• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    刺五加葉藥物成分腦內(nèi)代謝動(dòng)力學(xué)及治療腦缺血作用的在線微透析—質(zhì)譜分析

    2015-11-16 18:26:15王倩倩張艷孟璐璐皮子鳳劉舒宋鳳瑞劉志強(qiáng)
    分析化學(xué) 2015年11期
    關(guān)鍵詞:神經(jīng)遞質(zhì)腦缺血質(zhì)譜

    王倩倩+張艷 孟璐璐+皮子鳳+劉舒+宋鳳瑞+劉志強(qiáng)

    摘 要 考察了刺五加葉中金絲桃苷和1,5-二咖啡酰奎寧酸入腦及腦內(nèi)代謝動(dòng)力學(xué)過程,同時(shí)評價(jià)刺五加葉對腦缺血大鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的影響。結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈構(gòu)建急性不完全性腦缺血模型,利用在線微透析-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法,ACE 5 C18-AR液相色譜柱等度洗脫,MRM負(fù)離子模式下監(jiān)測金絲桃苷和1,5-二咖啡??鼘幩嵩诮】导叭毖笫竽X內(nèi)代謝動(dòng)力學(xué)差異,正離子模式檢測不同組別大鼠腦內(nèi)谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、乙酰膽堿(Ach)、5-羥色胺(5- )、多巴胺(DA)6種神經(jīng)遞質(zhì)含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在線方法線性良好(R2>0.99),準(zhǔn)確度、精密度滿足分析要求;金絲桃苷和1,5-二咖啡??鼘幩峋芡高^血腦屏障到達(dá)腦部,代謝迅速,在缺血大鼠腦內(nèi)吸收降低,消除加快;相比模型大鼠,預(yù)防性刺五加葉給藥7天后,缺血大鼠腦內(nèi)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)Glu、Asp、GABA和單胺類神經(jīng)遞質(zhì)DA的水平顯著降低(p<0.01),Ach水平顯著升高(p<0.05)。

    關(guān)鍵詞 刺五加葉; 腦缺血; 神經(jīng)遞質(zhì); 在線微透析-質(zhì)譜

    1 引 言

    腦血管病是威脅人類健康與生命的主要疾病之一,其中缺血性腦血管病占到了80%以上[1]。缺血發(fā)生時(shí),腦組織能量衰竭,出現(xiàn)線粒體功能紊亂、酸中毒、水腫、鈣泵失調(diào)等現(xiàn)象,繼而引發(fā)Ca2+超載、毒性自由基生成增多、神經(jīng)遞質(zhì)釋放失衡和細(xì)胞凋亡[2]。各因素間相互聯(lián)系,互為因果,形成瀑布樣級聯(lián)反應(yīng),嚴(yán)重?fù)p傷患者神經(jīng)系統(tǒng)。膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿(Ach)、單胺類神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺(DA)和5-羥色胺(5- )、興奮性氨基酸谷氨酸(Glu)、天門冬氨酸(Asp)和抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)在多項(xiàng)神經(jīng)生理活動(dòng)中發(fā)揮作用廣泛,表現(xiàn)活躍。這些神經(jīng)遞質(zhì)的體內(nèi)水平變化與多種神經(jīng)元功能紊亂與神經(jīng)系統(tǒng)疾病[3 ~ 5]相關(guān)。

    刺五加系五加科植物刺五加[Acanthopanax senticosus (Rupr.et Maxim.)Harms]的干燥根和根莖或莖[6],其葉也可作藥用。研究表明,刺五加葉中含豐富的黃酮、皂苷及有機(jī)酸類活性成分,具有保護(hù)心腦血管、抗腫瘤、降血壓、抑制CYP450活性等藥理作用[7]。文獻(xiàn)報(bào)道,刺五加葉中以金絲桃苷為代表的黃酮提取物對DPPH和·OH具有良好的清除能力[8]。有機(jī)酚酸1,5-二咖啡??鼘幩幔?,5-diCQA)可通過激活Erk激酶上調(diào)細(xì)胞內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng),減輕1-甲基-4-苯基吡啶離子(MPP+)誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷[9]。目前,關(guān)于刺五加葉治療實(shí)驗(yàn)性腦缺血的研究已有報(bào)道。研究發(fā)現(xiàn),刺五加葉皂苷能夠顯著改善腦缺血大鼠血液流變學(xué)及血小板功能異常[10],提高腦組織超氧化物歧化酶活性,降低丙二醛、Ca2+及乳酸水平[11];刺五加葉總黃酮聯(lián)合電針治療能提高B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2蛋白表達(dá),減少腦缺血區(qū)域細(xì)胞凋亡的發(fā)生[12],但有關(guān)刺五加葉對缺血大鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)影響的研究還未見明確報(bào)道。本研究采用結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈構(gòu)建急性不完全性腦缺血模型[13],利用所搭建的微透析-質(zhì)譜在線分析平臺(tái)[14]實(shí)現(xiàn)正、負(fù)不同離子模式下對缺血大鼠腦內(nèi)內(nèi)源性神經(jīng)遞質(zhì)和外源性藥物成分的同時(shí)、實(shí)時(shí)、連續(xù)監(jiān)測,真實(shí)反映其在腦缺血病理狀態(tài)下的腦內(nèi)變化情況,簡化了樣品處理過程。

