病害生豬及其產(chǎn)品無(wú)害化處理的研究

曾中華

（漳州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，福建 漳州 363000）

上海黃浦江死豬漂浮事件后，病害生豬及其產(chǎn)品無(wú)害化處理引起社會(huì)廣泛關(guān)注，影響畜牧業(yè)健康穩(wěn) 定發(fā)展、動(dòng)物疫病防控、環(huán)境污染整治、動(dòng)物產(chǎn)品安全和公共衛(wèi)生安全。本研究用掩埋、無(wú)害化處理池、畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)有機(jī)廢棄物處理機(jī) 3種模式，對(duì)病害生豬及其產(chǎn)品進(jìn)行無(wú)害化處理，檢測(cè)處理前后豬繁殖與 呼吸綜合癥、豬瘟、偽狂犬、圓環(huán)等 4 種病毒和大腸桿菌、蛔蟲卵及磺胺二甲基嘧啶、鹽酸土霉素的變 化情況，為科學(xué)處理提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器病害生豬及其產(chǎn)品，由龍海市益民農(nóng)牧有限公司病死豬集中無(wú)害化處理點(diǎn)提供；T Y-FCW-26 型畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)有機(jī)廢棄物處理機(jī)購(gòu)自漳州市天洋機(jī)械有限公司；天洋生物酵素購(gòu)自漳州市天洋機(jī)械有限 公司；Spx-150 生化培養(yǎng)箱購(gòu)自上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司；Ac2-4s1 生物安全柜購(gòu)自新加坡藝思高科技有限公司；光學(xué)顯微鏡購(gòu)自?shī)W林巴斯（中國(guó)）有限公司。Agilent 1100 高效液相色譜儀：美國(guó)Agilent 公 司；AllegraTM 21R 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)：美國(guó)Beckman公司；N-EVAP 111 氮吹儀：美國(guó)Organomation 公司。

1.1.2 主要試劑月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（LST）：北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào) 120201；煌 綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）：北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào) 111029；大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株：中國(guó)獸醫(yī)藥 品監(jiān)察所；鹽酸土霉素可溶性粉：山東德信生物科技有限公司，批號(hào)：2013101103，含量：鹽酸土霉素 50%；酒石酸泰樂(lè)磺胺二甲嘧啶可溶性粉：北京中農(nóng)華威制藥有限公司，批號(hào)：20130105，含量：磺胺 二甲基嘧啶 10%。

1.1.3 檢測(cè)試劑盒豬繁殖與呼吸綜合征病毒 RT-PCR 檢測(cè)試劑盒（生產(chǎn)批號(hào)：PRRS20140217P）、豬瘟 病毒通用型 RT-PCR 檢測(cè)試劑盒（生產(chǎn)批號(hào)：CSF20140114P）、豬偽狂犬病毒 PCR 檢測(cè)試劑盒（生產(chǎn)批號(hào)：PR20140218P）、豬圓環(huán)病毒檢測(cè)試劑盒（生產(chǎn)批號(hào)：PC20140121P），均由北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫 技術(shù)有限公司提供。

1.1.4 病害生豬及其產(chǎn)品由龍海市益民農(nóng)牧有限公司病死豬集中無(wú)害化處理點(diǎn)提供。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 病害生豬及其產(chǎn)品前處理試驗(yàn)分成4個(gè)批次，每批次選擇 10頭體重 20kg以上的病死生豬，采 集頜下淋巴結(jié)、腹股溝淋巴結(jié)、脾臟等組織送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)（處理前樣品）。同時(shí)，將剖檢采樣的10 頭病 死生豬和100kg谷糠及 500kg病害生豬及其產(chǎn)品加入畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)有機(jī)廢棄物處理機(jī)料槽內(nèi)，啟 動(dòng)處理機(jī) 運(yùn)轉(zhuǎn) 20min，停機(jī)將剩下物料加入處理機(jī)料槽內(nèi)，各批次再加入物料品種及數(shù)量（具體見(jiàn)表1），再啟動(dòng) 處理機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn) 3h后停機(jī)，根據(jù) GBT6679-2003[1]采 樣標(biāo)準(zhǔn)采 3 份樣品（前處理樣品），1 份 0.5kg送實(shí)驗(yàn)室 檢測(cè)，另外2 份各 50kg分別用掩埋和無(wú)害化處理池處理，剩余物料在處理機(jī)處理。

