春雷霉素和噻霉酮對(duì)番茄斑疹病菌聯(lián)合毒力及防病效果

苗則彥，趙 楊，李 穎，寇永春，白元俊

(1. 遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，遼寧省農(nóng)作物有害生物控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，沈陽(yáng) 110161；2. 新民市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，遼寧 110300)

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春雷霉素和噻霉酮對(duì)番茄斑疹病菌聯(lián)合毒力及防病效果

苗則彥1，趙 楊1，李 穎1，寇永春2，白元俊1

(1. 遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，遼寧省農(nóng)作物有害生物控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，沈陽(yáng) 110161；2. 新民市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，遼寧 110300)

通過(guò)平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定了春雷霉素和噻霉酮對(duì)引起番茄斑疹病的丁香假單胞桿菌番茄致病變種(Pseudomonassyringaepv.tomato)的毒力及兩種藥劑混配的聯(lián)合毒力。結(jié)果表明：春雷霉素和噻霉酮對(duì)番茄斑疹病菌具有抑制作用，EC50值分別為5.32 μg/mL和2.66 μg/mL；聯(lián)合毒力的測(cè)定結(jié)果表明：春雷霉素和噻霉酮質(zhì)量比1∶1的配比增效作用最強(qiáng)。田間試驗(yàn)結(jié)果表明：春雷霉素、噻霉酮及春雷霉素與噻霉酮(1∶1)混劑，田間防治效果均達(dá)到80%以上，混劑防治效果顯著高于單劑。

番茄斑疹病菌； 殺菌劑； 毒力； 聯(lián)合毒力

番茄斑疹病[Pseudomonassyringaepv.tomato(Okabe)Young, Dye & Wilkie]又名番茄斑點(diǎn)病，是番茄上發(fā)生的一種細(xì)菌性病害。主要危害番茄葉片、莖稈和果實(shí)，造成產(chǎn)量損失可達(dá)5%～75%[1-3]。該病害遍及歐洲、北美洲、澳大利亞、非洲[4]等一些國(guó)家。在我國(guó)的廣西[5]、東北三省[6]、甘肅[7]、新疆[8]、福建[9]等多個(gè)地區(qū)發(fā)生，且有逐年加重、逐步蔓延的趨勢(shì)。目前使用抗病品種、農(nóng)業(yè)防治、化學(xué)防治及無(wú)菌種子是該病害防治的主要措施[4]。國(guó)外學(xué)者關(guān)注利用甲基桿菌(Methylobacteriumoryzae)[10]以及植物內(nèi)生細(xì)菌中的短小芽胞桿菌(Bacilluspumilus)和解淀粉芽胞桿菌(B.amyloliquefaciens)[11]進(jìn)行病害防治研究。

生產(chǎn)實(shí)踐中化學(xué)藥劑如波爾多液、代森錳鋅、代森鋅[12-13]、72%農(nóng)用鏈霉素、新植霉素、50%琥膠肥酸酮(DT)、氫氧化銅(77%可殺得)、25%絡(luò)氨銅、20%噻菌銅[14-16]、中生菌素和春雷霉素[17]等廣泛應(yīng)用于病害防治。春雷霉素是(5-氨基-2-甲基-6-(2，3，4，5，6-羥基環(huán)己基氧代)四氫吡喃-3-基)氨基-α-亞氨醋酸，由放線菌(Streptomyceskasugaensis)產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，屬農(nóng)用抗菌素類殺菌劑，具有較強(qiáng)的內(nèi)吸性，有預(yù)防和治療作用。噻霉酮屬于有機(jī)雜環(huán)類化合物，具有高效、廣譜、低毒、綠色環(huán)保等優(yōu)良特性，是防治多種細(xì)菌、真菌性病害的殺菌劑。目前尚無(wú)噻霉酮和春雷霉素復(fù)配防治番茄斑疹病的報(bào)道。本研究旨在探討春雷霉素和噻霉酮對(duì)番茄斑疹病菌的聯(lián)合毒力及防病效果，為殺菌劑科學(xué)混配提高防病效果、減少用藥量、降低成本和延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試病原菌

