三都麻竹葉總黃酮的提取及其含量測定

劉康蓮，馮定坤，賀銀菊，羅駿

（黔南民族師范學院化學與化工系，貴州都勻558000）

三都麻竹葉總黃酮的提取及其含量測定

劉康蓮，馮定坤，賀銀菊，羅駿

（黔南民族師范學院化學與化工系，貴州都勻558000）

研究麻竹葉中竹葉總黃酮的提取工藝及其影響因素，用超聲波法和回流提取法分別對黃酮類物質(zhì)的提取進行研究對比。以蘆丁為對照，竹葉總黃酮得率為考察指標，通過正交試驗優(yōu)先選回流提取竹葉總黃酮的最佳工藝。竹葉黃酮的最佳提取條件：提取時間3 h，乙醇體積分數(shù)95%，料液比為1∶25（g∶mL），提取率為1.59%。

麻竹；總黃酮；提取方法；含量測定

竹子為多年生常綠植物，是當今世界最具有使用價值的植物之一，主要分布于南方大部分地區(qū)，竹葉為多年生常綠植物竹子的葉，其性淡、微澀、寒，味甘、苦。據(jù)報道，竹葉中含有大量對人體有益的活性物質(zhì)，如黃酮類、酚酸類、蒽醌類、香豆素類、特種氨基酸等，其中酚酸類、蒽醌類、香豆素類具有較強的抑菌殺菌作用。竹葉中提取物的功能因子主要是黃酮類，而且竹葉黃酮安全無毒。因此，目前對竹葉黃酮類物質(zhì)的提取純化的研究已成為了一大熱點。

本文通過正交試驗考察了多種因素對于竹葉黃酮提取效果的影響，探索出較好的提取工藝，實驗采用超聲波輔助溶劑提取和回流提取兩種方法對提取竹葉總黃酮進行分離與純化并作比較，以期獲得有依據(jù)的實驗數(shù)據(jù)，為工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1．1 材料、試劑與儀器

麻竹葉，產(chǎn)地三都，將其晾干用粉碎機粉碎成粉末備用；蘆丁標準品：Sigma公司。5%NaNO2、10% Al（NO3）3、NaOH試液、乙醇、正丙醇、石油醚、（NH4）2SO4，除特殊注明外，均為分析純。

超聲波清洗機-AS20500A：杭州匯爾儀器設備有限公司；TU-1901雙光束紫外可見光分光光度計：北京普通儀器責任有限公司；80-1離心沉淀機：北京天創(chuàng)尚邦儀器設備有限公司；RE-2000Z型旋轉蒸發(fā)儀：鄭州英予華儀器有限公司。

1.2 方法

1．2.1 標準曲線的繪制

精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的蘆丁對照品20.01 mg置100 mL量瓶中，用60%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（0.200 1 mg/mL）。精密量取上述對照品溶液配置成0.25、0.50、0.75、1.00、1.25 mL，分別置于25 mL量瓶中，加入5%NaNO2溶液1 mL，靜置6 min，加入10%Al（NO3）3溶液1 mL，靜置6 min，再加入4%NaOH溶液10 mL，用水定容至刻度，搖勻，即得2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 μg/mL的標準溶液，靜置15 min后，以空白試劑為參比，分別于510 nm處測定吸光度，測定結果見表1。

表1 不同標準溶液的吸光度值Table 1 The absorbance values of different standard solution

以濃度（C）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，繪制標準曲線，見圖1，求得方程為：A=0.018 3C+0.008 7（R=0.999）。結果表明，該方法在2.00μg/mL～10.00μg/mL范圍內(nèi)線性關系良好。