    2 實(shí)驗(yàn)部分

    2.1 儀器與試劑

    ACQUITYTM UPLC系統(tǒng),Xevo TQ 三級四極桿質(zhì)譜儀(美國Waters公司),ACE 5 C18-AR液相色譜柱(150 mm × 4.6mm)。微透析系統(tǒng):CMA 402灌注器推進(jìn)泵、CMA120動(dòng)物清醒活動(dòng)裝置、MAB6腦微透析探針(透析膜長4 mm,截留分子量15000 Da)、ASI腦定位儀、自組裝在線進(jìn)樣器。

    5-羥色胺(5- )、多巴胺(DA)、谷氨酸(Glu)、天門冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)和乙酰膽堿(Ach)均購于Sigma-Aldrich公司;金絲桃苷(Hyperoside,中國藥品生物制品檢定所);1,5-二咖啡??鼘幩幔?,5-diCQA,成都普瑞法科技開發(fā)有限公司,批號:D090617);刺五加葉提取物(實(shí)驗(yàn)室制注射用凍干粉)。乙腈(HPLC級,F(xiàn)isher公司);乙酸(HPLC級,Tedia公司);超純水(Milli-Q系統(tǒng),Millipore公司)。人工腦脊液(aCSF,pH 7.4)由1.2 mmol/L CaCl2, 2.0 mmol/L Na2HPO4·12H2O, 1.0 mmol/L MgCl2, 2.7 mmol/L KCl和145 mmol/L NaCl 配制而成。

    2.2 實(shí)驗(yàn)過程

    2.2.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

    雄性Wistar大鼠(240~280 g)40只,隨機(jī)分為4組,分別為對照組、腦缺血模型組、刺五加葉給藥組(140 mg/kg),對照藥曲克蘆丁組(50 mg/kg),尾靜脈給藥,每日一次,以上劑量均按照人體臨床用藥劑量折算。給藥7天后于海馬區(qū)埋入探針套管,次日進(jìn)行腦缺血手術(shù)。為同時(shí)進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究,缺血手術(shù)后按劑量給藥,并立即在線微透析采樣、檢測。

    微透析采樣:在大鼠海馬區(qū)(A: 5.6 mm,L: 4.6 mm,V: 4.6 mm)[15]埋入探針套管,次日插入腦探針,1.0 μL/min灌流aCSF平衡90 min,待腦缺血手術(shù)后立即采樣并在線檢測,采樣間隔20 min,連續(xù)采集180 min。

    急性不完全性腦缺血模型:大鼠以戊巴比妥鈉(40 mg/kg, ip)麻醉,分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈,雙線分別結(jié)扎,對照組只分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈不結(jié)扎。

    2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

    精密稱取8種待測物對照品,金絲桃苷和1,5-咖啡??鼘幩嵋约状既芙?,神經(jīng)遞質(zhì)以超純水溶解,分別制成1.0 mg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液。用aCSF-乙腈(4∶1, V/V)配制濃度為50.0 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。endprint

    2.2.3 色譜及質(zhì)譜條件

    色譜條件:柱溫為室溫;流動(dòng)相組成為20% A相(乙腈)和80% B相(0.5%乙酸溶液)等度洗脫,流速0.5 mL/min;進(jìn)樣量: 20 μL。

    質(zhì)譜條件:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式,刺五加葉中2種成分在負(fù)離子(-)模式下檢測,6種神經(jīng)遞質(zhì)在正離子(+)模式下檢測,源溫150℃,毛細(xì)管電壓2.0 kV(-)/3.0 kV(+),脫溶劑氣溫度400 ℃(-)/350℃(+),脫溶劑氣流速800L/h(-)/700L/h (+)。各待測物質(zhì)譜參數(shù)見表1。表1 8種待測物的MRM質(zhì)譜參數(shù)

    3 結(jié)果與討論

    3. 1 方法學(xué)考察

    3. 1. 1 線性范圍及檢出限、定量限

    配制系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,外標(biāo)法定量,以待測物濃度為橫坐標(biāo),定量離子對峰面積為縱坐標(biāo)得到各待測物線性回歸方程,所得相關(guān)系數(shù)(R2)均大于0.99,S/N≥3確定方法檢出限(LOD),S/N≥10確定定量限(LOQ),所得結(jié)果見表2。

    3.1.2 準(zhǔn)確度、精密度和基質(zhì)效應(yīng) 選取各待測物線性范圍內(nèi)高、中、低濃度水平標(biāo)樣添加于人工腦脊液中,每個(gè)濃度重復(fù)5次,于3日內(nèi)測得日內(nèi)及日間準(zhǔn)確度(RE,%)和精密度(RSD,%)。結(jié)果表明,8種待測物的日內(nèi)準(zhǔn)確度和精密度范圍分別在1.11%~10.80%和0.01%~14.40%,日間準(zhǔn)確度和精密度范圍分別為0.08%~14.82%和

