下調(diào)G3BP對(duì)抑制腫瘤細(xì)胞遷移能力的研究

張浩，張彩霞，喻冬柯，邵榮光，何紅偉

·論著·

下調(diào)G3BP對(duì)抑制腫瘤細(xì)胞遷移能力的研究

張浩，張彩霞，喻冬柯，邵榮光，何紅偉

目的探討利用siRNA和靶向G3BP的多肽藥物下調(diào)G3BP后對(duì)多種腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響。

方法采用人纖維肉瘤HT1080細(xì)胞、乳腺癌MCF-7細(xì)胞以及人非小細(xì)胞肺癌H1299細(xì)胞，應(yīng)用siRNA特異性干擾G3BP后，通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)觀察其對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響；用多肽藥物GAP161作用于腫瘤細(xì)胞后，利用劃痕實(shí)驗(yàn)以及Transwell遷移實(shí)驗(yàn)觀察其對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響；在MCF-7細(xì)胞中高表達(dá)G3BP1，在MDA-MB-231細(xì)胞中用siRNA下調(diào)G3BP1后，采用人全基因芯片分析G3BP1高表達(dá)和低表達(dá)后的基因表達(dá)譜，并進(jìn)行信號(hào)通路分析。

結(jié)果siRNA特異性下敲G3BP1和G3BP2后，HT1080、MCF-7和H1299細(xì)胞的遷移能力顯著降低。利用靶向G3BP的特異性多肽藥物GAP161作用于多種腫瘤細(xì)胞后，腫瘤細(xì)胞的遷移能力顯著下調(diào)。全基因組芯片分析表明：多個(gè)基因同時(shí)在G3BP1高表達(dá)和低表達(dá)組中發(fā)生變化，該變化與細(xì)胞遷移相關(guān)的細(xì)胞黏附、整合素、MAPK等信號(hào)通路有關(guān)。

結(jié)論G3BP下調(diào)后能夠顯著降低腫瘤細(xì)胞的遷移能力。靶向G3BP的多肽藥物具有顯著抑制腫瘤細(xì)胞遷移的作用。下調(diào)或者高表達(dá)G3BP后可通過(guò)下調(diào)或者上調(diào)多種與細(xì)胞黏附、整合素、MAPK等信號(hào)通路相關(guān)基因發(fā)揮作用。

細(xì)胞系，腫瘤；細(xì)胞遷移抑制；基因表達(dá)譜；MAP激酶信號(hào)系統(tǒng)；G3BP

腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征，大多數(shù)癌癥患者并非死于原發(fā)性癌而是死于轉(zhuǎn)移性癌。惡性腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移是多因素、多基因相互協(xié)調(diào)作用的多階段過(guò)程，因此控制癌癥細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)在腫瘤治療中非常重要。G3BP1是通過(guò)免疫共沉淀分離得到的第一個(gè)RasGAP SH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白，之后發(fā)現(xiàn)G3BP2也可與RasGAP相互作用，從而認(rèn)為G3BP在Ras信號(hào)傳導(dǎo)途徑中起作用［1-3］。研究發(fā)現(xiàn)，G3BP在多種腫瘤中過(guò)表達(dá)，包括頭頸部癌、肺癌、結(jié)直腸癌和乳腺癌［4-5］。G3BP還參與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)，Taniuchi等［6-7］發(fā)現(xiàn)G3BP能夠結(jié)合并且降解BART的mRNA，從而下調(diào)它的表達(dá)量。BART能夠抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲。前期研究我們發(fā)現(xiàn)，下調(diào)G3BP能夠抑制HCT116細(xì)胞增殖并且引起細(xì)胞凋亡，還能夠抑制肺癌細(xì)胞的增殖和侵襲轉(zhuǎn)移能力［8-9］。本研究中我們采用特異性siRNA和靶向G3BP的多肽藥物GAP161作為工具，探討了G3BP對(duì)多種腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響，進(jìn)一步采用基因芯片的方法對(duì)瞬時(shí)下敲和高表達(dá)G3BP1的乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行全基因組表達(dá)譜分析，分析其對(duì)遷移相關(guān)基因以及信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響，為G3BP作為一個(gè)腫瘤轉(zhuǎn)移標(biāo)志物的研究提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞與細(xì)胞培養(yǎng)人纖維肉瘤HT1080細(xì)胞用含10%胎牛血清和雙抗（青霉素及鏈霉素各100 kU/L）RPMI 1640液培養(yǎng)于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中。人乳腺癌MCF-7和人非小細(xì)胞肺癌H1299細(xì)胞用含10%胎牛血清和雙抗（青霉素及鏈霉素各100 kU/L）DMEM液培養(yǎng)于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中。人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞用含10%胎牛血清和雙抗（青霉素及鏈霉素各100 kU/L）L15液培養(yǎng)于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器5415型臺(tái)式離心機(jī)為德國(guó)Eppendorf公司產(chǎn)品；芯片雜交盒、芯片清洗盒、芯片雜交儀和LuxScan 10K/A雙通道激光掃描儀購(gòu)自北京博奧生物有限公司；Transwell小室為美國(guó)Corning公司產(chǎn)品。

