紫外分光光度法和酸堿滴定法測(cè)定復(fù)方制劑鎮(zhèn)痛靈中烏頭總堿含量的比較

姚閩 汪軍

（江西省藥物研究所 南昌330029）

含烏頭類生物堿的中藥主要有川烏、草烏、附子等。這些中藥中的烏頭堿類生物堿是其鎮(zhèn)痛作用的主要有效成分，具有很強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛活性，同時(shí)具有較強(qiáng)的毒性，起效劑量和中毒劑量非常接近，臨床應(yīng)用這類中藥時(shí)，除經(jīng)炮制降低其毒性外，還應(yīng)嚴(yán)格控制其用量來預(yù)防這類藥物中毒事件的發(fā)生。因此，研究含烏頭類生物堿的中藥在中藥復(fù)方制劑中的含量測(cè)定方法彰顯必要。本實(shí)驗(yàn)中研究的對(duì)象鎮(zhèn)痛靈制劑是由醫(yī)院制劑原生痛膠囊根據(jù)中醫(yī)學(xué)理論，結(jié)合臨床實(shí)踐，予以加減化裁而成的中藥復(fù)方制劑，由制川烏、延胡索、胡椒、白芍等中藥組成，其中含烏頭類生物堿的中藥制川烏辛溫，通行十二經(jīng)，溫陽祛寒，除濕化瘀，故破積聚，溫經(jīng)止痛。本文比較不同的含量測(cè)定方法對(duì)其制劑中烏頭總生物堿含量測(cè)定的差異，確定最優(yōu)方法，為含烏頭類生物堿藥材的中藥復(fù)方制劑中烏頭總堿的含量評(píng)價(jià)提供參考。

1 儀器與試藥

U-3000型紫外-可見分光光度計(jì)（日本日立公司）；電子分析天平 AE-240；精密 pH 計(jì)（PHS-3S）；超聲機(jī)（KQ-250VDB型雙頻數(shù)顯）。乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純，水為重蒸水。烏頭堿對(duì)照品：購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所（0844-20003，供含量測(cè)定用）。鎮(zhèn)痛靈顆粒：自制。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

分別采用紫外分光光度法考察樣品取樣量與吸光度之間的相關(guān)性和采用酸堿滴定法考察樣品取樣量與滴定液消耗量的相關(guān)性，以比較紫外分光光度法和酸堿滴定法在測(cè)定烏頭總堿含量方面的特點(diǎn)。

2.1 紫外分光光度法[1]

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取烏頭堿對(duì)照品5mg，置50 ml量瓶中，加氯仿溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液（每1 ml中含烏頭堿0.1mg），精密吸取對(duì)照品溶液 1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置分液漏斗中，依次精密加入氯仿至20 ml，再精密加入pH3.0醋酸鹽緩沖液（稱取無水醋酸鈉0.15 g，加水使溶解，加冰醋酸5.6 ml，用水稀釋至500 ml，搖勻，并在pH計(jì)上校正）20 ml和0.1%溴甲酚綠溶液（取溴甲酚綠0.2 g，加0.05 mol/L氫氧化鈉溶液3.2 ml使溶解，用水稀釋至200 ml，搖勻）2 ml，強(qiáng)力振搖 5 min，靜置 20 min，分取氯仿層，用干燥濾紙濾過，同時(shí)制備空白對(duì)照，濾液分別在412 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)，對(duì)照品量（mg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程：Y=1.321X+0.211 5，R2=0.995 5。結(jié)果表明：烏頭堿在0.1～0.5 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果