    14.30%~0.26%,滿足生物樣品分析要求。

    在流動(dòng)相溶液A/B(1∶4, V/V)中添加高、中、低濃度對照品,制得溶劑標(biāo)樣;向空白大鼠腦透析液中同樣添加以上濃度對照品制,得基質(zhì)標(biāo)樣。空白大鼠腦透析液中含有一定濃度神經(jīng)遞質(zhì)待測物,基質(zhì)效應(yīng)(ME)的計(jì)算公式:

    ME(%)=(Amatrix-Asample)Astandard×100 (1)

    式中,Amatrix為基質(zhì)標(biāo)樣峰面積, Asample為腦透析液中待測物峰面積, Astandard為溶劑中標(biāo)樣峰面積。據(jù)此得到8種待測物的ME范圍在88.4%~113.6%之間,表明透析液基質(zhì)對待測物無明顯干擾。

    3.2 金絲桃苷和1,5-二咖啡??鼘幩崮X內(nèi)代謝動(dòng)力學(xué)分析

    利用微透析-質(zhì)譜在線分析平臺(tái)監(jiān)測了金絲桃苷和1,5-二咖啡??鼘幩?,比較二者在對照組及缺血大鼠腦內(nèi)的代謝動(dòng)力學(xué)差異,并利用PKSolver軟件進(jìn)行了數(shù)據(jù)分析。圖1為金絲桃苷和1,5-二咖啡??鼘幩岬哪X內(nèi)藥物濃度-時(shí)間曲線。

    由圖1可見,金絲桃苷和1,5-二咖啡??鼘幩崮軌蝽樌高^血腦屏障到達(dá)腦部,且代謝過程迅速,入腦后約0.5 h即達(dá)峰值,3 h內(nèi)基本代謝完全。表3列出了二者在對照組及腦缺血大鼠腦內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù), t1/2代表半衰期,Cmax 和tmax分別代表最大血藥濃度及達(dá)到此濃度的時(shí)間,AUC0-t代表零時(shí)間到最終采血點(diǎn)的濃度-時(shí)間曲線下面積,AUC0-inf_obs代表零時(shí)間到無限大時(shí)間的濃度-時(shí)間曲線下面積[16]。

    金絲桃苷和1,5-二咖啡??鼘幩岬乃幋鷦?dòng)力學(xué)參數(shù)在對照組及缺血大鼠腦內(nèi)呈現(xiàn)出了顯著變化。t1/2在臨床上多用于反映藥物從體內(nèi)消除速度的快慢,相比對照組,金絲桃苷和1,5-二咖啡??鼘幩嵩谌毖笫竽X內(nèi)的t1/2有所降低,表明二者在缺血大鼠腦內(nèi)消除速度加快;Cmax和tmax是反映藥物體內(nèi)吸收速率的兩個(gè)指標(biāo),AUC是評價(jià)藥物吸收程度的重要指標(biāo),給藥后約0.5 h藥物濃度即達(dá)峰值,說明二者能夠迅速透過血腦屏障到達(dá)腦部;二者在缺血大鼠腦內(nèi)的Cmax及AUC明顯降低,表明腦缺血的發(fā)生影響了刺五加葉中藥物成分的腦內(nèi)代謝,推測可能是大鼠腦缺血后血液流動(dòng)被阻斷或緩流,在缺血缺氧病理狀態(tài)下機(jī)體轉(zhuǎn)運(yùn)能力降低導(dǎo)致。

    3.3 刺五加葉治療腦缺血的作用評價(jià)

    刺五加葉中有效成分能夠順利到達(dá)腦部,為進(jìn)一步探究其治療腦缺血的作用機(jī)制,利用所搭建的微透析-質(zhì)譜在線分析平臺(tái)同時(shí)檢測了對照組、腦缺血模型組、刺五加葉給藥組和曲克蘆丁組大鼠末次給藥后3 h內(nèi)海馬區(qū)6種神經(jīng)遞質(zhì)水平,經(jīng)前期測定的探針回收率[17]校正后,所得結(jié)果見圖2。