1.1.3 主要試劑DMEM、RPMI 1640、L15培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司；新生胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；多肽藥物GAP161由武漢凱泰新生物技術(shù)有限公司合成提供，用生理鹽水配制成10 mmol/L貯存液，-80℃保存；質(zhì)粒pcDNA3.1由本室保存；脂質(zhì)體Lipofectamine2000和Lipofectamine RNAiMAX均購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；人類全基因組寡聚核苷酸芯片購(gòu)自臺(tái)灣Phalanxiotech公司；芯片雜交試劑盒購(gòu)自美國(guó)Genisphere公司。

1.2 方法

1.2.1 siRNA設(shè)計(jì)和合成由廣州銳博公司設(shè)計(jì)合成G3BP1和G3BP2的siRNA。靶向G3BP1的siRNA序列為5'GCAACAGUAUUUCGGUA UAdT dT-3'，靶向G3BP2的siRNA序列為5'GU AAGAAAGUAGCCAUAAAdT dT-3'。對(duì)照mock siRNA序列是5'UUCUCCGAACGUGUCACGU dT dT-3'。將合成的siRNA粉末用緩沖溶液溶解，配成20 μmol/L的儲(chǔ)備溶液。

1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用2 ml含10%胎牛血清的無(wú)抗生素組織培養(yǎng)液以30萬(wàn)個(gè)/孔接種到六孔板中。將100 nmol/L siRNA或者2 μg pcDNA-G3BP1用無(wú)抗生素?zé)o血清的Opti-MEM培養(yǎng)液250 μl稀釋，取6 μl脂質(zhì)體與250 μl無(wú)抗生素?zé)o血清的Opti-MEM培養(yǎng)液混勻，5 min之內(nèi)將siRNA或pcDNA溶液與脂質(zhì)體稀釋液輕輕混勻。siRNA或pcDNA與脂質(zhì)體復(fù)合物于室溫靜置20 min后，把500 μl siRNA（pcDNA）-脂質(zhì)體復(fù)合物加到細(xì)胞培養(yǎng)板中。細(xì)胞在給藥前用無(wú)抗生素?zé)o血清的Opti-MEM培養(yǎng)液洗1遍后，再加入新的500 μl無(wú)抗生素?zé)o血清Opti-MEM培養(yǎng)液。這樣，轉(zhuǎn)染后每孔溶液終體積為1000 μl。轉(zhuǎn)染5 h后，每孔中補(bǔ)加1000 μl含20%胎牛血清的無(wú)抗生素培養(yǎng)液。

1.2.3 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞消化、計(jì)數(shù)，每孔以3×105個(gè)/ml的細(xì)胞數(shù)接種于6孔板中，分別進(jìn)行以下兩種方式處理：①當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)24 h后，覆蓋度接近100%時(shí)，用10 μl Tip頭在單層細(xì)胞上劃痕，PBS沖洗后，在含有特定濃度多肽藥物的無(wú)血清培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)；②當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)24 h后，進(jìn)行siRNA轉(zhuǎn)染，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，當(dāng)覆蓋度接近100%時(shí)，用10 μl Tip頭在單層細(xì)胞上劃痕，PBS沖洗，在無(wú)血清培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。每隔一段時(shí)間，于倒置顯微鏡下觀察傷痕合攏的情況，并照相。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。如下公式計(jì)算細(xì)胞遷移率：

