附紅細胞體和豬繁殖與呼吸綜合征病毒混合感染的診治

代振江，劉 釗，曾智勇，湯德元，梁海英，王偉丞

（貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

附紅細胞體病是由附紅細胞體寄生于人和動物紅細胞表面、血漿及骨髓中所引起的一種人畜共患病。最初該病被命名為附紅細胞體，并將其歸為立克次氏體目，在其16S rRNA 基因序列鑒定后又將其重新分類為支原體類微生物，但該分類還存在異議。本病臨床上以發(fā)熱、貧血或黃疸等癥狀為主要特征，并有隱性感染、慢性遷延、條件致病、急性發(fā)病時致死率高等特點。近年來，隨著人附紅細胞體病臨床病例的增多和家畜尤其是豬附紅細胞體病的暴發(fā)流行，該病才逐漸被關(guān)注。本病不僅導(dǎo)致動物毛產(chǎn)量及乳、肉產(chǎn)量減少，生育力下降，還引起較嚴重的臨床表現(xiàn)及死亡，值得注意的是該病在我國豬、犬等家畜中還有暴發(fā)流行的趨勢[1-2]。豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是20 世紀(jì)80 年代末出現(xiàn)的一種新病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種豬的高度接觸性傳染病，該病以母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔豬呼吸困難、敗血癥、高熱、高死亡率為主要特征。不同年齡、品種和性別的豬均能感染PRRSV，但以妊娠母豬和1 月齡以內(nèi)的仔豬更易感染，40 日齡以內(nèi)的仔豬病死率高達100%，育肥豬病死率約為 50%；在一些地區(qū)的豬場，發(fā)病率接近100%，病死率在30%～50%，部分豬場的病死率可達80%以上[3]。

1 發(fā)病情況

貴州某豬場有存欄商品豬1 萬頭左右，2014 年12 月中旬該豬場從市場收購了500 多頭仔豬，購進后未進行疫苗免疫。從2014 年12 月下旬開始，這批仔豬陸續(xù)發(fā)病，截至2015 年1 月5 日購進豬中有200 多頭發(fā)病，死亡80 多頭。據(jù)述，發(fā)病仔豬臨床癥狀主要表現(xiàn)為黃疸、貧血、消瘦、食欲不振、精神委頓、腹瀉以及高燒不退。曾用抗生素藥物進行治療但沒能有效控制病情。

圖1 呈多形性的紅細胞體

2 臨床癥狀

患病仔豬出現(xiàn)精神不振、消瘦、發(fā)熱，體溫升高達到40.5～ 41.8 ℃，食欲減退、腹瀉、黃疸、貧血、全身被毛粗亂、采食量明顯下降，后期廢絕；觸摸病豬腹股溝和頜下淋巴結(jié)顯著腫大。

3 病理變化

對2 只病死豬進行剖檢，發(fā)現(xiàn)多器官呈廣泛性病理損傷，主要病變有：全身淋巴結(jié)腫大，淋巴切面呈大理石狀；腸系膜淋巴結(jié)腫大呈索狀，肺門、腹股溝淋巴結(jié)腫大；肺臟廣泛性肉變，間質(zhì)明顯，可見大量出血斑；腎臟表面凹凸不平，紅白相間呈“花斑腎”；脾臟邊緣可見少量輕度梗死病灶；其余臟器無明顯肉眼可見病理變化。