2.1.2 測(cè)定法 取鎮(zhèn)痛靈干膏粉（批號(hào)：20070326）適量，研細(xì)，分別取 1 g、2 g、3 g、4 g、5 g（各 2 份），精密稱定，放入三角瓶?jī)?nèi)，加乙醚∶氯仿∶無水乙醇（16∶8∶1）的混合液25 ml和氨試液1.5 ml，搖勻，放置24 h，取出后于振蕩器上振搖5 min，取出靜置，過濾，殘?jiān)没旌弦合?次，合并濾液，濾液水浴蒸干，用乙醚50 ml溶解轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用0.05 mol/L硫酸溶液萃取4次（每次10 ml），分取硫酸層，過濾，合并濾液。置另一分液漏斗中，加濃氨4 ml，搖勻，用氯仿提取 4 次（20 ml、20 ml、10 ml、10 ml），分取氯仿層，濾過合并濾液，蒸干。殘?jiān)?05℃烘1 h，取出放冷，加pH3.0的NaAc-HAc緩沖液溶解，轉(zhuǎn)移并定容至25 ml容量瓶中，備用。精密吸取供試品溶液20 ml于分液漏斗中，精密加入氯仿20 ml和0.1%溴甲酚綠溶液2 ml，振搖5 min，靜置20 min，分取氯仿層，依法測(cè)定吸收度，記錄，以浸膏量和吸收度的均值做相關(guān)性分析，即得。

2.2 酸堿滴定法[2]精密稱取鎮(zhèn)痛靈浸膏（批號(hào)：20070326）1.0 g、1.5 g、2.0 g、2.5 g、3.0 g、3.5 g，每個(gè)重量稱取2份，分別置于三角燒瓶中，加入乙醚∶氯仿（3∶1）混合液 30 ml和氨試液 3 ml，搖勻，放置過夜。取出，過濾，殘?jiān)右颐选寐确拢?∶1）混合液20 ml，振蕩1 h，過濾，殘?jiān)没旌弦合?次，每次10 ml，合并濾液，置水浴中蒸干，用混合液溶解，蒸干，用5 ml無水乙醇溶解，并轉(zhuǎn)移至25 ml容量瓶中，精密加入0.01 mol/L硫酸滴定液10 ml，加水至刻度，放置20 min，濾過，精密吸取續(xù)濾液10 ml于小三角燒瓶中，加甲基紅指示液1滴，用0.02 mol/L濃度NaOH滴定液滴定至黃色，記錄所消耗的NaOH量，并換算成被反應(yīng)硫酸滴定液的量，以浸膏量平均值與被反應(yīng)硫酸滴定液量的均值做相關(guān)性分析，即得。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 紫外分光光度法實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見表2。以浸膏量平均值（g）為橫坐標(biāo)，以平均吸收度為縱坐標(biāo)做相關(guān)性比較，得相關(guān)性方程為：Y=0.0107X+0.7153，R2=0.5947。

表2 紫外分光光度法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.3.2 酸堿滴定法實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見表3。以浸膏量平均值（g）為橫坐標(biāo)，以平均被反應(yīng)硫酸滴定液的量（ml）為縱坐標(biāo)做相關(guān)性比較，得相關(guān)方程為：Y=1.393 7X+0.564 6，R2=0.991 9。

表3 酸堿滴定法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

3 討論

從上述兩種方法的比較結(jié)果來看，在中藥復(fù)方制劑中測(cè)定烏頭類總生物堿的含量，以酸堿滴定法更適合，樣品取樣量與消耗硫酸滴定液的量具有較好的相關(guān)性（R2=0.991 9），不同稱樣量所測(cè)樣品中烏頭類總生物堿含量重復(fù)性較好（RSD%=7.34%）。而使用紫外分光光度法測(cè)定鎮(zhèn)痛靈中烏頭總堿的含量，其取樣量和吸收度均值之間的相關(guān)性較差（R2=0.594 7），并且實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜，誤差產(chǎn)生較大。這與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相符合[3]。但是滴定法測(cè)定中藥復(fù)方制劑中烏頭類總生物堿的含量，受到其他成分的干擾，本次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)測(cè)定了陰性樣品消耗硫酸滴定液的量，通過該量計(jì)算出的烏頭類總生物堿含量為0.25%，約占所測(cè)得總浸膏中烏頭類總生物堿含量（2.09%）的十分之一，所以用酸堿滴定法測(cè)定中藥復(fù)方制劑樣品中烏頭類總生物堿含量的專屬性仍需要進(jìn)一步研究。

[1]王蘇會(huì).抗風(fēng)濕顆粒的制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].北京:北京中醫(yī)藥大學(xué),2005

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].2010年版一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.111

[3]何軍,祝林,奉建芳.附子總生物堿含量測(cè)定方法比較[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2003,17(6):20-21