遷移率（%）=（原劃痕寬度-現(xiàn)劃痕寬度）/原劃痕寬度×100%

1.2.4 Transwell遷移實(shí)驗(yàn)在Transwell（8.0 μm）的上室中加入無(wú)血清培養(yǎng)基，于37℃培養(yǎng)箱中平衡過(guò)夜。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，消化計(jì)數(shù)。用含無(wú)血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次。用含無(wú)血清及不同濃度多肽藥物（或不同細(xì)胞）的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，使細(xì)胞密度為2×105個(gè)/ml，在Transwell的上室中加入100 μl細(xì)胞重懸液，2×104個(gè)/孔，下室加入600 μl的培養(yǎng)液（含20%血清），置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48 h。取出Transwell小室，棄培養(yǎng)液，用PBS輕柔洗滌3遍，甲醇固定10 min，PBS洗3遍。下室側(cè)表面的細(xì)胞為遷移穿透膜的細(xì)胞，蘇木素染色。顯微鏡下觀察，每張膜計(jì)數(shù)3～5個(gè)100倍視野，計(jì)算遷移細(xì)胞數(shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.2.5 基因芯片雜交分析收集siRNA干擾48 h的MDA-MB-231細(xì)胞，以及轉(zhuǎn)染pcDNA-G3BP1 48 h的MCF-7細(xì)胞，用Trizol提取總RNA，純化后，將RNA逆轉(zhuǎn)錄并標(biāo)記熒光基團(tuán)，與人全基因組芯片進(jìn)行雜交，基因芯片掃描儀進(jìn)行掃描并分析得到全基因的表達(dá)數(shù)據(jù)。取表達(dá)差異大于1.5倍的基因進(jìn)行代謝通路和信號(hào)傳導(dǎo)通路分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

每次實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次，結(jié)果用平均值表示，兩組均數(shù)比較采用兩樣本Student's t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 下敲G3BP抑制腫瘤細(xì)胞遷移能力

之前我們的研究結(jié)果顯示，下敲G3BP后能夠抑制非小細(xì)胞肺癌H1299細(xì)胞的侵襲遷移能力［9］。此次，我們采用siRNA特異性下敲G3BP1和G3BP2 24 h后，通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)觀察其對(duì)HT1080、MCF-7和H1299細(xì)胞等腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響（圖1）。結(jié)果顯示，用G3BP1-siRNA和G3BP2-siRNA處理后，HT1080細(xì)胞的遷移率降為32.39%和49.17%；MCF7細(xì)胞的遷移率降為12.08%和11.94%；H1299細(xì)胞的遷移率降為16.11%和34.29%。結(jié)果表明，下敲G3BP能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞的劃痕愈合能力，從而抑制腫瘤細(xì)胞的遷移能力。

圖1 下敲G3BP對(duì)腫瘤細(xì)胞HT1080（A）、MCF-7（B）和H1299（C）遷移能力的抑制作用（與對(duì)照組相比，*P＜0.05）Figure 1Knockdown of G3BP inhibited the migration of tumor cell HT1080（A），MCF-7（B）and H1299（C）（*P＜0.05 vs control）

2.2 靶向G3BP的多肽藥物GAP161抑制腫瘤細(xì)胞遷移

前期研究結(jié)果表明，多肽藥物GAP161靶向G3BP，處理細(xì)胞后能夠降低G3BP蛋白［8］。為了驗(yàn)證siRNA的結(jié)果，我們用GAP161處理腫瘤細(xì)胞，觀察其對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響。采用10、30 μmol/L GAP161處理細(xì)胞，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明GAP161能夠顯著抑制HT1080（31.82%和13%）（圖2）、MCF-7（33.75%和16.92%）（圖3）及H1299（15.83%和8.19%）（圖4）的遷移能力。進(jìn)一步，采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)GAP161對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響。結(jié)果顯示，GAP161處理后，能夠顯著抑制HT1080、MCF-7和H1299的遷移能力（圖2～4）。

2.3 瞬時(shí)高表達(dá)G3BP1后細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)譜變化

為了進(jìn)一步探討G3BP1發(fā)揮其生物學(xué)功能的分子機(jī)制，我們采用基因芯片的方法分析G3BP1表達(dá)的變化對(duì)細(xì)胞基因水平的影響。選擇侵襲轉(zhuǎn)移能力較低的MCF-7細(xì)胞檢測(cè)G3BP1對(duì)細(xì)胞內(nèi)遷移相關(guān)基因的影響。結(jié)果顯示，G3BP1高表達(dá)后能夠誘導(dǎo)與細(xì)胞增殖、運(yùn)動(dòng)以及代謝有關(guān)的許多其他基因表達(dá)的變化。與對(duì)照組相比，G3BP1高表達(dá)后共1565個(gè)基因表達(dá)發(fā)生了改變（＞1.5倍），其中有673個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，892個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。以Kyoto百科全書(shū)基因以及基因組（Kyoto encyclopedia of genes and geneomes，KEGG）對(duì)表達(dá)差異大于1.5倍的基因所參與的信號(hào)通路進(jìn)行分析［10］。結(jié)果顯示，在這些上調(diào)的基因中，G3BP1高表達(dá)誘導(dǎo)了包括MAPK、黏附連接以及細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)等細(xì)胞遷移相關(guān)基因的表達(dá)（表1）。