圖1 蘆丁對照品的標準曲線Fig．1 The standard curve of control substance of rutin

1.2.2 麻竹葉總黃酮的提取

方法一：超聲波輔助溶劑提取

準確稱取麻竹葉粉末1.0 g于250 mL具塞錐形瓶中，加人20 mL石油醚超聲30 min除去脂溶性成分、色素等。用布氏漏斗抽濾。過濾后得到的殘渣室溫下?lián)]干石油醚后，按正交試驗設計的方案，按一定量的料液比加入不同濃度的乙醇，在80℃水溶液中超聲提取一定時間后，過濾，然后將濾液置于容量瓶中用95%乙醇定容至100 mL，即得待測液，用于測定總黃酮的含量。

方法二：回流提取

準確稱取麻竹葉粉末1.0 g于250 mL具塞錐形瓶中，加人20 mL石油醚浸泡除去脂溶性成分、色素等。用布氏漏斗抽濾。過濾后得到的殘渣室溫下?lián)]干石油醚后，按正交試驗設計的方案，按一定量的料液比加入不同濃度的乙醇，回流提取一定時間后，過濾，然后將濾液置于容量瓶中用95%乙醇定容至100 mL，即得待測液，用于測定總黃酮的含量。

1.2.3 最佳工藝條件的確定

方法一最佳條件的選擇：

選擇乙醇作為提取溶劑。因此實驗主要研究乙醇體積分數(shù)、超聲時間、乙醇用量對總黃酮得率的影響。根據(jù)影響總黃酮得率的因素確定出它們的最佳范圍，再通過正交試驗確定最佳的提取條件。

方法二最佳條件的選擇：

選擇乙醇作為提取溶劑。因此實驗主要研究乙醇體積分數(shù)、回流提取時間、乙醇用量對總黃酮得率的影響。根據(jù)影響總黃酮得率的因素確定出它們的最佳范圍，再通過正交試驗確定最佳的提取條件。

1.2.4 麻竹葉總黃酮得率的測定

以蘆丁為對照品，采用硝酸鋁比色法測定麻竹葉提取液中總黃酮得率。取1.0 mL待測液于25 mL比色管中，按1.2.1操作測定其在510 nm處的吸光度，根據(jù)標準曲線得出總黃酮濃度，然后計算麻竹葉總黃酮得率。

2 結果與分析

2.1 正交試驗

方法一：超聲波輔助溶劑提取正交試驗

準確稱取1.0 g麻竹葉粉末，以超聲時間A、乙醇體積分數(shù)B、料液比C作為考察的3個因素，各取3個水平，選用L9（34）正交表進行試驗，以總黃酮得率為指標，研究3個因素對麻竹葉總黃酮得率的影響。正交試驗因素水平和實驗結果分別見表2、表3。

表2 正交試驗因素水平表Table 2 Factors and levels of orthogonal test

通過對正交試驗結果進行均值比較和極差分析，得最佳提取條件為A3B3C2，即就是最佳提取的超聲波時間40 min、乙醇體積分數(shù)95%、料液比為1∶25；對黃酮提取影響的最主要因素為超聲波時間，其次是料液比。通過與正交設計表中比較，在正交試驗中第9次試驗的黃酮得率最高5.92 μg/mL，其提取條件為超聲波時間40 min、乙醇體積分數(shù)95%、料液比為1∶25，與均值比較結果穩(wěn)合。

表3 L9（34）正交試驗結果與分析Table 3 The results and analysis of L9（34）orthogonal test

方法二：回流提取正交試驗

準確稱取1.0 g麻竹葉粉末，以超聲時間A、乙醇體積分數(shù)B、料液比C作為考察的3個因素，各取3個水平，選用L9（34）正交表進行試驗，以總黃酮得率為指標，研究3個因素對麻竹葉總黃酮得率的影響。正交試驗因素水平和實驗結果分別見表4、表5。

表4 正交試驗因素水平表Table 4 Factors and levels of orthogonai test

表5 L9（34）正交試驗結果與分析Table 5 The results and analysis of L9（34）orthogonal test

通過對正交試驗結果進行均值比較和極差分析，得最佳提取條件為A3B3C2，即就是最佳提取的回流時間3.0 h、乙醇體積分數(shù)95%、料液比為1∶25；對黃酮提取影響的最主要因素為回流時間，其次是料液比。通過與正交設計表中比較，在正交試驗中第9次試驗的黃酮得率最高6.26 μg/mL，其提取條件為回流時間3.0 h、乙醇體積分數(shù)95%、料液比為1∶25，與均值比較結果穩(wěn)合。