    由圖2可見,缺血引發(fā)了大鼠腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)紊亂,Glu,Asp,GABA,DA和5- 在缺血3 h內(nèi)海馬區(qū)水平顯著高于對照組(p<0.01),Ach水平顯著降低(p<0.01)。Glu與Asp是興奮性氨基酸(EAAs),尤其Glu是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)。Glu儲(chǔ)存于神經(jīng)元末梢的突觸囊泡中,以Ca2+依賴的方式釋放到突觸間隙中,正常狀態(tài)下,大部分Glu會(huì)經(jīng)再攝取重新回到細(xì)胞內(nèi),只有小部分發(fā)揮興奮性神經(jīng)遞質(zhì)作用,用于信號傳遞。但在腦缺血狀態(tài)下,大量Ca2+內(nèi)流,必然引發(fā)Glu的過度釋放使谷氨酸受體處于持續(xù)興奮狀態(tài),導(dǎo)致神經(jīng)元死亡,引發(fā)神經(jīng)毒性[18]。給藥刺五加葉大鼠在缺血后Glu水平顯著低于模型大鼠(p<0.01),推測可能是一定程度上緩解了Ca2+大量內(nèi)流,發(fā)揮了鈣通道阻滯劑的作用。GABA為主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì),可以對突觸后神經(jīng)元起抑制保護(hù)作用,同時(shí)也可抑制突觸前神經(jīng)元Glu的釋放。本研究發(fā)現(xiàn),缺血大鼠腦內(nèi)GABA的水平顯著升高(p<0.01),推測可能是由于缺血早期Glu水平顯著升高,GABA發(fā)揮了代償性拮抗作用。但GABA的過度釋放也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)GABA耗竭,使細(xì)胞內(nèi)源性抑制降低,神經(jīng)元興奮-抑制失衡,繼而引發(fā)遲發(fā)性神經(jīng)元死亡[19]。Ach是促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶、維持覺醒的重要神經(jīng)遞質(zhì)。通常在腦梗塞恢復(fù)期或多發(fā)性腦梗塞癡呆的治療方案中會(huì)增加Ach量以改善認(rèn)知能力[20]。DA和5- 是主要的單胺類神經(jīng)遞質(zhì),二者在缺血大鼠腦內(nèi)含量顯著增高,一方面,由于缺血時(shí)大量Ca2+內(nèi)流,導(dǎo)致其釋放量增加;另一方面,缺血引發(fā)腦內(nèi)能量耗竭遞質(zhì)重?cái)z取受阻,且降解單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的單胺氧化酶(MAO)活性降低。文獻(xiàn)[21]報(bào)道,單胺類神經(jīng)遞質(zhì)能夠?qū)θ毖窠?jīng)元造成直接損傷,并能促進(jìn)興奮性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放,增加N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)的敏感性,進(jìn)一步促進(jìn)Ca2+的大量內(nèi)流。預(yù)防性給藥刺五加葉提取物及陽性對照藥曲克蘆丁,缺血大鼠腦內(nèi)6種神經(jīng)遞質(zhì)的水平紊亂得到不同程度改善。刺五加葉中有效藥物成分迅速透過血腦屏障到達(dá)大鼠腦部發(fā)揮作用,顯著降低了缺血大鼠腦內(nèi)Glu、Asp、GABA和DA的水平(p<0.01),升高了Ach的水平(p<0.05)。相比對照藥曲克蘆丁,刺五加葉對氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)具有更好的調(diào)節(jié)作用。endprint

    以所測得的神經(jīng)遞質(zhì)含量作為統(tǒng)計(jì)變量,采用偏最小二乘判別分析法(PLS-DA)通過得分圖對樣本進(jìn)行整體評價(jià)。在圖3中,橢圓區(qū)域代表95%置信區(qū)間內(nèi),每點(diǎn)代表一個(gè)生物樣本,對照組和腦缺血模型組間能夠明顯區(qū)分,表明缺血后大鼠海馬區(qū)的神經(jīng)遞質(zhì)水平發(fā)生了顯著改變;刺五加葉及曲克蘆丁組能與缺血模型組良好區(qū)分,說明預(yù)防性給藥刺五加葉提取物及曲克蘆丁后能有效調(diào)節(jié)缺血引發(fā)的神經(jīng)遞質(zhì)紊亂,對缺血導(dǎo)致的神經(jīng)損傷起到了保護(hù)作用。

    4 結(jié) 論

    刺五加葉中藥物成分金絲桃苷和1,5-二咖啡??鼘幩崮軌虺晒ν高^血腦屏障到達(dá)腦部發(fā)揮作用,并能夠有效緩解由缺血引發(fā)的神經(jīng)遞質(zhì)水平紊亂,尤其對氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì),其調(diào)節(jié)作用優(yōu)于陽性對照藥曲克蘆丁,表明刺五加葉具有較好的神經(jīng)保護(hù)作用。本研究實(shí)現(xiàn)了對內(nèi)源性及外源性物質(zhì)在不同離子監(jiān)測模式下的同時(shí)、實(shí)時(shí)、連續(xù)檢測,從調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)角度研究了刺五加葉對腦缺血的治療作用,對開展藥效學(xué)及藥物代謝過程的體內(nèi)研究具有借鑒意義。

    References

    1 LIU Qing-Qing, GUO Hong, WANG Shao-Xia, LI Mei-Jiao, LIU Yang. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2012, 30(6): 1228-1230

    劉青青, 郭 虹, 王少峽, 李美嬌, 劉 洋. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2012, 30(6): 1228-1230

    2 Siesjo B K. J. Neurosurg., 1992, 77(3): 337-354

    3 Lanari A, Amenta F, Silvestrelli G, Tomassoni D, Parnetti L. Mech. Ageing. Dev., 2006, 127(2): 158-165

    4 SONG Cai-Yong, YU Li, LI Xue-Yan, FANG Liang-Lian, CHEN Yao-Ru, GAO Hong-Chang, LIN Li. Chinese Journal of Analysis Laboratory, 2011, 30(8): 80-83

    宋才勇, 余 莉, 李雪艷, 方亮蓮, 陳瑤如, 高紅昌, 林 麗. 分析試驗(yàn)室, 2011, 30(8): 80-83

    5 Krzysciak W. Acta Biochim. Polon., 2011, 58(4): 461-466

    6 Chinese Pharmacopoeia Commission, Chinese Pharmacopoeia, 2010, China Medical Science Press, Beijing, 2010: 192

    中國藥典委員會(huì), 中華人民共和國藥典 (2010版), 北京:中國醫(yī)藥科技出版社, 2010: 192

    7 BI Yun-Feng, ZHU Hong-Bin, PI Zi-Feng, LIU Zhi-Qiang, SONG Feng-Rui.Chem. J. Chinese Universities, 2013, 34(5): 1067-1071