2.4 瞬時(shí)下敲G3BP1后細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)譜變化

圖2 GAP161對(duì)HT1080細(xì)胞遷移能力的抑制作用（與對(duì)照組相比，*P＜0.05）（A：劃痕實(shí)驗(yàn)；B：Transwell實(shí)驗(yàn)）Figure 2GAP161 inhibited HT1080 cell migration（*P＜0.05 vs control）（A：Wound healing assay；B：Transwell assay）

圖3 GAP161對(duì)MCF-7細(xì)胞遷移能力的抑制作用（與對(duì)照組相比，*P＜0.05）（A：劃痕實(shí)驗(yàn)；B：Transwell實(shí)驗(yàn)）Figure 3GAP161 inhibited MCF-7 cell migration（*P＜0.05 vs control）（A：Wound healing assay；B：Transwell assay）

圖4 GAP161對(duì)H1299細(xì)胞遷移能力的抑制作用（與對(duì)照組相比，*P＜0.05）（A：劃痕實(shí)驗(yàn)；B：Transwell實(shí)驗(yàn)）Figure 4GAP161 inhibited H1299 cell migration（*P＜0.05 vs control）（A：Wound healing assay；B：Transwell assay）

表1 MCF-7細(xì)胞中高表達(dá)G3BP1后上調(diào)的細(xì)胞遷移相關(guān)基因和信號(hào)通路Table 1Overexpression of G3BP1 upregulates migration associated genes and signaling pathways in MCF-7 cells

選擇侵襲轉(zhuǎn)移能力較高的MDA-MB-231細(xì)胞檢測(cè)G3BP1-siRNA對(duì)細(xì)胞基因表達(dá)的影響。通過(guò)G3BP1-siRNA處理組細(xì)胞與mock-siRNA處理組細(xì)胞之間基因表達(dá)差異的比較，顯示G3BP1-siRNA能夠降低細(xì)胞增殖、運(yùn)動(dòng)以及代謝有關(guān)的許多基因的表達(dá)。與mock-siRNA處理組相比，G3BP1-siRNA處理組細(xì)胞共940個(gè)基因表達(dá)發(fā)生了改變（＞1.5倍），其中有195個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，745個(gè)基因表達(dá)發(fā)生下調(diào)。KEGG信號(hào)通路分析表明，與高表達(dá)G3BP1對(duì)MCF-7細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的影響相反，G3BP1-siRNA抑制了包括MAPK、黏附連接以及細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)等細(xì)胞遷移相關(guān)基因的表達(dá)（表2）。

3 討論

癌癥細(xì)胞在侵襲以及惡化過(guò)程中，能夠通過(guò)自身的運(yùn)動(dòng)在組織中遷移。日前有研究人員發(fā)現(xiàn)，早期階段未侵入周邊組織的乳腺癌細(xì)胞已經(jīng)含有高運(yùn)動(dòng)性的細(xì)胞，為腫瘤進(jìn)行轉(zhuǎn)移擴(kuò)散做好準(zhǔn)備［11］。腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)包括許多過(guò)程，為許多信號(hào)分子所調(diào)控，如FAK調(diào)節(jié)的細(xì)胞與基質(zhì)之間的黏附，MLCK以及Rho相關(guān)卷曲螺旋形成蛋白激酶（Rho/ROCK）等調(diào)控的肌球蛋白收縮等［12-13］。

我們前期研究證實(shí)，下調(diào)G3BP能夠抑制肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲能力［9］。為了探討G3BPs在其他多種腫瘤細(xì)胞遷移侵襲中的作用，采用siRNA特異性瞬時(shí)沉默腫瘤細(xì)胞中的G3BPs來(lái)觀察腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，下調(diào)G3BP后，多種腫瘤細(xì)胞包括HT1080、MCF-7和H1299的運(yùn)動(dòng)遷移能力都受到了抑制。GAP161是靶向G3BP的特異性多肽藥物，它能夠降低G3BP的表達(dá)。用GAP161處理腫瘤細(xì)胞后，HT1080、MCF-7和H1299細(xì)胞遷移能力顯著降低。