2.2 提取方法比較

通過對超聲輔助溶劑法與回流提取法對麻竹葉總黃酮的提取實驗，在相同的溶劑和料液比的條件下，超聲輔助溶劑法總黃酮的提取率最高的1.48%，而回流提取法為1.59%。因此，回流提取法優(yōu)于超聲輔助溶劑法，所以在提取麻竹葉總黃酮時，選擇回流提取法。

3 結論

竹葉黃酮的最佳提取條件：提取時間3h，乙醇體積分數(shù)95%，料液比為1∶25（g∶mL）。以蘆丁標準品做對照，通過紫外法分別測定不同溶劑提取所得提取物中總黃酮的含量，經(jīng)過試驗對比后得出結論。通過本實驗，發(fā)現(xiàn)測量黃酮的含量時，葉綠素是影響測量準確性的重要因素，通過用石油醚萃取的方法，可以消除葉綠素的影響。同時，也會影響黃酮得率。

［1］游新俠，仇農(nóng)學．超聲波輔助提取荊芥葉中總黃酮的方法研究［J］．鄭州牧業(yè)工程高等專科學校學報，2006，26（1）：13-15

［2］王立升，劉力恒，黃仁彬，等．超聲波提取小葉榕葉總黃酮工藝研究［J］．食品研究與開發(fā)，2007，28（12）：91-95

［3］韋松基，蒙萬香，戴忠華．壯藥飯湯子中總黃酮的含量測定［J］．時珍國醫(yī)國藥，2010，21（6）：1356

［4］盛棉棉，朱云龍．分光光度法測定杭白菊中總黃酮的含量［J］．海峽藥學，2009，21（12）：99

［5］王秋亞，曹會蘭，閆慧敏．紫外分光光度法測定艾葉中總黃酮含量［J］．光譜實驗室，2010，27（2）：592

［6］周正華，杜安全，王先容．百蕊草黃酮的含量測定［J］．安徽醫(yī)藥，2002，6（1）：63-64

［7］王崢，李紹順．百蕊草藥材及制劑中總黃酮的含量測定研究［J］．中成藥，2007，29（1）：1-2

［8］黃守正，胡容峰．花生殼中總黃酮和木犀草素提取工藝研究［J］．安徽化工，2008，34（2）：28-30

［9］雷紅偉，陸付耳，徐麗君，等．紫外分光光度法測定馬齒莧總黃酮的含量［J］．中西醫(yī)結合研究，2010，2（3）：126-128

Determination of the Total Flavonoids and Optimization of Dendrocalamus Latiflorus Munro the Leaves of Preparation Process in Sandu

LIU Kang-lian，F(xiàn)ENG Ding-kun，HE Yin-ju，LUO Jun
（Department of chemistry and chemicd Engineering，Qiannan Normal college for Nationalities，Duyun 558000，Guizhou，China）

The bamboo leaf flavone in Dendrocalamus latiflorus Munro the extraction technology and its influencing factors，using ultrasonic method and reflux extraction respectively on the extraction of flavonoids of study contrast.Rutin as control，bamboo leaf flavone yield as the inspection index，through the orthogonal test is preferred to choose reflux extraction bamboo leaf flavone the best process.Bamboo leaf flavone the best extraction conditions：extracting time 3 h，ethanol volume fraction of 95%，feed liquid ratio is o 1∶25（g∶mL），extraction yield was 1.59%.

Dendrocalamus latiflorus Munro；flavone；extraction process；determination of content

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.04.016

2014-03-19

2013年貴州省科技聯(lián)合基金項目（黔科劍字LKQS［2013］02號）

劉康蓮（1967—），女（布依），副教授，學士，研究方向：主要從事天然產(chǎn)物提取研究。