腫瘤周邊區(qū)微淋巴管密度對子宮內(nèi)膜癌患者生存狀況的影響

王 梅 李征宇

子宮內(nèi)膜癌是婦科常見的疾病，為婦科惡性腫瘤首位［1］。本文對我院收治的子宮內(nèi)膜癌患者回顧性分析淋巴管內(nèi)皮細胞透明質(zhì)酸受體(LYVE-1)、缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)及血管內(nèi)皮生長因子C(VEGF-C)的表達情況，探討腫瘤周邊淋巴管密度(LVD)對子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征及其生存狀況的影響。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月－2014年1月我院收治的子宮內(nèi)膜癌患者115例，年齡35～73歲，平均(45.8±16.5)歲。其中高分化41例，中分化54例，低分化20例;按1988年FIGO臨床標準分期，其中Ⅰ期45例，Ⅱ期38例，Ⅲ期32例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者29例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者86例;無肌層浸潤12例，淺肌層浸潤≤1/2肌層53例，深肌層浸潤＞1/2肌層62例;子宮內(nèi)膜樣腺癌102例，透明細胞8例，腺鱗癌5例。按WHO的腫瘤細胞分級標準分級，其中G1級51例，G2級35例，G3級29例。ER和(或)PR(+)者68例，ER、PR均為(－)者57例。選擇同期正常子宮內(nèi)膜標本20例作為對照。

1.2 試劑及檢測方法

免疫組化SP法試劑盒及DAB顯色液均為生工生物工程(上海)有限公司產(chǎn)品。采用免疫組化SP法檢測LYVE-1、HIF-1α、VEGF-C的表達水平。實驗步驟:①切片常規(guī)二甲苯脫蠟，脫水;②過氧化氫甲醇阻斷過氧化物酶，枸櫞酸鹽緩沖液(0.01M，pH 6.0)抗原熱修復(fù)，冷卻至室溫;③一抗:加入10%羊非免疫血清，孵育20 min后倒出血清，將稀釋好的鼠抗人LYVE-1、HIF-1α和VEGF-C單克隆抗體加入其中，4℃過夜孵育，PBS洗滌3次;④二抗:加入辣根酶標記鏈霉卵白素，37℃孵育30 min;⑤染色:先后用DAB和蘇木精各染色5 min。用已知陽性切片組織作陽性對照，PBS代替一抗做陰性對照。

1.3 評判標準

HIF-1α顯色于胞核，而VEGF-C顯色于細胞質(zhì)，高倍鏡下隨機選取每個切片5個視野，每個視野計算100個細胞中的陽性細胞數(shù)，計算陽性細胞率，并取5組數(shù)的平均值。陽性細胞率≥50%為陽性標準，陽性細胞率＜50%為陰性標準。LYVE-1標記淋巴管內(nèi)皮細胞，參照孟曉瑜等［1］方法計算LVD，低倍鏡下分別對子宮內(nèi)膜癌組織腫瘤邊緣(P-LVD)和中心區(qū)陽性淋巴管密集區(qū)域(I-LVD)即“hotspot”區(qū)進行觀察，高倍鏡下隨機選取每個切片5個視野，每個視野計算LVD，并取5組數(shù)的平均值。

1.4 隨訪

采用電話隨訪的方式對所有患者隨訪4～80個月，隨訪截止時間為2014年4月。

1.5 統(tǒng)計學處理

所有資料應(yīng)用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計分析，多組比較采用χ2檢驗，計量資料采用平均數(shù)±標準差。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 LVD與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

HIF-1α和VEGF-C的陽性表達率分別為76.19%和52.38%;腫瘤邊緣區(qū)和腫瘤中心區(qū)LYVE-1+微淋巴管陽性表達率分別為88.69%和62.61%。P-LVD和 I-LVD 平均為(20.38 ±5.18)個/高倍視野和(4.29±0.97)個/高倍視野。子宮內(nèi)膜癌患者P-LVD和ILVD與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。結(jié)果顯示，PLVD與腫瘤分化程度、FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是否有關(guān)(P＜0.05)，與腫瘤病理類型、組織學分級、基層侵襲和激素受體表達無關(guān)，I-LVD與所有參數(shù)無關(guān)(P＞0.05)。

表1 子宮內(nèi)膜癌患者P-LVD和I-LVD與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系(s)

表1 子宮內(nèi)膜癌患者P-LVD和I-LVD與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系(s)

項目 例數(shù) P-LVD P值 I-LVD P值0.035 0.356高41 22.57 ±2.68 5.35 ±2.45中54 20.19 ±5.27 5.25 ±1.67低20 17.34 ±6.13 4.98 ±3.28病理類型 0.372 0.426腺癌 102 20.46 ±5.21 5.01 ±2.14鱗癌 8 19.37 ±5.19 4.92 ±3.21透明細胞癌 5 20.61 ±4.18 5.03 ±0.28 FIGO 分期 0.041 0.532Ⅰ期 45 21.45 ±6.32 5.16 ±1.56Ⅱ期 38 18.36 ±6.18 5.05 ±1.75Ⅲ期 32 20.56 ±3.71 5.21 ±3.28組織學分級 0.496 0.427 G1 級 51 20.06 ±2.78 4.99 ±2.64 G2 級 35 21.56 ±4.92 5.28 ±0.35 G3 級 29 20.18 ±3.22 4.89 ±2.55肌層侵襲 0.391 0.537≥1/2 53 20.01 ±3.29 5.17 ±2.17＜1/2 62 19.89 ±6.27 5.11 ±3.27淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 0.028 0.245有29 22.15 ±5.22 4.96 ±3.23無86 18.34 ±4.68 5.22 ±2.18激素受體 0.693 0.426 ER/PR(+)68 19.35 ±4.25 4.79 ±3.56 ER/PR(－)分化程度57 20.45 ±2.66 5.22 ±2.65

