• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    桂枝芍藥知母湯對CIA大鼠關(guān)節(jié)炎的作用及其機制研究

    2015-11-12 03:58:44胡雨峰俞晶華奚飛飛
    江蘇中醫(yī)藥 2015年11期
    關(guān)鍵詞:知母滑膜空白對照

    胡雨峰 俞晶華 奚飛飛

    (南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇南京 210023)

    桂枝芍藥知母湯對CIA大鼠關(guān)節(jié)炎的作用及其機制研究

    胡雨峰 俞晶華 奚飛飛

    (南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇南京 210023)

    目的:研究桂枝芍藥知母湯對CIA模型大鼠關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)的治療作用及其機制。方法:建立Ⅱ型膠原誘導(dǎo)(CIA)動物模型,隨機分為模型組、雷公藤多苷片組和桂枝芍藥知母湯高、中、低劑量組,另取10只正常大鼠作為空白對照組,分別給藥后觀察各組大鼠關(guān)節(jié)評分和腫脹度、病理改變評分,并比較各組大鼠滑膜上清液中IL-1、IL-6及IL-17的表達。結(jié)果:模型組大鼠關(guān)節(jié)評分、左右足體積、造模足關(guān)節(jié)腫脹度、踝關(guān)節(jié)病理改變評分均明顯高于空白對照組;治療16d后,桂枝芍藥知母湯各劑量組大鼠上述指標(biāo)均明顯低于模型組(P<0.01)。模型組大鼠滑膜上清液中IL-1、IL-6及IL-17的表達均明顯高于空白對照組(P<0.01),治療后桂枝芍藥知母湯中、高劑量組大鼠上述指標(biāo)明顯低于模型組(P<0.01或P<0.05)。結(jié)論:桂枝芍藥知母湯可通過調(diào)節(jié)炎性細胞因子的表達而明顯緩解CIA模型動物的各種炎癥反應(yīng)。

    桂枝芍藥知母湯 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 關(guān)節(jié)評分 病理學(xué) SD大鼠 實驗研究

    桂枝芍藥知母湯(下簡稱桂芍知母湯)出自漢·張仲景《金匱要略·中風(fēng)歷節(jié)病脈證并治篇》,具有祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)散寒、滋陰清熱之功效,主要用于治療風(fēng)寒濕痹日久,漸次化熱傷陰之證,至今仍為臨床上的常用方、基礎(chǔ)方,尤多被用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis,RA)等以關(guān)節(jié)病變?yōu)橹鞯牟“Y。本研究在建立Ⅱ型膠原誘導(dǎo)(CollagenⅡ-induced arthritis,CIA)動物模型的基礎(chǔ)上,觀察桂芍知母湯對模型動物關(guān)節(jié)炎癥的治療作用及其對血清白介素(Interleukin,IL)-1、IL-6及IL-17表達的影響,為其治療RA的作用及機制進行闡釋和解讀。

    1 實驗材料

    1.1 實驗動物SD大鼠60只,雌雄各半,體重(200g±20)g,由上海斯萊克實驗動物責(zé)任有限公司提供,生產(chǎn)許可證:SCXK(滬)2007-0005,實驗動物使用許可證:SYXK(蘇)2007-0030。

    1.2 實驗藥物桂芍知母湯,藥物組成:桂枝12g,白芍9g,甘草6g,麻黃12g,生姜15g,白術(shù)15g,知母12g,防風(fēng)12g,炮附子10g。藥物均購自南京中醫(yī)藥大學(xué)百草堂中醫(yī)門診部,由南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院制劑室制備成濃度分別為1.2、0.6及0.3g/mL的水煎劑。雷公藤多苷片,10mg/片,由浙江得恩德制藥有限公司生產(chǎn),批號:1108101,研缽研碎后加蒸餾水制成濃度為0.001g/mL的混懸液。

    1.3 實驗試劑牛Ⅱ型膠原,美國Sigma,批號:A7906;完全弗氏佐劑(Complete Frund's Adjuvant,CFA),美國Sigma,批號:F5881;IL-1、IL-6及IL-17 ELISA試劑盒,上海韻涵生物科技公司,批號20111201B;焦碳酸二乙酯(DEPC),美國Sigma。