圖2 核酸檢測結(jié)果

4 實驗室診斷

4.1 血涂片鏡檢

用生理鹽水稀釋經(jīng)病豬前腔靜脈采出的血樣，制成均勻的血涂片。鏡檢可見紅細胞邊緣呈星芒或鋸齒狀，呈多形性（如圖1）。

4.2 病毒核酸檢測

分別取適量剖檢病豬的肝、腎、肺臟、淋巴結(jié)和脾臟進行碾磨勻漿，反 復(fù) 凍 融3 次 后，12 000 r/min 離心10 min，取上清，用Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.4.0 試劑盒進行核酸的提取。根據(jù)臨床癥狀及病理特征，疑為HCV、PRRSV 及PCV2的多重感染，但根據(jù)送檢要求，僅分別對HCV 和PRRSV 進行核酸檢測。實驗選用HCV 和PRRSV 的特異性引物，以提取的核酸為模板，參照一步法RT-PCR 試劑盒說明書，對HCV、PRRSV 進行核酸檢測，其反應(yīng)總體系為50μL：2×1 Step Buffer 25μL，模板7.0μL，上下游引物各1.0μL，PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2μL，RNase Free H2O 14μL；反應(yīng)程序為：95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35 個 循 環(huán)；72 ℃ 10 min。擴增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，核酸檢測結(jié)果如圖2。

5 結(jié)果與分析

根據(jù)發(fā)病仔豬的臨床癥狀、病理變化和實驗室診斷結(jié)果，豬場存在附紅細胞體和藍耳病病毒的混合感染。此外，根據(jù)腎臟的病理變化PCV2 共感染的可能性亦較大。附紅細胞體可使不同品種、年齡的畜禽和人感染，而且感染率相當(dāng)高。在我國部分地區(qū)，豬的感染率為49%左右，有的地區(qū)可達到80%左右。但附紅細胞體進入機體后多呈潛伏狀態(tài)，發(fā)病率較低，只有當(dāng)機體處于應(yīng)激狀態(tài)(如分娩、疲勞和長途運輸?shù)?時才可能引起發(fā)病，所以多數(shù)學(xué)者認為附紅細胞體的毒性低、致病性弱，很可能是一種條件性致病微生物。PRRSV 在我國的豬場廣泛存在，大多呈持續(xù)隱性感染。受感染的豬群，即使表面穩(wěn)定，也存在三類豬，即S—易感，M—感染，R—有抵抗力豬。S—M—R 三類豬在群體的比例隨條件變化而變化，在有應(yīng)激因素如霉菌毒素、環(huán)境改變、營養(yǎng)不良等的刺激下，可能誘發(fā)該病的暴發(fā)[4]。PRRSV 是一種免疫抑制性疾病，極易與其他疾病如豬瘟、豬圓環(huán)病毒、豬細小病毒病等發(fā)生混合感染[5]。豬場從市場購進仔豬后未及時對其進行相關(guān)疫苗的免疫，豬群處于無保護狀態(tài)，又加之經(jīng)長途運輸后處于新的環(huán)境等刺激因素的影響，此時豬群免疫力下降，這些綜合因素可能導(dǎo)致了豬群的感染發(fā)病。

針對以上情況建議豬場在購進豬只后，應(yīng)先對豬群進行隔離觀察，確定豬只無感染發(fā)病之后再混群飼養(yǎng)。同時，豬場必須做好疫苗免疫接種工作，并且要定期進行抗體監(jiān)測，適時補免，加強飼養(yǎng)管理，提高豬體的營養(yǎng)水平，注意環(huán)境衛(wèi)生和消毒，減少豬群的應(yīng)激，從而有效控制疾病的發(fā)生和蔓延，降低豬群死亡率，減少經(jīng)濟損失。

[1] 王永，馮昕煒，嚴光文，等. 附紅細胞體病原學(xué)研究進展[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2008(6): 491-494.

[2] 嚴麗華，袁聰俐，朱凝瑜，等.嗜血支原體(附紅細胞體)病原學(xué)研究進展[J].上海交通大學(xué)學(xué)報：農(nóng)業(yè)科學(xué)版，2009(2):177-180.

[3] 李建玲，楊小亮. 高致病性豬藍耳病的研究進展[J]. 中國獸醫(yī)雜志，2014(6):61-63.

[4] 文麗，趙兵軍.豬藍耳病的研究進展與防控策略[J].浙江畜牧獸醫(yī)，2013（3）:15-16.

[5] 覃紹敏，梁安莉，王仰杰，等. 豬流感病毒與繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、圓環(huán)病毒、偽狂犬病病毒、副豬嗜血桿菌混合感染的情況調(diào)查[J]. 中國畜牧獸醫(yī)，2008（3）:77-80.