| 精品久久久久久,| 国产精品永久免费网站| 十八禁网站免费在线| 在线观看舔阴道视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 久久精品91蜜桃| 久99久视频精品免费| 亚洲国产精品sss在线观看 | 欧美日韩黄片免| 性少妇av在线| av在线播放免费不卡| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久热在线av| 69av精品久久久久久| 日本五十路高清| xxxhd国产人妻xxx| 午夜福利在线观看吧| 久久久国产欧美日韩av| 一级毛片精品| 嫁个100分男人电影在线观看|