    1.4 實驗儀器和設(shè)備YLS-7B型大鼠趾體積測量儀,山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站;SZ61TRC-ILST型解剖鏡,日本Olympus;ROTOFIX 32A型離心機,德國Hettich;-80℃低溫冰箱,日本Sanyo;Multiskan MK3型全自動酶標(biāo)儀,芬蘭Labsystems。

    2 實驗方法

    2.1 建立CIA模型將牛Ⅱ型天然膠原溶解于0.1mol/L醋酸溶液中,制成4mg/mL的溶液,并置于4℃冰箱過夜。實驗當(dāng)日將含弗氏完全佐劑與CⅡ膠原等體積于冰上充分震蕩乳化制成CⅡ乳劑。用微量注射器于大鼠左后足跖皮內(nèi)、頸、背、腹、尾根等5個部位分別注射CⅡ乳劑0.1mL,總量0.5mL,并于14d后用同等劑量免疫原在相同部位加強免疫一次。通過定期測定各組大鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)(ArthriticIndex,AI)及檢測大鼠雙后足的腫脹度判斷模型建立是否成功。

    2.2 分組與給藥取造模成功的大鼠50只,隨機分為5組,每組10只。另取10只正常大鼠作為空白對照組。給藥方案:空白對照組與模型組,給予等容量蒸餾水;桂芍知母湯高、中、低劑量組,分別給予桂芍知母湯水煎劑18g生藥/(kg·d)(濃度1.2g/mL)、9g生藥/(kg·d)(濃度0.6g/mL)以及4.5g生藥/(kg·d)(濃度0.3g/mL);雷公藤多苷片組,給予雷公藤多苷片混懸液0.015g/(kg·d)。以上各組均予灌胃給藥,給藥體積均為15mL/(kg·d)。第二次加強免疫后即日開始給藥,連續(xù)給藥16d。

    2.3 關(guān)節(jié)評分、雙足體積測量及腫脹度計算關(guān)節(jié)評分采用0—4級關(guān)節(jié)評分法[1]。0分:腳爪正?;驘o炎癥;1分:趾關(guān)節(jié)腫脹或輕度發(fā)紅;2分:趾關(guān)節(jié)和足跖發(fā)紅并且腫脹;3分:踝關(guān)節(jié)以下的整個腳爪全部發(fā)紅并且腫脹;4分:踝關(guān)節(jié)嚴重發(fā)紅且腫脹,關(guān)節(jié)有變形跡象。以第二次加強免疫當(dāng)天為d0,此后每隔4d用大鼠趾體積測量儀測量大鼠左右足跖體積,檢測并記錄關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分,以2個腳爪的評分之和作為每個大鼠的關(guān)節(jié)評分,并按公示計算出其關(guān)節(jié)腫脹度。

    腫脹度ER(%)=(Vt-V0)/ V0×100%(V0為造模前體積,Vt為檢測時體積)

    2.4 樣本提取及處理連續(xù)給藥16d后使用脫頸法處死大鼠。將大鼠仰臥位固定,70%酒精消毒,大腿外旋,從內(nèi)側(cè)切開并剝離皮膚,沿膝關(guān)節(jié)正中線縱向切開直至暴露出以膝關(guān)節(jié)為中心的約3cm×3cm大小的區(qū)域,用齒鑷提起髕骨。沿髕骨上沿約0.3cm×0.4cm處向下切割直至股骨,再沿髕骨向下分離至脛骨,此時即可打開膝關(guān)節(jié)腔,由髕骨下極向上延續(xù)的一層平滑光亮且呈淡黃色的軟組織即為滑膜。在解剖鏡下以眼科剪小心分離滑膜,將部分組織分組加入適量生理鹽水搗碎,3000r/min離心10min后取上清液凍于-80℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    2.5 病理組織學(xué)檢查及評分處死大鼠后,將大鼠的踝關(guān)節(jié)用10%福爾馬林固定,經(jīng)過脫鈣、脫水、常規(guī)石蠟包埋、切片(厚度約4~5μm)和常規(guī)HE染色后,由病理專業(yè)人員檢查閱片。具體觀察指征包括關(guān)節(jié)炎癥表現(xiàn)、關(guān)節(jié)滑膜病變、關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞等,主要檢查指標(biāo)包含了炎細胞浸潤、血管充血、滑膜腫脹、組織壞死等病理變化,最終根據(jù)病變輕重程度進行評分,按正常和輕、中、重度異常分別計0~3分。

