通塞脈片對慢性低灌注大鼠腦損傷的保護(hù)作用探索

張 聰 尤奮強(qiáng)

（南京中醫(yī)藥大學(xué)·210000）

慢性低灌注是指各種原因引發(fā)的長期腦血流灌注不足，在血管性癡呆（VD）、Bins wanger病、Alzheimer's disease（AD）等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展過程起著重要的作用，慢性低灌注引發(fā)的各種腦損傷近年來發(fā)病率呈上升趨勢。探索一種既可以最大限度地減少醫(yī)源性風(fēng)險又能有效地保護(hù)大腦的藥物是當(dāng)今醫(yī)療界所面臨的重要課題。中成藥通塞脈片具有活血祛瘀通絡(luò)、益氣養(yǎng)陽的功效，由金銀花、黃芪、當(dāng)歸、玄參、和石斛六味藥組成，是臨床治療缺血性腦中風(fēng)的特效藥，并且對閉塞性動脈硬化癥，靜脈血栓形成都有滿意的療效。研究發(fā)現(xiàn)，通塞脈片對大腦中動脈栓塞模型有保護(hù)作用，能促進(jìn)血流恢復(fù)，增加缺血區(qū)的血流灌注量，改善腦組織缺血缺氧狀態(tài)。因此，我們推測，通塞脈片很可能參與血管性癡呆的保護(hù)作用，這有待于進(jìn)一步的研究，這些問題的解決，將為臨床治療血管性癡呆提供新的策略。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

清潔級wistar大鼠,60只,雄性,體重200～240g,由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供。

1.2 大鼠慢性低灌注模型制備

慢性低灌注模型采用大鼠雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎（2VO）。按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)隨機(jī)分組，手術(shù)前先將實(shí)驗(yàn)大鼠斷食12小時，斷水6小時。稱量體重，用10%水合氯醛腹腔注射（0.3ml/100g）進(jìn)行麻醉。手術(shù)臺為恒溫操作臺，仰臥位固定，頸正中線切口，沿胸鎖乳突肌內(nèi)緣分離肌肉和筋膜，分離出左右頸總動脈進(jìn)行永久性結(jié)扎。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠常溫分籠飼養(yǎng)。

1.3 藥物來源及給藥方案

通塞脈片由江蘇南星藥業(yè)有限責(zé)任公司提供。本方案大鼠共分為3組，分別為假手術(shù)組、模型組和治療組。模型組與治療組構(gòu)建大鼠慢性低灌注2VO 模型，治療組給予通塞脈灌胃治療(12.44g/kg.d)。

1.4 Morris水迷宮的原理

Morris水迷宮是英國心理學(xué)家Morris設(shè)計(jì)并應(yīng)用于腦學(xué)習(xí)記憶機(jī)制研究的一種實(shí)驗(yàn)手段。測試程序主要包括定位航行試驗(yàn)和空間探索試驗(yàn)兩個部分。其中定位航行試驗(yàn)(place navigation)將大鼠面向池壁分別從4個入水點(diǎn)放入水中若干次,記錄其尋找到隱藏在水面下平臺的時間(逃避潛伏時間,escape latency)。空間探索試驗(yàn)(spatial probe)是在定位航行試驗(yàn)后去除平臺,然后任選一個入水點(diǎn)將大鼠放入水池中,記錄其在一定時間內(nèi)的游泳軌跡,考察大鼠對原平臺的記憶。

1.5 Morris水迷宮的試驗(yàn)方法

將實(shí)驗(yàn)大鼠頭朝池壁放入水中，放入位置隨機(jī)取東、西、南、北四個起始位置之一。記錄動物找到水下平臺的時間（s）。在前幾次訓(xùn)練中，如果這個時間超過60s，則引導(dǎo)動物到平臺。讓動物在平臺上停留10s.將大鼠移開、擦干。每只大鼠每天訓(xùn)練4次，兩次訓(xùn)練之間間隔15~20min,連續(xù)訓(xùn)練5d。最后一次獲得性訓(xùn)練結(jié)束后的第二天，將平臺撤除，開始60s的探查訓(xùn)練。將動物由原先平臺象限的對側(cè)放入水中。記錄動物在目標(biāo)象限（原先放置平臺的象限）所花的時間和進(jìn)入該象限的次數(shù)，以此作為空間記憶的檢測指標(biāo).測定動物的工作記憶（working memory）。探查訓(xùn)練結(jié)束后的第二天，開始維持4天的對位訓(xùn)練。將平臺放在原先平臺所在象限的對側(cè)象限，方法與獲得性訓(xùn)練相同。每天訓(xùn)練4次。每次記錄找到平臺的時間和游泳距離以及游泳速度。

2 結(jié)果

2.1 治療兩周組Morris水迷宮結(jié)果對比

分別對兩個對照組別的三個小組假手術(shù)組，模型組以及治療兩周組的實(shí)驗(yàn)對象進(jìn)行Morris水迷宮測試，對實(shí)驗(yàn)對象的空間認(rèn)知能力和記憶力做出判斷，測定結(jié)果參見圖2.1,、圖2.2和圖2.3。

圖2.1 2周組大鼠學(xué)習(xí)Morris水迷宮潛伏時間成績

圖2.2 2周組大鼠學(xué)習(xí)Morris水迷宮游泳里程成績

圖2.3 2周組大鼠學(xué)習(xí)Morris水迷宮平臺象限時間成績

2.2 治療四周組Morris水迷宮結(jié)果對比

分別對兩個對照組別的三個小組假手術(shù)組，模型組以及治療四周組的實(shí)驗(yàn)對象進(jìn)行Morris水迷宮測試，對實(shí)驗(yàn)對象的空間認(rèn)知能力和記憶力做出判斷，測定結(jié)果參見圖2.4,、圖2.5和圖2.6。

圖2.4 4周組大鼠學(xué)習(xí)Morris水迷宮潛伏時間成績

圖2.5 4周組大鼠學(xué)習(xí)Morris水迷宮游泳里程成績

圖2.6 4周組大鼠學(xué)習(xí)Morris水迷宮平臺象限時間成績

3 結(jié)論與討論

本研究考察了不同治療時間的通塞脈對大鼠慢性低灌注腦損傷的保護(hù)作用兩個對照組別的實(shí)驗(yàn)對象分別進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)慢性低灌注大鼠模型潛伏時間較長，游泳路程較長，平臺象限時間較短，通過通塞脈片治療的實(shí)驗(yàn)組隨著治療時間的延長，水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果有所改善，說明通塞脈片在對大鼠腦損傷治療起到了一定作用。有研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸作為通塞脈片中的君藥，其有效成分當(dāng)歸內(nèi)酯能減少局灶性的腦缺血損傷。有效成分藁本內(nèi)酯具有良好的改善微循環(huán)作用,可用于防治與微循環(huán)障礙有關(guān)的疾病。以上機(jī)制只是結(jié)合已有研究所做猜測，其確切的保護(hù)作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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