番茄斑疹病菌(Pseudomonassyringaepv.tomato)為從沈陽(yáng)地區(qū)保護(hù)地番茄發(fā)病葉片和莖稈上分離純化并已通過(guò)生理生化和分子鑒定的菌株[18]。

1.2 供試藥劑

76.44%春雷霉素原藥：延邊春雷藥業(yè)有限公司提供；用無(wú)菌水配制成1%母液備用，梯度質(zhì)量濃度設(shè)計(jì)為：4.5、5.0、5.5、6.0、6.5 μg/mL。

84%噻霉酮原藥：陜西西大華特科技實(shí)業(yè)有限公司提供；用丙酮配制成1%母液備用，梯度質(zhì)量濃度設(shè)計(jì)為：2.4、2.5、2.6、2.7、2.8 μg/mL。

1.3 供試藥劑對(duì)病原菌的毒力測(cè)定

通過(guò)預(yù)備試驗(yàn)，選擇供試殺菌劑使番茄細(xì)菌性斑疹病菌在帶藥平板上生長(zhǎng)菌落數(shù)為20～200之間的5個(gè)質(zhì)量濃度。參照游文莉試驗(yàn)方法[19]，用平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定。將供試細(xì)菌菌株在KB培養(yǎng)基上27 ℃培養(yǎng)48 h，刮取菌苔制備細(xì)菌懸浮液，測(cè)定A600值，對(duì)照本實(shí)驗(yàn)室測(cè)定病原菌濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，將菌懸液濃度調(diào)為3×107cfu/mL(約150～250 cfu/皿)，將滅菌的50 mL KB培養(yǎng)基熱溶化完全，冷卻至45 ℃左右，迅速吸取1 mL配制好的細(xì)菌懸浮液加入培養(yǎng)基內(nèi)，再分別加入1 mL不同梯度濃度藥劑，充分混合均勻后迅速倒入培養(yǎng)皿中，設(shè)置清水CK，即加入1 mL細(xì)菌懸浮液和1 mL無(wú)菌水于培養(yǎng)基內(nèi)，4次重復(fù)，72 h后調(diào)查菌落數(shù)量；計(jì)算殺菌劑不同質(zhì)量濃度下病菌菌落的抑制率并轉(zhuǎn)換為抑制率幾率值，以供試殺菌劑濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以抑制率幾率值為縱坐標(biāo)，利用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)3.01專業(yè)版求出毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)和EC50值。

1.4 藥劑不同配比對(duì)病原菌的聯(lián)合毒力測(cè)定

春雷霉素和噻霉酮的質(zhì)量比為：1∶1、1∶3、1∶5、1∶7和1∶9,每個(gè)質(zhì)量比設(shè)5個(gè)質(zhì)量濃度，每個(gè)質(zhì)量濃度接種4皿，接種后置于27 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)72 h后，計(jì)算菌落數(shù)量(cfu/mL)和混劑抑菌率，分別求得藥劑不同混配比例的毒力回歸方程、EC50和相關(guān)系數(shù)。

并根據(jù)Wadley 公式計(jì)算SR值，確定不同比例混劑的相互作用。EC50理論值=(a+b)/[(a/ EC50A)+(b/ EC50B)]，R=EC50理論值/ EC50實(shí)際值，式中A、B 分別代表春雷霉素和噻霉酮；a、b分別代表春雷霉素和噻霉酮在混劑中含量的比率；以R值代表相互作用程度。當(dāng)R值≤0. 5 時(shí)，表示拮抗作用；當(dāng)R值≥1.5時(shí)，表示增效作用；當(dāng)R=0.5～1.5時(shí)，表示加和作用。

1.5 田間試驗(yàn)