    畢云楓, 朱洪彬, 皮子鳳, 劉志強(qiáng), 宋鳳瑞. 高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào), 2013, 34(5): 1067-1071

    8 LIU Wen-Chuang, LIU Chun-Ming, LU Juan, WANG Duo. Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine, 2011, 38(8): 1622-1625

    劉文闖, 劉春明, 陸 娟, 王 鐸. 遼寧中醫(yī)雜志, 2011, 38(8): 1622-1625

    9 CAO Xu, XIAO Hai-Bin, LI Hui, SUN Sheng-Gang, CHU Xiao-Fan. Acta Medicinae Universitatis Scientiae et Technologiae Huazhong, 2010, 39(4): 435-438

    曹 旭, 肖海兵, 李 慧, 孫圣剛, 褚曉凡. 華中科技大學(xué)學(xué)報(bào): 醫(yī)學(xué)版, 2010, 39(4): 435-438

    10 JIANG Hong-Yu, SUI Da-Yuan, YU Xiao-Feng, QU Shao-Chun, XU Hua-Li, WANG Zhi-Cai, CHEN Yan-Ping. Journal of Jilin University(Medicine Edition), 2004, 30(3): 384-386

    姜紅玉, 睢大員, 于曉風(fēng), 曲紹春, 徐華麗, 王志才, 陳燕萍. 吉林大學(xué)學(xué)報(bào): 醫(yī)學(xué)版, 2004, 30(3): 384-386

    11 SUI Da-Yuan, YU Xiao-Feng, QU Shao-Chun, XU Hua-Li, WANG Zhi-Cai, CHEN Yan-Ping. Chinese Traditonal Drug, 2005, 36(4): 561-563

    睢大員, 于曉風(fēng), 曲紹春, 徐華麗, 王志才, 陳燕萍. 中草藥, 2005, 36(4): 561-563

    12 ZHANG Xiao-Li, SHI Xue-Kui, CAI Wen-Hui, WANG Ya-Xian. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae, 2011, 17(5): 177-180endprint

    張曉莉, 石學(xué)魁, 蔡文輝, 王亞賢. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2011, 17(5): 177-180

    13 XIN Qin, LI Xiu-Fang, SI Duan-Yun, LIU Shan-Ting, DAI Wei-Juan. Traditional Chinese Medicine Patent Prescription, 2004, 26(3): 222-224

    辛 勤, 李秀芳, 司端運(yùn), 劉善庭, 戴偉娟. 中成藥, 2004, 26(3): 222-224

    14 WANG Qian-Qian, ZHANG Jing, PI Zi-Feng, LIU Shu, SONG Feng-Rui, LIU Zhi-Qiang. Chinese J. Anal Chem., 2014, 42(7): 997-1001

    王倩倩, 張 靜, 皮子鳳, 劉 舒, 宋鳳瑞, 劉志強(qiáng). 分析化學(xué), 2014, 42(7): 997-1001

    15 CHEN Wen-Zhen, WANG Kai-Yan, HONG Zhen, L Chuan-Zhen. Chinese Journal of Neuroanatomy, 2008, 24(4): 425-428

    陳文珍, 王開顏, 洪 震, 呂傳真. 神經(jīng)解剖學(xué)雜志, 2008, 24(4): 425-428

    16 WANG Guang-Ji. Pharmacokinetics, Beijing: Chemical Industry Press, Beijing, 2005: 95-97

    王廣基. 藥物代謝動(dòng)力學(xué), 北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2005: 95-97

    17 Wang Q Q, Zhang J, Pi Z F, Zheng Z, Xing J P, Song F R, Liu S, Liu Z Q. Anal. Methods, 2015, 7(1): 45-52

    18 MEI He-Shan, WANG Yong-Li. Chinese Pharmacological Bulletin, 2005, 21(4): 393-396

    梅和珊, 王永利. 中國藥理學(xué)通報(bào), 2005, 21(4): 393-396

    19 ZHAN Yong, HAN Zhong-Yan. Stroke and Nervous Diseases, 1999, 6(6): 30-32

    張 勇, 韓仲巖. 卒中與神經(jīng)疾病, 1999, 6(6): 30-32

    20 XING Hong-Yi, WANG Cai-Yuan, GUAN Xin-Min. Acta Universitatis Medicinae TongJi, 1999, 28(4): 322-325

    邢宏義, 王才源, 關(guān)新民. 同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 1999, 28(4): 322-325

    21 MENG Qiang. Foreign Medical Sciences Cerebrovascular Diseases, 1998, 6(2): 7-10

    孟 強(qiáng). 單胺類神經(jīng)遞質(zhì)與缺血性腦損傷. 國外醫(yī)學(xué)(腦血管疾病分冊), 1998, 6(2): 7-10endprint

