HPLC法測定胃瘍寧丸中烏藥醚內(nèi)酯的含量

李詩慧 何廣俊 盧 映 廖豐蘊 王利勝* 陳輝清

（1 廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；2 廣東省中醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 廣州 510120）

胃瘍寧丸由烏藥、白術(shù)、白及、山藥等藥材組成，具有溫中散寒，理氣止痛，制酸止血功效，用于胃脘脹痛或刺痛，嘔吐泛酸。其原標準[1]中僅具有顯微鑒別和沉淀反應(yīng)鑒別，內(nèi)容簡單，很難有效的控制其內(nèi)在質(zhì)量，烏藥為處方中的君藥，且烏藥醚內(nèi)酯為烏藥中的有效成分，故本文采用高效液相法對該藥中烏藥醚內(nèi)酯進行含量測定。結(jié)果表明本方法精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性均較好，結(jié)果可靠，可用于胃瘍寧丸質(zhì)量標準的定量分析。

1 儀器和試藥

1.1 儀器：KQ5200DE型數(shù)控超聲清洗器，江蘇省昆山市超聲儀器有限公司；Waters高效液相色譜儀（515泵，2487紫外檢測器），美國waters公司；N3000色譜工作站，浙江大學(xué)；AUW120電子分析天平（SHIMADZU公司）。

1.2 試藥：烏藥醚內(nèi)酯對照品（1568-200601，中國藥品生物制品檢定所）；乙腈(色譜純，DIKMA TECHNOLOGIES INC)；甲醇(色譜純，DIKMA TECHNOLOGIES INC)；胃瘍寧樣品（批號：EK1151、FL1061、FL1081，由陳李濟公司提供）；甲醇和乙醚為色譜純；水為高純水；陰性樣品自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件。色譜柱：Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）柱；流動相：乙腈-水(56∶44)；檢測波長為235 nm；流速：1 mL/min；柱溫：25 ℃；進樣量：20 μL，理論板數(shù)按烏藥醚內(nèi)酯峰計算不低于2000。

2.2 供試品溶液制備：精密稱取本品2 g，加入硅藻土4 g，研勻，置具塞錐形瓶中，加入乙醚80 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用乙醚補足減失的重量，揮干乙醚，加甲醇定容至5 mL，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備：精密稱取烏藥醚內(nèi)酯對照品適量，加甲醇制成每1 mL含烏藥醚內(nèi)酯0.08 mg的溶液，即得。

2.4 烏藥陰性對照溶液的制備：按處方中藥味的比例，按其工藝制成烏藥陰性對照樣品，再按供試品溶液的制備方法制備烏藥陰性對照溶液。

2.5 線性關(guān)系的考察：精密稱取烏藥醚內(nèi)酯對照品1.8 mg，分別置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為180 μg/mL的儲備液；取上述烏藥醚內(nèi)酯儲備液加甲醇分別制成濃度為0.45、9、18、36、90 μg/mL的系列標準溶液，各進樣20 μL，以峰面積Y為縱坐標，以進樣量(μg)X為橫坐標，繪制標準曲線。烏藥醚內(nèi)酯的線性回歸方程為：Y=37776X+25857，r＝0.9995，烏藥醚內(nèi)酯在0.018～3.6 μg質(zhì)量范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 專屬性考察：在上述色譜條件下，將胃瘍寧丸供試品溶液、烏藥醚內(nèi)酯對照品、陰性對照溶液，分別進樣20 μL，得液相圖譜，顯示陰性對照無干擾，理論塔板數(shù)不低于2000，結(jié)果見圖1。

2.7 精密度實驗：精密吸取同一份對照品溶液，連續(xù)進樣5次，結(jié)果峰面積的RSD為0.5486%，n=5。精密度良好，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.8 重復(fù)性實驗：取樣品（批號EK1151）6份，按“供試品溶液的制備”方法制備樣品溶液，測定烏藥醚內(nèi)酯平均含量為2.18 μg/g，RSD為3.5%（n=6）。結(jié)果表明，方法的重復(fù)性良好，適合含量測定的要求。

2.9 穩(wěn)定性試驗：取重復(fù)性試驗中的1號樣品，分別于第0，2，4，6，8，10進樣，每次20 μL，記錄峰面積，求峰面積RSD，RSD=1.00%（n=6），結(jié)果顯示，在10 h內(nèi)，樣品穩(wěn)定。

2.10 加樣回收率試驗：取胃瘍寧丸樣品（批號EK1151）6份，每份精密稱取0.5 g，加入4倍量硅藻土研勻，精密稱取2.5 g，置具塞錐形瓶中，稱定重量，依次分別每組添加烏藥醚內(nèi)酯對照品溶液（80 μg/mL）15 μL，依法制成供試品溶液，按色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果顯示，該方法加樣回收率在95%～105%，符合《中國藥典》要求。

2.11 樣品含量測定取胃瘍寧7批，分別依法測定，測定結(jié)果為：批號EK1151，含量均值為2.177 μg/g，RSD含量2.62%；批號FL1061，含量均值為2.284 μg/g，RSD含量2.82%；批號FL1081，含量均值為2.544 μg/g，RSD含量1.04%。

3 結(jié)果與討論

圖1 烏藥醚內(nèi)酯的HPLC圖（A.烏藥醚內(nèi)酯對照品；B.陰性對照品；C.樣品（EK1151）；1.烏藥醚內(nèi)酯）

3.1 供試液制備方法的選擇：《中國藥典》2010年版一部烏藥項下供試品溶液的制備方法為索氏提取4 h[2]。查閱文獻[3-5]可知：在制劑的烏藥醚內(nèi)酯含量測定中超聲提取處理的方法也經(jīng)常使用，本文比較了以上兩種方法，結(jié)果表明，兩種方法提取液中烏藥醚內(nèi)酯含量分別為1.27 μg/g和1.28 μg/g，超聲提取比回流提取的提取效率更優(yōu)，且超聲提取操作簡單、穩(wěn)定，故選擇超聲提取法作為提取方法。本實驗還對超聲提取時間（15、30、45 min）進行了考察，結(jié)果表明，超聲提取30 min烏藥醚內(nèi)酯已經(jīng)提取完全，故選擇30 min作為提取時間，最終確定上述供試液制備方法。

3.2 烏藥醚內(nèi)酯可溶于乙醚，且高效液相色譜圖證明陰性無干擾，因此可用乙醚超聲處理樣品，因此可用此方法提取烏藥醚內(nèi)酯。此外，通過線性考察、精密度試驗、加樣回收試驗等一系列方法學(xué)考察，證明該高效液相方法簡便、準確、快速、重現(xiàn)性好，可作為胃瘍寧丸的含量測定的方法。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部.中藥成方制劑藥品標準.胃瘍寧丸[S].WS3-B-3935-98.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:71.

[3]左美玲,歐陽榮,皮曉華,等.烏藥不同炮制品中烏藥內(nèi)酯含量測定[J].中國醫(yī)藥指南,2010,8(2):43-44.

[4]張劍,彭金年,占豐軍.贛南烏藥中烏藥醚內(nèi)酯不同提取方法的比較研究[J].贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2013,33(6):819-820.

[5]余志華,文曉柯,吳雅莉.不同產(chǎn)地和采收時間烏藥藥材中有效成分的含量測定[J].中南藥學(xué),2013,11(7):541-544.