表1 4批次物料加入情況kg

1.2.2 無(wú)害化處理試驗(yàn)掩埋處理：挖 1個(gè)長(zhǎng)、寬、高各 1 m的掩埋坑，在坑底鋪撒 5cm厚的漂白粉，放入1份50kg前處理樣品，再用40cm的土層覆蓋，再鋪撒 5cm厚漂白粉，然后覆土掩埋，平整地面； 經(jīng)過(guò) 30d處理，按GB/T6679-2003 采樣標(biāo)準(zhǔn)，采集1 份 0.5kg樣品（掩埋處理后樣品）送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

無(wú)害化處理池處理：挖1個(gè)長(zhǎng)、寬、高各1 m的正方體無(wú)害化處理池，放入1份50kg前處理物料；經(jīng) 過(guò)30d處理，按GB/T6679-2003采樣標(biāo)準(zhǔn)，采集1份0.5kg樣品（處理池處理后樣品）送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

處理機(jī)處理：剩余物料均勻加入天洋酵素 2kg，啟動(dòng)處理機(jī)自動(dòng)處理按鈕，設(shè)備自動(dòng)運(yùn)行 24h后，調(diào)出溫度記錄，檢查處理機(jī)溫度是否在設(shè)定范圍內(nèi)，停機(jī)檢查處理物的干濕度、細(xì)度，檢查合格出料，按 GB/T6679-2003 采樣標(biāo)準(zhǔn)，采集 1 份0.5kg樣品（處理機(jī)處理后樣品）送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

1.2.3 四種病毒的檢測(cè)按照四種病毒的檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.4 大腸桿菌 MPN 計(jì)數(shù)按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 19524.1-2004《肥料中糞大腸菌群的測(cè)定》[2]進(jìn) 行檢測(cè)。

1.2.5 蛔蟲卵死亡率的測(cè)定按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 19524.2-2004《肥料中蛔蟲卵死亡率的測(cè)定》[3]進(jìn) 行檢測(cè)。

1.2.6 磺胺二甲基嘧啶的檢測(cè)色譜柱：ODS C18(5 μm)250mm×4.6 mm；柱溫 40℃；流動(dòng)相：乙腈﹕ 水﹕冰乙酸=20﹕80﹕0.5；流速 1.0mL/min；紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)為 272 nm；進(jìn)樣量 20μL；其它具體參考 GB 29694-2013《動(dòng)物性食品中 13 種磺胺類藥物多殘留的測(cè)定（高效液相色譜法）》[4]方法測(cè)定。

1.2.7 鹽酸土霉素的檢測(cè)色譜柱：O DS C18(5 μm)250mm×4.6 mm；柱 溫 40℃；流動(dòng)相：乙 腈：0.01 mol/L NaH2PO4溶液（pH=2.5）=30﹕70；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為355 nm；進(jìn)樣量20μL。其它具體參考 GB/T 5009.116-2003《畜、禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量的測(cè)定（高效液相色譜法）》[5]方法測(cè)定。

2 分析與結(jié)果

2.1 四種病毒的檢測(cè)結(jié)果

4 批次樣品檢測(cè)結(jié)果分別見(jiàn)表2、表3 及圖1 至圖 6。

表2 4批次4種病毒核酸陽(yáng)性統(tǒng)計(jì)

表3 4個(gè)批次備檢樣品PCR 檢測(cè)明細(xì)

圖1 豬瘟 PCR 特異性試驗(yàn)結(jié)果

圖2 豬瘟 PCR 特異性試驗(yàn)結(jié)果

圖 3 藍(lán)耳、圓環(huán)、偽狂犬 PCR 特異性試驗(yàn)結(jié)果

圖 4 藍(lán)耳 PCR 特異性試驗(yàn)結(jié)果

圖5 圓環(huán) PCR 特異性試驗(yàn)結(jié)果

圖 6 偽狂犬 PCR 特異性試驗(yàn)結(jié)果

圖1 中樣品編號(hào)為 1A、2A、1B、2B的樣品檢出豬瘟核酸陽(yáng)性；圖2 中樣品編號(hào)為3A、4A、3B、4B、1C、2C、2D的樣品檢出豬瘟核酸陽(yáng)性；圖 3 中樣品編號(hào)為 1A、2A、1B、2B的樣品檢出藍(lán)耳核酸 陽(yáng)性；圖 4 中樣品編號(hào)為 4A、1D、1C、2C的樣品檢出藍(lán)耳核酸陽(yáng)性；圖5 中樣品編號(hào)為 4A的樣品檢 出圓環(huán)病毒核酸陽(yáng)性；圖 6 中樣品編號(hào)為 4A的樣品檢出偽狂犬核酸陽(yáng)性。