    猜你喜歡
    神經(jīng)遞質(zhì)腦缺血質(zhì)譜
    槐黃丸對慢傳輸型便秘大鼠結(jié)腸神經(jīng)遞質(zhì)及SCF/c-kit通路的影響
    氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀在農(nóng)殘檢測中的應(yīng)用及維護(hù)
    快樂不快樂神經(jīng)遞質(zhì)說了算
    大眾健康(2021年2期)2021-03-09 13:32:23
    吹掃捕集-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用測定水中18種揮發(fā)性有機(jī)物
    怡神助眠湯治療失眠癥的療效及對腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的影響
    原花青素對腦缺血再灌注損傷后腸道功能的保護(hù)作用
    血必凈對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制
    細(xì)胞外組蛋白與腦缺血再灌注損傷關(guān)系的初探
    棗霜化學(xué)成分的色譜質(zhì)譜分析
    Modeled response of talik development under thermokarst lakes to permafrost thickness on the Qinghai-Tibet Plateau
    波野结衣二区三区在线| 777米奇影视久久| 色视频在线一区二区三区| 一本综合久久免费| 亚洲精品一区蜜桃| 视频区欧美日本亚洲| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 精品亚洲成a人片在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 美女大奶头黄色视频| 两人在一起打扑克的视频| 看免费av毛片| 中文字幕亚洲精品专区| 成人免费观看视频高清| 精品国产一区二区久久| 免费在线观看日本一区| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产又色又爽无遮挡免| 久久精品成人免费网站| 中国国产av一级| 手机成人av网站| 久久久国产欧美日韩av| 天天添夜夜摸| 一级毛片 在线播放| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 美女中出高潮动态图| 国产熟女欧美一区二区| 少妇人妻久久综合中文| av电影中文网址| 亚洲伊人色综图| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产成人av教育| 高潮久久久久久久久久久不卡| 一级a爱视频在线免费观看| 天天影视国产精品| cao死你这个sao货| 国产精品欧美亚洲77777| 日本欧美国产在线视频| avwww免费| 欧美xxⅹ黑人| 久久久国产一区二区| 欧美乱码精品一区二区三区| 韩国精品一区二区三区| 女性生殖器流出的白浆| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 日本av手机在线免费观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产精品国产av在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av | 水蜜桃什么品种好| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产精品偷伦视频观看了| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| a 毛片基地| 国产在线观看jvid| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 两人在一起打扑克的视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 成年av动漫网址| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲欧洲国产日韩| 我要看黄色一级片免费的| 十八禁高潮呻吟视频| 国产精品一区二区在线观看99| 精品熟女少妇八av免费久了| 9191精品国产免费久久| 日本五十路高清| 久久女婷五月综合色啪小说| 狂野欧美激情性xxxx| 午夜福利影视在线免费观看| 午夜影院在线不卡| 久久久久久久久久久久大奶| 久久影院123| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产精品国产三级国产专区5o| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 欧美中文综合在线视频| 韩国高清视频一区二区三区| 成人免费观看视频高清| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲精品日本国产第一区| 国产又爽黄色视频| cao死你这个sao货| 精品第一国产精品| www.自偷自拍.com| 免费高清在线观看日韩| 婷婷丁香在线五月| 国产亚洲av高清不卡| 黄片小视频在线播放| 中文欧美无线码| 久久综合国产亚洲精品| 丝袜在线中文字幕| 人体艺术视频欧美日本| 夫妻午夜视频| 一级黄片播放器| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲av成人精品一二三区| 国产成人免费无遮挡视频| 自线自在国产av| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产成人欧美在线观看 | 青草久久国产| 免费在线观看日本一区| 午夜影院在线不卡| 免费人妻精品一区二区三区视频| 91老司机精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 丝袜美腿诱惑在线| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲成色77777| 最新在线观看一区二区三区 | 亚洲av电影在线进入| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产在视频线精品| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲色图综合在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 两性夫妻黄色片| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲国产精品一区三区| 午夜免费成人在线视频| 视频在线观看一区二区三区| 真人做人爱边吃奶动态| 在线观看免费视频网站a站| 免费高清在线观看视频在线观看| 女性被躁到高潮视频| 男人添女人高潮全过程视频| 香蕉国产在线看| 在线观看免费高清a一片| 亚洲 国产 在线| 国产男女超爽视频在线观看| 国产精品三级大全| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| cao死你这个sao货| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久久久久人人人人人| 黄色一级大片看看| 国产男女内射视频| 国产精品久久久久久精品古装| 视频区欧美日本亚洲| 精品久久蜜臀av无| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 亚洲av电影在线进入| 婷婷丁香在线五月| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 大型av网站在线播放| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产日韩欧美亚洲二区| 在线观看免费日韩欧美大片| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲国产看品久久| 观看av在线不卡| 久久精品国产综合久久久| 国产免费又黄又爽又色| 欧美日韩成人在线一区二区| 一本综合久久免费| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | av欧美777| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 在线观看免费高清a一片| 