    2.6 滑膜上清液IL-1、IL-6及IL-17含量檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),按照試劑盒使用說明測定組織勻漿上清液中IL-1、IL-6及IL-17之含量。

    3 實驗結(jié)果

    3.1 各組大鼠治療各時期關(guān)節(jié)炎評分比較見表1。

    3.2 各組大鼠治療各時期左右足關(guān)節(jié)體積比較見表2。

    3.3 各組大鼠左足(造模足)治療各時期關(guān)節(jié)腫脹度比較見表3。

    表1 各組大鼠治療各時期關(guān)節(jié)評分(±s)分

    表1 各組大鼠治療各時期關(guān)節(jié)評分(±s)分

    注:與同期空白對照組比較,▲▲P<0.01;與同期模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

    表2 各組大鼠治療各時期左、右足體積比較(±s)mL

    表2 各組大鼠治療各時期左、右足體積比較(±s)mL

    注:與同期空白對照組比較,▲P<0.01,▲▲P<0.01;與同期模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

    3.4 各組大鼠治療后踝關(guān)節(jié)病理評分比較見表4

    3.5 各組大鼠治療后滑膜組織上清液IL-1、IL-6及IL-17表達比較見表5。

    4 討論

    RA是一種以關(guān)節(jié)和關(guān)節(jié)周圍組織的非感染性炎癥為主的異質(zhì)性、系統(tǒng)性、慢性自身免疫性疾病?,F(xiàn)代中醫(yī)學(xué)者一般將RA歸屬于“痹證”范疇,但因其病情頑固,遷延難愈,且疼痛遍歷周身多個關(guān)節(jié)的特點,又有別于一般的痹證,是痹證中的特殊類型,尤其與《金匱要略·中風(fēng)歷節(jié)病脈證并治篇》中提及的“歷節(jié)”相似,所謂:“病歷節(jié),不可屈伸”,“諸肢節(jié)疼痛,身體尫羸,腳腫如脫”。而桂芍知母湯正是醫(yī)圣張仲景為風(fēng)濕歷節(jié)所設(shè),全方僅用藥物九味,卻配伍精妙,藥少效宏,具有寒溫并用、溫散而不傷陰、養(yǎng)陰而不礙陽等特點,是當(dāng)代醫(yī)家用以治療RA的常用方、基礎(chǔ)方。

    RA的主要表現(xiàn)包括雙手、腕和足關(guān)節(jié)的對稱性多關(guān)節(jié)炎,亦可累及膝、髖等關(guān)節(jié),并可伴發(fā)諸多關(guān)節(jié)外表現(xiàn)。在其關(guān)節(jié)表現(xiàn)中,腫脹和變形是較為典型的癥狀。本研究所采用的CIA模型所引發(fā)的炎癥反應(yīng)為多發(fā)性外周關(guān)節(jié)炎(以雙足,踝、膝關(guān)節(jié)為主),關(guān)節(jié)局部可紅腫和畸形,病理變化為增生性滑膜炎,關(guān)節(jié)軟骨破壞以及骨侵蝕,血管翳形成和炎性細胞浸潤,其臨床表現(xiàn)、實驗室指標(biāo)與免疫及病理學(xué)改變方面均接近人類RA,故在CIA大鼠模型的基礎(chǔ)上通過藥物干預(yù)并定期觀察大鼠關(guān)節(jié)評分變化,雙足體積、腫脹度趨勢及膝關(guān)節(jié)病理改變可了解藥物對于關(guān)節(jié)炎癥的治療作用。

    炎性細胞因子的異常表達在RA的炎癥反應(yīng)中起到了重要的作用,被認為是RA炎癥及關(guān)節(jié)損傷的重要介質(zhì)[2]。這其中,IL-1、IL-6及IL-17的表達與RA的發(fā)病均有密切關(guān)聯(lián)。Arend[3]發(fā)現(xiàn),無論是在動物模型還是患者體內(nèi),IL-1受體都是重要的抗炎因子,在動物模型中發(fā)現(xiàn),IL-1受體缺乏使得癥狀得以加重。有實驗證明,滑膜液中的IL-6含量可反映局部前炎癥變化,尤其是破壞性的病變[4]。Veldhoen等[5]報道,IL-6和轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)發(fā)揮協(xié)同作用時,可誘導(dǎo)Th17細胞合成并分泌IL-17,而IL-17又能刺激滑膜成纖維細胞分泌IL-6,造成炎癥的進展。而Chabaud等[6]發(fā)現(xiàn),IL-17能通過滑膜細胞使得基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)的表達水平升高5倍,而在抗IL-17抗體作用下,MMP-1的表達水平降低50%,顯示了IL-17在RA損傷中的作用。IL-17致炎的主要途徑為促進T細胞激活并刺激上皮細胞、成纖維細胞產(chǎn)生大量炎性細胞因子如IL-6、動脈粥樣硬化和細胞間黏附分子-1(ICAM-1)等而引起炎癥[7]。