1.5.1 供試藥劑

2%春雷霉素水劑：北興化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社提供，施藥量為2 632 mL/hm2；1.6%噻霉酮涂抹劑：陜西西大華特科技實(shí)業(yè)有限公司，施藥量為750 g/hm2；春雷霉素和噻霉酮混劑，按照質(zhì)量比1∶1混配(兩個(gè)商品制劑按照質(zhì)量比1∶4.39)混配制劑的施藥量為1 095 g/hm2。

1.5.2 試驗(yàn)地概況

試驗(yàn)在遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所溫室內(nèi)完成，土壤為壤土，中等肥力。試驗(yàn)期間未使用殺蟲劑和其他殺菌劑。

1.5.3 人工接種及藥劑處理方法

番茄品種為‘L402’，每個(gè)處理30株，4次重復(fù)，植株長(zhǎng)到4片真葉時(shí)進(jìn)行病原菌噴霧接種。接種時(shí)以將葉片正反面噴濕為準(zhǔn)，對(duì)照噴清水。接種后立即保濕，白天溫度控制在25～27 ℃，夜間15～20 ℃，保濕24 h后，進(jìn)行1次噴施藥劑處理，噴藥時(shí)以將葉片正反面噴濕為準(zhǔn)，對(duì)照噴清水，15 d后按照如下病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查發(fā)病情況和計(jì)算藥劑防病效果。

病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[20]：0 級(jí)，無(wú)病斑；1 級(jí)，病斑1～10個(gè)/ 株；2 級(jí)，病斑11～20個(gè)/ 株；3 級(jí)，病斑21～ 40個(gè)/ 株；4 級(jí)，病斑多于40個(gè)/ 株。

病情指數(shù)(DI)=Σ(病級(jí)數(shù)值×該病級(jí)株數(shù))×100/(病級(jí)最高值×調(diào)查株數(shù));

防病效果(%)=[(對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對(duì)照病情指數(shù)]×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 兩種殺菌劑對(duì)靶標(biāo)病菌生長(zhǎng)的抑制作用

結(jié)果顯示，春雷霉素和噻霉酮對(duì)番茄斑疹病菌均有抑制作用，EC50值分別為5.32 μg/mL和2.66μg/mL，番茄斑疹病菌對(duì)兩種藥劑敏感，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 春雷霉素和噻霉酮對(duì)番茄斑疹病菌室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果

2.2 兩種藥劑配比對(duì)病原菌的聯(lián)合毒力

由表2可看出，春雷霉素與噻霉酮的5個(gè)配比均表現(xiàn)出增效作用，增效系數(shù)為1.98～2.38，其中春雷霉素∶噻霉酮(1∶1)表現(xiàn)最優(yōu)，增效系數(shù)達(dá)到2.38。

表2 春雷霉素和噻霉酮對(duì)番茄斑疹病菌聯(lián)合毒力測(cè)定結(jié)果

2.3 不同處理田間試驗(yàn)

田間試驗(yàn)結(jié)果表明，春雷霉素、噻霉酮及春雷霉素和噻霉酮(1∶1)混劑，田間防治效果均達(dá)到80%以上。在α=0.05和α=0.01水平上春雷霉素和噻霉酮混劑的防效均顯著高于春雷霉素和噻霉酮。

表3 不同處理對(duì)番茄斑疹病的田間防治效果1)

1) 1,2,3,4表示4次重復(fù)。同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母和大寫字母分別表示0.05水平下和0.01水平下差異顯著。

The number 1,2,3,4 represented four replicates. Different lowercase and uppercase letters in the same column indicated significant difference at 0.05 and 0.01 levels, respectively.

