紫草總色素的提取工藝*

周 健，王汝興，趙桂琴

（河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000）

技術(shù)方法

紫草總色素的提取工藝*

周 健，王汝興△，趙桂琴

（河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000）

紫草總色素；提取工藝；正交試驗(yàn)

紫草為紫草科紫草屬草本植物，分為新疆紫草、紫草和內(nèi)蒙紫草［1］。紫草主要成分為萘醌類色素和多糖類化合物，萘醌類多數(shù)成分結(jié)合成脂，脂溶性強(qiáng)，易溶于石油醚、氯仿，可溶于乙醇，微溶于水［2］。紫草為藥典收載臨床常用傳統(tǒng)中藥，有抗腫瘤、抗病毒、抗菌消炎等作用，其中左旋紫草素為主要的活性成分［3］。以左旋紫草素為先導(dǎo)化合物開發(fā)抗腫瘤、炎癥、病毒新藥的研究已成為熱點(diǎn)，與此同時(shí)，紫草素還是良好的天然色素，已廣泛用于食品、化妝品和印染工業(yè)中，需求量巨大，因此，對(duì)紫草素提取工藝的研究具有非常重要的意義［4］。為促進(jìn)紫草的應(yīng)用，本研究以新疆紫草為原料，對(duì)紫草總色素提取工藝進(jìn)行了研究，以期望為工業(yè)上生產(chǎn)低成本紫草總色素提供參考。

1 材料和儀器

1.1 材料與試劑 新疆紫草（新疆某醫(yī)藥公司）；95%乙醇（分

析純）。

1.2 儀器 HP-8453型紫外分光光度儀（惠普）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化EYELA）；DZKW-C電子恒溫水浴鍋（北京光明醫(yī)療儀器廠）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 提取工藝 新疆紫草全草40g，加入95%乙醇，水浴加熱保溫浸提，濾過，濾渣用95%乙醇水浴加熱保溫浸提，濾過，合并2次濾液，減壓回收乙醇，得濃縮液。

2.2 得率測(cè)定 準(zhǔn)確吸取1.00ml提取濃縮液置于100ml容量瓶中，加95%乙醇稀釋至刻度，用95%乙醇作參比。用紫外分光光度計(jì)，選擇516nm波長測(cè)定吸光度，按左旋紫草素（吸光系數(shù)E為242）計(jì)算紫草總色素質(zhì)量。按下列公式計(jì)算：

2.3 單因素實(shí)驗(yàn) 以95%乙醇為提取溶劑，考察提取溫度、料液比、提取時(shí)間對(duì)紫草總色素得率的影響。

2.4 正交實(shí)驗(yàn) 通過單因素試驗(yàn)，以提取溫度、提取時(shí)間和料液比3個(gè)因素?cái)M定3個(gè)水平作為考察對(duì)象（見表1），選取L9（34）正交表，分9組工藝條件進(jìn)行提取，每組藥材質(zhì)量均為40g，采用2.1項(xiàng)提取工藝進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以紫草總色素得率做為指標(biāo)。

表1 因素與水平表

3 結(jié)果與討論

3.1 提取時(shí)間對(duì)得率的影響 在選定其它條件不變的情況下，選取2、4、6、8、10、12、14、16h進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見圖1：

圖1 提取時(shí)間對(duì)得率的影響

圖1中出現(xiàn)兩個(gè)波峰，分別為4h和12h，且兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的得率非常接近，其原因可能為加熱時(shí)間超過4h以后，雜質(zhì)的浸出增加，得率下降；當(dāng)時(shí)間為12h，溶劑充分滲透進(jìn)入藥植物細(xì)胞，使得紫草總色素的浸出增加，并達(dá)到最大值；隨著時(shí)間的進(jìn)一步增加，紫草總色素的結(jié)構(gòu)遭到破壞，使得率驟降，并趨于平緩。從經(jīng)濟(jì)和工業(yè)化生產(chǎn)的角度考慮，選取提取時(shí)間為4h比較合理。

3.2 料液比對(duì)得率的影響 在選定其它條件不變的情況下，選取3、5、7、9、11ml/g 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見圖2：

圖2 料液比對(duì)得率的影響

由圖2可知，料液比在3-5ml/g時(shí)，得率急劇上升，并達(dá)到最大值，繼續(xù)增加料液比，得率下降，并趨于不變。由此表明，當(dāng)料液比逐漸增大，紫草總色素濃度增大，當(dāng)達(dá)到最佳比例后，濃度趨于飽和，同時(shí)雜質(zhì)的增加，促使得率下降，并趨于穩(wěn)定。綜合考慮，選取料液比為5ml/g。

3.3 溫度對(duì)得率影響 在選定其它條件不變的情況下，選取 30、40、50、60、70、80℃進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見圖3：

圖3 提取溫度對(duì)得率得影響

圖3表明，隨著溫度增加，得率增加，當(dāng)達(dá)到50℃時(shí)，基本達(dá)到最大值，50℃以后得率逐漸下降，原因可能為：溫度超過70℃，導(dǎo)致紫草總色素結(jié)構(gòu)完全被破壞。由此可見，提取的最佳溫度為50℃。

3.4 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析見表3：

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析表

正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，因素A、B和C對(duì)紫草總色素得率都有顯著的影響，三個(gè)因素對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響大小依次為A＞B＞C。因此，其最佳提取工藝條件為：A2B2C3，即溫度50℃，轉(zhuǎn)化時(shí)間4h，料液比6ml/g。

4 結(jié)論

紫草中左旋紫草素具有非常強(qiáng)的抗炎、抗腫瘤活性，而紫草總色素為左旋紫草素轉(zhuǎn)化的前體物質(zhì)，因此對(duì)紫草總色素得率的考察具有非常重要的意義。本研究表明，以新疆紫草為原料，以95%乙醇為提取溶劑，提取兩次，其最佳工藝條件為：溫度50℃，提取時(shí)間4h，料液比6ml/g。此工藝提取紫草素，方便簡潔，經(jīng)濟(jì)環(huán)保，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

［1］嚴(yán)松柏，譚獻(xiàn)和，胡玉濤，紫草的研究進(jìn)展［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2003，14（2）：103-104.

［2］李家泰.臨床藥理學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1991.647.

［3］周健.新疆紫草化學(xué)成分的研究及根與莖殘基成分的比較［D］.成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

［4］葛峰，王曉東，王玉春.藥用紫草研究進(jìn)展［J］.中草藥，2003，34（9）：附6-10.

R284.2

A

1004-6879（2015）03-0233-02

2014-12-03）

* 河北省高等學(xué)?？茖W(xué)研究計(jì)劃（Q2012096）