亚洲第一av免费看| av福利片在线| 国产在视频线精品| 捣出白浆h1v1| 男女边吃奶边做爰视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 男女免费视频国产| 久久 成人 亚洲| 丝袜喷水一区| 亚洲天堂av无毛| 无限看片的www在线观看| 国产欧美日韩一区二区三 | 国产成人欧美在线观看 | 少妇人妻久久综合中文| 亚洲精品在线美女| 日本a在线网址| 精品一区二区三卡| 大香蕉久久成人网| 一本大道久久a久久精品| 久热这里只有精品99| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 不卡av一区二区三区| 国产又色又爽无遮挡免| 国产成人欧美在线观看 | 国产一区二区在线观看av| 手机成人av网站| 十八禁网站网址无遮挡| 性少妇av在线| 啦啦啦啦在线视频资源| 性色av乱码一区二区三区2| av一本久久久久| 免费在线观看影片大全网站 | 少妇人妻 视频| 成人三级做爰电影| 国产日韩欧美亚洲二区| 午夜福利免费观看在线| 午夜老司机福利片| 婷婷色综合www| 国产淫语在线视频| 国产成人精品久久久久久| 少妇人妻 视频| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 中文字幕人妻丝袜制服| 午夜激情久久久久久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 人妻一区二区av| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产精品一区二区在线不卡| 一边摸一边做爽爽视频免费| 精品一品国产午夜福利视频| 精品福利永久在线观看| 免费av中文字幕在线| 热99国产精品久久久久久7| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 色94色欧美一区二区| 69精品国产乱码久久久| www.精华液| 男男h啪啪无遮挡| 欧美 日韩 精品 国产| 欧美av亚洲av综合av国产av| 精品人妻在线不人妻| 久久精品国产亚洲av高清一级| 99精品久久久久人妻精品| 日日爽夜夜爽网站| 99热全是精品| 久久天堂一区二区三区四区| 男女免费视频国产| 最黄视频免费看| 国产高清videossex| 国产一级毛片在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲精品av麻豆狂野| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久天堂一区二区三区四区| 日韩大片免费观看网站| 悠悠久久av| 天堂中文最新版在线下载| 午夜免费鲁丝| 成年动漫av网址| 中文欧美无线码| 色播在线永久视频| 国产真人三级小视频在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 无遮挡黄片免费观看| 制服诱惑二区| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 国产视频一区二区在线看| 中文字幕人妻丝袜制服| 午夜91福利影院| 熟女av电影| 国产男人的电影天堂91| av在线app专区| 男人操女人黄网站| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲黑人精品在线| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲成色77777| 9色porny在线观看| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产精品一区二区在线观看99| 久久热在线av| 国产午夜精品一二区理论片| 日本vs欧美在线观看视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲人成电影观看| 亚洲精品日本国产第一区| 夫妻性生交免费视频一级片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 热99久久久久精品小说推荐| 大片电影免费在线观看免费| 涩涩av久久男人的天堂| 极品人妻少妇av视频| 老汉色∧v一级毛片| 久久免费观看电影| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲av电影在线进入| 黄色怎么调成土黄色| 午夜免费观看性视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 老司机靠b影院| 电影成人av| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 在线观看人妻少妇| 免费不卡黄色视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 免费不卡黄色视频| 久久久久久久国产电影| 男人操女人黄网站| 蜜桃国产av成人99| 欧美日韩视频精品一区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产欧美亚洲国产| 精品少妇久久久久久888优播| 午夜福利一区二区在线看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 国产av一区二区精品久久| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 嫩草影视91久久| 亚洲天堂av无毛| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲天堂av无毛| 日韩一区二区三区影片| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产视频一区二区在线看| 欧美精品一区二区大全| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产有黄有色有爽视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产伦人伦偷精品视频| 热99国产精品久久久久久7| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 91精品国产国语对白视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产高清国产精品国产三级| 少妇被粗大的猛进出69影院| 中文字幕最新亚洲高清| 国产伦理片在线播放av一区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 午夜福利乱码中文字幕| 免费av中文字幕在线| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产一区亚洲一区在线观看| 午夜影院在线不卡| 一级片'在线观看视频| 日本91视频免费播放| 日韩伦理黄色片| 亚洲av综合色区一区| 18在线观看网站| 午夜激情av网站| 亚洲av欧美aⅴ国产| 老司机影院成人| 国产男女超爽视频在线观看| 人妻人人澡人人爽人人| 成年美女黄网站色视频大全免费| 人妻人人澡人人爽人人| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲中文av在线| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲中文av在线| 我的亚洲天堂| 黄色视频不卡| 脱女人内裤的视频| 欧美日本中文国产一区发布| 国产av国产精品国产| 欧美日本中文国产一区发布| 在线观看免费高清a一片| 黄色一级大片看看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 午夜91福利影院| 99精国产麻豆久久婷婷| 99国产精品一区二区三区| 香蕉丝袜av| 亚洲国产最新在线播放| 黑丝袜美女国产一区| 咕卡用的链子| 人体艺术视频欧美日本| av电影中文网址| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 久久国产亚洲av麻豆专区| 看免费成人av毛片| 黄色毛片三级朝国网站| 国产精品国产av在线观看| 麻豆av在线久日| 天天添夜夜摸| 日本午夜av视频| 婷婷色综合www| 老汉色av国产亚洲站长工具| 日韩制服骚丝袜av| 一级黄色大片毛片| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲成人免费av在线播放| 