2.2 單因素分析

所有患者1年、3年、5年生存率分別為95.65%、86.96%、78.26%，25 例患者死亡，占 21.74%。將腫瘤邊緣區(qū)和腫瘤中心區(qū)LYVE-1+微淋巴管陽性表達患者分為高、低組，即高P-LVD組和低P-LVD組，高ILVD組和低I-LVD組。分析顯示，P-LVD、病理類型、FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著影響子宮內(nèi)膜癌患者的5年生存率(P＜0.05);高P-LVD組5年生存率顯著高于低P-LVD組(P＜0.05);I-LVD、分化程度、組織學分級、基層侵襲和激素受體表達對子宮內(nèi)膜癌患者的5年生存率無影響(P＞0.05)。

表2 子宮內(nèi)膜癌患者5年生存率與其臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例，%)

2.3 多因素分析

預(yù)后多因素分析結(jié)果見表3。結(jié)果顯示P-LVD、病理類型、FIGO分期為其預(yù)后的獨立危險因素(P＜0.05)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為非獨立危險因素(P＜0.05)。

表3 子宮內(nèi)膜癌預(yù)后多因素Cox分析結(jié)果

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是女性常見的惡性腫瘤，一旦發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。影響子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的因素一般分為臨床病理因素和一般生物學因素［2-3］。各有關(guān)子宮內(nèi)膜癌預(yù)后影響因素的報道也不一致，因此，深入探討子宮內(nèi)膜癌患者的臨床特征和預(yù)后的關(guān)系至關(guān)重要。研究顯示，腫瘤能誘發(fā)新生血管和淋巴管形成，促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移，因此淋巴管是判斷包括子宮內(nèi)膜癌在內(nèi)的多種腫瘤預(yù)后的指標［4］。

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中有重要作用，腫瘤淋巴管浸潤的發(fā)生是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的前提［1］。LYVE-1被廣泛應(yīng)用于檢測子宮內(nèi)膜癌組織中微淋巴管的生成，本文研究顯示，腫瘤邊緣區(qū)和腫瘤中心區(qū)有LYVE-1+微淋巴管陽性表達率分別為88.69%和62.61%。P-LVD 和 I-LVD 分別平均為(20.38±5.18)個/高倍視野和(4.29±0.97)個/高倍視野，P-LVD 顯著高于I-LVD(P＜0.05)。推斷可能機制是由于腫瘤中心高的組織間隙壓力限制了腫瘤細胞侵襲生長，同時對新生的淋巴管有一定的破壞作用所致，腫瘤周邊組織相對疏松的環(huán)境為淋巴管的增生提供了良好的環(huán)境，成為腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的重要途徑。P-LVD與分化程度、FIGO分期和是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，與病理類型、組織學分級、基層侵襲和激素受體表達無關(guān)，ILVD與所有參數(shù)無關(guān)(P＞0.05)。

早期惡性腫瘤的生長需要大量營養(yǎng)和氧氣，代謝產(chǎn)物不能及時排除體外造成了腫瘤組織形成缺氧、微酸的環(huán)境［5-6］。HIF-1α由于在缺氧和微酸環(huán)境中的降解受限，因此在多種腫瘤中高表達，同時，其具有促進基質(zhì)金屬蛋白酶表達的作用，從而進一步推進惡性腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移［5］。VEGF-C可通過與淋巴管內(nèi)皮細胞受體VEGFR-3結(jié)合促進淋巴管增生。本研究顯示，HIF-1α和VEGF-C的陽性表達率分別為76.19%和52.38%，高于正常婦女的的陽性表達率。推斷HIF-1α和VEGF-C在子宮內(nèi)膜癌患者中活性較高，可以促進淋巴管形成。

此外，本研究通過單因素分析顯示P-LVD、病理類型、FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著影響子宮內(nèi)膜癌患者的5年生存率(P＜0.05);高P-LVD組患者5年生存率顯著低于低 P-LVD組(P＜0.05);I-LVD、分化程度、組織學分級、基層侵襲和激素受體表達對子宮內(nèi)膜癌患者的5年生存率無影響(P＞0.05)，與多個文獻報道一致［7-9］。提示P-LVD可發(fā)展成為判斷有無遠處轉(zhuǎn)移及預(yù)后的重要指標。多因素分析結(jié)果顯示，PLVD、病理類型、FIGO分期為子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的獨立危險因素(P＜0.05)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為非獨立因素(P＜0.05)。因此P-LVD可協(xié)助判斷子宮內(nèi)膜癌的惡性程度及生物學行，對臨床治療子宮內(nèi)膜癌患者提供借鑒意義。

推斷HIF-1α和VEGF-C在子宮內(nèi)膜癌患者中活性較高，可以促進淋巴管形成;P-LVD與分化程度、FIGO分期和是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，尚不能確定其是否可成為子宮內(nèi)膜癌預(yù)后指標;影響子宮內(nèi)膜癌患者的獨立危險因素有P-LVD、病理類型和FIGO分期，它們互相作用，共同影響子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后。

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