3 結(jié)論與討論

室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明，春雷霉素和噻霉酮EC50值分別為5.32 μg/mL和2.66 μg/mL，番茄斑疹病菌對(duì)兩種殺菌劑具有敏感性，可以作為田間防治的理想藥劑。春雷霉素、噻霉酮及春雷霉素和噻霉酮混劑田間藥效試驗(yàn)顯示較好的防病效果，其中混劑防效顯著高于兩個(gè)單劑，建議在田間防治實(shí)踐中進(jìn)行示范應(yīng)用。

春雷霉素屬農(nóng)用抗菌素類殺菌劑，急性經(jīng)口、經(jīng)皮毒性低，是綠色食品生產(chǎn)用藥，在試驗(yàn)中曾加大春雷霉素使用比例，減少噻霉酮用量，但無(wú)增效作用。春雷霉素和噻霉酮質(zhì)量比(1∶1)在室內(nèi)外均表現(xiàn)最好，在保證防效的同時(shí)，最大限度混用春雷霉素。

另在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，代森錳鋅、新植霉素、50%琥膠肥酸酮(DT)雖在各類文獻(xiàn)中被廣泛推薦，但這3種藥劑對(duì)番茄斑疹病菌幾乎不抑制。氫氧化銅(77%可殺得)、中生菌素對(duì)病菌雖有抑制效果，但已產(chǎn)生一定抗藥性，不建議施用。72%農(nóng)用鏈霉素?zé)o論室內(nèi)外試驗(yàn)均表現(xiàn)出很好的防治作用，建議與春雷霉素和噻霉酮輪換使用。

任建國(guó)2011年研究報(bào)道，供試藥劑波爾·錳鋅(科博)、二氯異氰尿酸鈉和新植霉素對(duì)病原菌有明顯的抑制作用，其EC50值分別為1.109 4、1.116 9和1.074 8 mg/L[21]。采用的試驗(yàn)方法是將濾紙片浸泡在藥液中，然后再放到含病原菌的培養(yǎng)基中，通過(guò)測(cè)定抑菌直徑計(jì)算EC50值。不同藥劑在培養(yǎng)基中的擴(kuò)散能力可能不同，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果會(huì)產(chǎn)生直接影響。如抑菌效果好的春雷霉素，采用這種試驗(yàn)方法對(duì)病原菌幾乎無(wú)抑制作用。對(duì)于波爾·錳鋅、二氯異氰尿酸鈉兩種藥劑的室內(nèi)毒力情況，將采用菌落計(jì)數(shù)法進(jìn)一步研究。

在遼寧地區(qū)該病多為突發(fā)性，與種子帶菌有直接關(guān)系，Bashan研究證實(shí)該病害為種子傳播[22]，種子處理是防治該病害的關(guān)鍵，關(guān)注田間藥劑防治的同時(shí)，側(cè)重研究處理種子的藥劑種類和方法，對(duì)番茄斑疹病的防治將起到重要作用。

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Co-toxicity of kasugamycin and benziothiazolinone to Pseudomonassyringaepv.tomatoand its control effect

Miao Zeyan1, Zhao Yang1, Li Ying1, Kou Yongchun2, Bai Yuanjun1

(1.Liaoning Academy of Agricultural Sciences, Liaoning Key Laboratory of Crop Pest Management, Shenyang 110161，China； 2.Agricultural Technology Extension Center of Xinmin, Liaoning 110300，China)

The toxicity and co-toxicity of kasugamycin and benziothiazolinone toPseudomonassyringaepv.tomatowere tested by method of plate colony-counting.The results showed that kasugamycin and benziothiazolinone were inhibitory againstP.syringaepv.tomatowith the EC50values of 5.32 μg/mL and 2.66 μg/mL, respectively. The mixture of kasugamycin and benziothiazolinone with the ratio of 1∶1 had the best synergism. The control effect of kasugamycin, benziothiazolinone and their mixture were all above 80%, and the mixture had significantly higher efficacy.

Pseudomonassyringaepv.tomato; fungicide; toxicity; combined toxicity

2014-03-13

2014-09-18

遼寧省沈陽(yáng)市農(nóng)業(yè)科技共建項(xiàng)目(2013019)

S 482.2

B

10.3969/j.issn.0529-1542.2015.02.042

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