表2 MDA-MB-231中下敲G3BP1后抑制的細(xì)胞遷移相關(guān)基因和信號(hào)通路Table 2Knockdown of G3BP1 inhibits migration associated genes and signaling pathways in MDA-MB-231 cells

已有研究發(fā)現(xiàn)，G3BP參與了腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)［6-7］及細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)變化，而細(xì)胞骨架重構(gòu)在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中有重要作用［14-15］。但缺乏G3BP如何參與腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲的分子機(jī)制研究，也未見(jiàn)對(duì)全基因組水平的影響展開(kāi)研究。我們?cè)谇忠u能力較低的乳腺癌MCF-7細(xì)胞中高表達(dá)G3BP1，并且在惡性程度較高、侵襲能力較強(qiáng)的MDA-MB-231細(xì)胞中下敲G3BP1，收集mRNA后分別進(jìn)行基因芯片分析。結(jié)果表明，上調(diào)G3BP1后能夠引起腫瘤細(xì)胞MAPK、Wnt、TGF-β、細(xì)胞周期、細(xì)胞黏附連接以及細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)等相關(guān)信號(hào)通路發(fā)生變化。其中，與轉(zhuǎn)移能力相關(guān)的細(xì)胞黏附、整合素和MAPK等信號(hào)通路和基因都發(fā)生上調(diào)。而對(duì)G3BP1下敲的MDA-MB-231細(xì)胞進(jìn)行了全基因組分析后，結(jié)果顯示，下敲G3BP1后顯著下調(diào)了轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號(hào)通路和基因，其影響的信號(hào)通路和基因與上調(diào)G3BP1后影響的信號(hào)通路相似。

綜上所述，沉默G3BP可降低腫瘤細(xì)胞遷移能力。因此，G3BP可以作為一個(gè)潛在的抗腫瘤轉(zhuǎn)移治療靶點(diǎn)和分子標(biāo)志物。通過(guò)全基因組芯片分析，表明下敲G3BP可以影響腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲相關(guān)信號(hào)通路和基因表達(dá)，并且為深入研究G3BP參與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制提供基礎(chǔ)。

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MethodsEffect of G3BP knockdown on tumor cell migration was examined by wound healing assay in HT1080，MCF-7 and H1299 cells.Effect of GAP161 on the migration of tumor cells was measured by wound healing assay and Transwell assay.Human whole genome oligonucleotide microarray was used to analyze the gene expression profiles in MCF-7 cells with G3BP1 over-expression and MDA-MB-231 cells with G3BP1 knockdown.Pathway analysis was then performed according to the microarray data.

ResultsDown-regulation of G3BP1 and G3BP2 by specific siRNAs significantly inhibited cell migration in HT1080，MCF-7 and H1299 cells.GAP161 also significantly reduced the tumor cell migration ability.Whole genome microarray analysis showed that over-expression of G3BP1 and knockdown G3BP1 in MCF-7 and MDA-MB-231 cells，respectively，affected cell adhesion，integrin and MAPK signaling pathways in an opposite manner.

ConclusionKnockdown of G3BP by siRNA significantly inhibited tumor cell migration.G3BP-targeted peptide G3BP1 markedly reduced the cell migration abilities.Over expression of G3BP1 could up-regulate genes expression associated with cell adhesion，integrin and MAPK signaling pathways，while down-regulation of G3BP1 exerts opposite effects.

Down-regulation of G3BPinhibits tumor cell migaration

ZHANG Hao，ZHANG Cai-xia，YU Dong-ke，SHAO Rong-guang，HE Hong-wei

ObjectiveTo investigate the effect of G3BP down-regulation by siRNA or G3BP-targeted peptide GAP161 on tumor cell migration.

Cell line，tumor；Cell migration inhibition；Gene expression profiling；MAP kinase signaling system；G3BP

HE Hong-wei，Email：hehwei@163.com

10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2015.01.004

國(guó)家自然科學(xué)基金（81302802）；國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃）（2009CB521807）；“重大新藥創(chuàng)制”國(guó)家科技重大專項(xiàng)（2012ZX09301-002）

100050北京，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所腫瘤室

何紅偉，Email：hehwei@163.com

2014-06-03

www.cmbp.net.cn中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)，2015，10（1）：11-17

Author Affiliation:Department of Oncology，Institute of Medicinal Biotechnology，Chinese Academy of Medical Sciences，Peking Union Medical College，Beijing 100050，China

www.cmbp.net.cn Chin Med Biotechnol，2015，10（1）：11-17