2.2 大腸桿菌MPN數(shù)與蛔蟲卵死亡率檢測(cè)結(jié)果

無(wú)害化處理池處理后，大腸桿菌 MPN 數(shù)為前處理的1.6%～5.7%，蛔蟲卵死亡率為 84%～89%；掩埋 處理后，大腸桿菌 MPN 數(shù)為前處理的6.3%～18.7%，蛔蟲卵死亡率為 83%～85%；處理機(jī)處理后，大腸 桿菌幾乎全部被滅殺，蛔蟲卵死亡率為96%～99%。

對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，因變量大腸桿菌 MPN 數(shù)：無(wú)害化處理池、掩埋、處理機(jī)與前處 理之間均存在顯著性差異（0.01＜P＜0.05），無(wú)害化處理池、掩埋、處理機(jī)之間差異不顯著（P＞0.05）； 因變量蛔蟲卵死亡率：無(wú)害化處理池、掩埋、處理機(jī)與前處理之間差異極顯著（P＜0.01），無(wú)害化處理 池與掩埋組之間差異顯著，無(wú)害化處理池、掩埋與處理機(jī)之間差異極顯著（P＜0.01）。

表4 處理前后大腸桿菌MPN數(shù)與蛔蟲卵死亡率

2.3 磺胺二甲基嘧啶和鹽酸土霉素檢測(cè)結(jié)果

2.3.1 最低檢測(cè)限磺胺二甲基嘧啶為0.05mg/kg，鹽酸土霉素為 0.15mg/kg。

2.3.2 磺胺二甲基嘧啶和鹽酸土霉素HPLC 檢測(cè)條件通過(guò) HPLC 檢測(cè)，檢測(cè)條件適合檢測(cè)磺胺二甲基 嘧啶和鹽酸土霉素，峰型良好且無(wú)重疊，證明該條件下檢測(cè)磺胺二甲基嘧啶和鹽酸土霉素含量準(zhǔn)確、可信，具有科學(xué)性，見(jiàn)圖 7，圖 8。

圖7 磺胺二甲基嘧啶色譜圖

圖8 鹽酸土霉素色譜圖

表5 處理前后磺胺二甲基嘧啶和鹽酸土霉素檢測(cè)情況

對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，因變量磺胺二甲基嘧啶（SM2）含量：前處理與處理池、掩埋、處理機(jī)處理后差異極顯著（P＜0.01）；處理池、掩埋、處理機(jī)無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。因變量鹽酸土 霉素：前處理與處理池、掩埋差異極顯著（P＜0.01），前處理與處理機(jī)無(wú)顯著性差異（P＞0.05），處理 機(jī)與處理池、掩埋差異極顯著（P＜0.01），處理池與掩埋差異不顯著（P＞0.05）。

3 結(jié)論與討論

（1）無(wú)害化處理池、掩埋和處理機(jī)作為病害生豬及其產(chǎn)品無(wú)害化處理模式，各有其優(yōu)缺點(diǎn)；無(wú)害化處理池是利用動(dòng)物組織中微生物的自然分解能力對(duì)組織進(jìn)行分解的處理方式，操 作簡(jiǎn)單，適 用范圍較廣，但是建設(shè)地點(diǎn)難找，前期成本較高，處理周期長(zhǎng)，容易滿載，存在隱患；掩埋作為一種常用的無(wú)害化 處理模式，它的運(yùn)行成本較低，操作方便，但是地點(diǎn)難找，處理不徹底，處理不當(dāng)時(shí)容易造成二次污 染；處理機(jī)是物理與生物降解相結(jié)合的方法，是利用微生物強(qiáng)大地分解轉(zhuǎn)化有機(jī)物的能力，將組織變 成有機(jī)肥料的過(guò)程，實(shí)現(xiàn)變廢為寶和資源的再利用[6-14]。其中畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)有機(jī)廢棄物處理機(jī)添加耐熱 微生物，可將尸體作為氮源和碳源，加速微生物繁殖，加快尸體有機(jī)物分解，處理速度快、環(huán)保無(wú)污 染、收益高[8-9]。