只有这里有精品99| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产不卡av网站在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 中文字幕制服av| 男女边摸边吃奶| 一本综合久久免费| 亚洲精品美女久久av网站| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲图色成人| 久久99精品国语久久久| 又黄又粗又硬又大视频| av有码第一页| 中文字幕最新亚洲高清| 日本欧美视频一区| 99热网站在线观看| 男人添女人高潮全过程视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲成人手机| 大话2 男鬼变身卡| 一级黄片播放器| 婷婷色麻豆天堂久久| 美女国产高潮福利片在线看| h视频一区二区三区| 无遮挡黄片免费观看| 国产黄色免费在线视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 视频区欧美日本亚洲| 搡老乐熟女国产| 丝袜喷水一区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 老司机在亚洲福利影院| 丝袜人妻中文字幕| 老司机靠b影院| 精品国产一区二区久久| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产男女内射视频| 欧美人与善性xxx| 亚洲 欧美一区二区三区| 免费高清在线观看日韩| 亚洲一区中文字幕在线| 国产黄频视频在线观看| 亚洲图色成人| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲成人国产一区在线观看 | 一区二区日韩欧美中文字幕| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 一本大道久久a久久精品| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲av男天堂| 两个人免费观看高清视频| 搡老乐熟女国产| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲国产最新在线播放| 丝袜喷水一区| 可以免费在线观看a视频的电影网站| avwww免费| 黑人欧美特级aaaaaa片| 午夜福利在线免费观看网站| www日本在线高清视频| 久久免费观看电影| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 久久精品国产亚洲av高清一级| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产深夜福利视频在线观看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产不卡av网站在线观看| 国精品久久久久久国模美| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲一区中文字幕在线| 成年人黄色毛片网站| 亚洲精品一区蜜桃| 国产精品三级大全| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲七黄色美女视频| 少妇 在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 无遮挡黄片免费观看| av一本久久久久| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精品久久久久成人av| 黄频高清免费视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲一区二区三区欧美精品| 又黄又粗又硬又大视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 午夜福利在线免费观看网站| 亚洲国产欧美网| 性高湖久久久久久久久免费观看| 高清不卡的av网站| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲情色 制服丝袜| 国产欧美日韩一区二区三 | 老司机影院毛片| 99久久综合免费| 99国产精品免费福利视频| 我的亚洲天堂| 黄片小视频在线播放| 欧美大码av| 亚洲视频免费观看视频| 伦理电影免费视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲精品国产一区二区精华液| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产男人的电影天堂91| 国产xxxxx性猛交| 首页视频小说图片口味搜索 | 爱豆传媒免费全集在线观看| av在线app专区| 日韩大片免费观看网站| tube8黄色片| 色综合欧美亚洲国产小说| 日韩视频在线欧美| 啦啦啦在线观看免费高清www| 精品国产一区二区三区四区第35| 国产成人av激情在线播放| 国产有黄有色有爽视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲伊人久久精品综合| av视频免费观看在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 人成视频在线观看免费观看| 老司机靠b影院| 精品欧美一区二区三区在线| 精品人妻熟女毛片av久久网站| av不卡在线播放| 国产精品一国产av| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 大话2 男鬼变身卡| 丝袜在线中文字幕| 高清av免费在线| 日本黄色日本黄色录像| 成年人午夜在线观看视频| 99香蕉大伊视频| 一区福利在线观看| 热re99久久国产66热| 男女边摸边吃奶| av天堂在线播放| 中国国产av一级| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 性色av一级| 国产精品人妻久久久影院| 久久久久精品人妻al黑| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 视频区图区小说| 久久亚洲精品不卡| 国产免费视频播放在线视频| 人成视频在线观看免费观看| 自线自在国产av| 久久久久精品国产欧美久久久 | 日韩av在线免费看完整版不卡| 18禁观看日本| 亚洲精品国产色婷婷电影| 免费高清在线观看日韩| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 午夜视频精品福利| 亚洲欧美精品自产自拍| av国产精品久久久久影院| www.av在线官网国产| 黄色怎么调成土黄色| 国产欧美亚洲国产| 99久久99久久久精品蜜桃| 人体艺术视频欧美日本| 国产在视频线精品| 在线看a的网站| 国产精品一区二区精品视频观看| 又大又爽又粗| 妹子高潮喷水视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 精品人妻一区二区三区麻豆| av网站在线播放免费| kizo精华| av在线播放精品| 国产av精品麻豆| 老司机在亚洲福利影院| 国产成人影院久久av| 婷婷色av中文字幕| 精品国产乱码久久久久久小说| 新久久久久国产一级毛片| 成人三级做爰电影| 熟女av电影| 美女福利国产在线| 大话2 男鬼变身卡| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 精品熟女少妇八av免费久了| 91成人精品电影| 午夜激情久久久久久久| 黄片小视频在线播放| 中文字幕高清在线视频| 免费观看人在逋| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 后天国语完整版免费观看| 国产在线一区二区三区精| 国产一区二区在线观看av| 亚洲成人免费av在线播放| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| av在线老鸭窝| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 母亲3免费完整高清在线观看| 日本五十路高清| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲国产欧美一区二区综合| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 日本五十路高清| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲精品久久午夜乱码| 色网站视频免费|