（2）處理機(jī)處理后的樣品大腸桿菌 MPN 數(shù)和蛔蟲卵死亡率均符合生物有機(jī)肥中糞大腸桿菌≤100個(gè)/g，蛔蟲卵死亡率≥95%的標(biāo)準(zhǔn)，可用作有機(jī)肥使用，增加收益，在徹底處理病害生豬及其產(chǎn)品的同時(shí)，生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)有機(jī)肥料，實(shí)現(xiàn)變廢為寶和資源的再利用。

（3）從處理結(jié)果看，3 種處理模式對(duì)大腸桿菌的滅殺作用與前處理后比較均有顯著性差異，但是，處理機(jī)只用了一天，掩埋和無(wú)害化處理池需要 1個(gè)月，且從數(shù)據(jù)上看處理機(jī)的處理效果也是優(yōu)于無(wú)害化 處理池和掩埋；對(duì)蛔蟲卵的滅殺作用，無(wú)害化處理機(jī)的效果更是明顯，與掩埋組和無(wú)害化處理池均有極 顯著性差異；處 理機(jī)利用耐熱微生物最大化的分解動(dòng)物組織并利用85℃高溫對(duì)大腸桿菌和蛔蟲卵進(jìn)行滅 殺，故效果比無(wú)害化處理池和掩埋好。

（4）不同處理模式對(duì)磺胺二甲基嘧啶和鹽酸土霉素的降解效果，根據(jù)抗生素不同有明顯差異。三種 處理模式對(duì)磺胺二甲基嘧啶降解效果明顯，但是差異不顯著。而三種處理方法降解鹽酸土霉素的效果有明顯差異，處理機(jī)與處理池、掩埋差異極顯著。無(wú)害化處理池和掩埋降解效果非常好，處理機(jī)降解效果 不明顯。范菲菲等[15]研 究表明土霉素類在土壤中存在降解（生物降解、非生物降解）、吸附、遷移等行 為，可見(jiàn)土霉素類在土壤中能快速降解或被吸附。病害生豬及其產(chǎn)品經(jīng)過(guò)畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)有機(jī)廢棄物處理機(jī) 處理后的產(chǎn)品，藥物殘留仍然存在，不能作為肉骨粉出售，作為有機(jī)肥返田是安全可行的。

（5）本 試驗(yàn)通過(guò)掩埋、無(wú) 害化處理池和畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)有機(jī)廢棄物處理機(jī)等 3種無(wú)害化處理模式對(duì)病害 生豬及其產(chǎn)品進(jìn)行處理比較，研究處理前后4 種生豬常見(jiàn)病毒的變化，發(fā)現(xiàn)病害生豬及其產(chǎn)品經(jīng) 30d掩 埋和處理池處理后，還能檢出繁殖與呼吸綜合征病毒和豬瘟病毒核酸陽(yáng)性，說(shuō)明掩埋和無(wú)害化處理池處 理方式仍然存在生物安全隱患，可造成嚴(yán)重的二次污染。而 經(jīng)畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)有機(jī)廢棄物處理機(jī) 24h處理后，4 種生豬常見(jiàn)病毒病檢測(cè)都為核酸陰性。

（6）綜合比較掩埋、無(wú)害化處理池和畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)有機(jī)廢棄物處理機(jī)等三種無(wú)害化處理模式，掩埋雖 然操作方便，但掩埋點(diǎn)難找、處理周期長(zhǎng)、人工費(fèi)用大、生物安全水平低，不僅造成資源浪費(fèi)還會(huì)帶來(lái) 污染隱患；無(wú)害化處理池一度成為病害動(dòng)物及其產(chǎn)品無(wú)害化處理的主要模式，但建設(shè)點(diǎn)難找、費(fèi)用比較 高、需專人管理、容易滿載，同時(shí)存在污染地下水隱患；畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)有機(jī)廢棄物處理機(jī)，操作方便，周 期較短，處理徹底，同時(shí)生產(chǎn)出高檔有機(jī)肥，實(shí)現(xiàn)廢棄物的安全資源化利用，符合環(huán)境保護(hù)與資源再生的理念，是病死畜禽無(wú)害化處理的主要發(fā)展方向[16-22]。

總之，病害生豬及其產(chǎn)品三種無(wú)害化處理模式，對(duì)大腸桿菌、蛔蟲卵和病毒均有滅殺作用，對(duì)抗生 素有降解效果，但是處理機(jī)對(duì)病毒、細(xì)菌、蛔蟲卵的滅殺效果最好，對(duì)環(huán)境的污染也最小，實(shí)現(xiàn)廢棄物的無(wú)害化處理與資源化利用。

[1]中化化工標(biāo)準(zhǔn)化研究所.GB/T 6679-2003固體化工產(chǎn)品采樣通則[S].中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.

[2]農(nóng)業(yè)部微生物物肥料質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢測(cè)中心.GB/T 19524.1-2004 肥料中糞大腸菌群的測(cè)定[S].中華人民共和國(guó)國(guó)家 質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.

[3]農(nóng)業(yè)部微生物物肥料質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢測(cè)中心.GB/T 19524.2-2004 肥料中蛔蟲卵死亡率的測(cè)定[S].中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.

[4]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.GB-29694-2013動(dòng)物性食品中13種磺胺類藥物多殘留的測(cè)定（高效液相色譜法）[S].

[5]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB-5009.116-2003畜、禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量的測(cè)定（高效液相色譜法）[S].

[6]畜禽養(yǎng)殖主推技術(shù)專欄.病死畜禽無(wú)害化處理主推技術(shù)[J].中國(guó)畜牧業(yè),2013,24(2):48-51.

[7]林長(zhǎng)光,邱章泉,江宵兵.借鑒臺(tái)灣經(jīng)驗(yàn)推進(jìn)福建省病死畜禽無(wú)害化處理的政策建議[J].福建畜牧獸醫(yī),2009,31(3):23-25.

[8]徐百萬(wàn),李秀峰,陳國(guó)勝,等.GB 16548-2006 病害動(dòng)物和病害動(dòng)物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2006.

[9]林維宣.各國(guó)食品中農(nóng)藥獸藥殘留量規(guī)定[M].大連:大連海事大學(xué)出版社,2002:1298,1330.

[10]王曼霞,林黎明,劉心同等.高效液相色譜法測(cè)定動(dòng)物組織中 8 種磺胺類藥物殘留量[J].化學(xué)分析計(jì)量,2004,13(2):14-16.

[11]耿志明,李鵬,陳明,等.基質(zhì)固相分散～高效液相色譜法測(cè)定魚肉中磺胺類藥物殘留[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2006,22(3):310-312.

[12]張艷,吳銀良.固相萃取～高效液相色譜法測(cè)定動(dòng)物肉組織中磺胺類藥物的殘留[J].色譜,2005,23(6):636-638.

[13]Thompson T S,Noot D K.Determination of sulfonamides in honey by liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Analytica Chimica Acta,2005,551:168-176.

[14]柏紹蘭,包麗仙,解佳薇.病害動(dòng)物及產(chǎn)品無(wú)害化處理現(xiàn)狀與對(duì)策[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘,2015(4):26,45.

[15]范菲菲,朱健等.獸藥土霉素在土壤環(huán)境中的行為[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2013,49(8):58-59.

[16]黃曉蓉,鄭晶,吳謙等.食品中多種抗生素殘留的微生物篩檢方法研究[J].食品科學(xué),2007,28(8):418.

[17]習(xí)佳林,董紅敏,朱志平等.死畜禽堆肥化處理研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào),2010,12(2):76-80.

[18]國(guó)家環(huán)?？偩?關(guān)于減免家禽業(yè)排污費(fèi)等有關(guān)問(wèn)題的通知[EB/OL].http://www.zhb.gov.cn/epi-sepa/zcfg/w3/fa2004- 43.htm2004/3/15/2012/1219,2004.

[19]馮金水.病死豬無(wú)害化處理的模式比較[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘,2013,29（9）:94.

[20]郝鳳佩,孔曉玲,尚斌等.死畜禽無(wú)害化處理技術(shù)及設(shè)施設(shè)備研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào),2014.

[21]Sander J E,Warbingfton M C,Myers L M.Selected methods of animal carcass disposal[J].J Am Veteri Med Assoc,2002,220(7):1003-1005.

[22]De Rouchey J M,Harner J P,Murphy J P.Catastrophic mortality composting:Is it safe and effective[J]J.Appl Poulrty Res,2005,14(2):414-416.