    表3 各組大鼠治療各時期左足(造模足)關(guān)節(jié)腫脹度比較(±s)

    表3 各組大鼠治療各時期左足(造模足)關(guān)節(jié)腫脹度比較(±s)

    注:與同期模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

    d16組別關(guān)節(jié)腫脹度(%)動物數(shù)(只)d0d4d8d12給藥劑量(g·kg-1·d-1)10-桂芍知母湯高劑量組44.2±19.9*41.7±20.7**35.9±16.5**21.7±12.5**48.9±21.4模型組69.2±32.870.1±32.579.4±32.689.6±29.795.8±34.9 1018桂芍知母湯中劑量組10953.2±19.243.2±17.0*35.9±14.5**28.1±11.4**20.7±08.5**桂芍知母湯低劑量組104.557.5±16.953.4±13.046.8±14.9*36.0±14.4**22.6±11.5**雷公藤多苷片組100.01561.5±18.052.9±16.947.2±17.1*42.4±16.3**27.0±13.1**

    表4 給藥后各組大鼠踝關(guān)節(jié)病理改變評分統(tǒng)計表(±s)

    表4 給藥后各組大鼠踝關(guān)節(jié)病理改變評分統(tǒng)計表(±s)

    注:與模型組比較,**P<0.01。

    組別動物數(shù)(只)給藥劑量(g·kg-1·d-1)空白對照組病理評分10--模型組10-13.5±1.581桂芍知母湯高劑量組10181.3±2.767**桂芍知母湯中劑量組1093.2±2.820**桂芍知母湯低劑量組104.55.3±3.164**雷公藤多苷片組100.0150.8±1.687**

    表5 各組大鼠治療后滑膜組織上清液IL-1、IL-6、IL-17含量比較(±s)pg/mL

    表5 各組大鼠治療后滑膜組織上清液IL-1、IL-6、IL-17含量比較(±s)pg/mL

    注:與空白對照組比較,▲▲P<0.01;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

    組別動物數(shù)(只)空白對照組給藥劑量(g·kg-1·d-1)10 IL-1IL-6 -IL-17 37.772±15.75586.978±18.2956.353±2.505模型組-88.447±49.774▲▲119.224±24.585▲▲20.902±9.134▲▲10桂芍知母湯高劑量組101848.498±7.433*90.755±21.542*10.093±6.172**桂芍知母湯中劑量組10950.523±10.053*85.882±22.451**10.066±6.184**桂芍知母湯低劑量組104.569.184±33.720103.954±23.50116.112±9.984雷公藤多苷片組100.01539.633±6.766*76.257±2.974**11.785±7.342*

    本研究我們發(fā)現(xiàn),自d0起,模型組的關(guān)節(jié)評分、左右足體積及腫脹度一直保持上升趨勢,而桂芍知母湯各劑量組相關(guān)指標(biāo)則持續(xù)下降,直至d16;同時在病理評分方面,桂芍知母湯各劑量組均遠低于模型組,顯示桂芍知母湯可緩解模型動物關(guān)節(jié)腫脹、變形等癥狀并改善關(guān)節(jié)病理變化,對模型動物的關(guān)節(jié)炎癥有較為明顯的治療效果;而桂芍知母湯高、中劑量可明顯減少模型動物滑膜上清液中IL-1、IL-6及IL-17的含量,提示桂芍知母湯可通過調(diào)節(jié)IL-1、IL-6及IL-17的表達而起到緩解關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)的作用。

    [1]張均田.現(xiàn)代藥理學(xué)實驗方法.北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1998:1383

    [2]Klimiuk PA,Yang H,Goronzy JJ,et al.Production of cytokines and metalloproteinases in rheumatoid synovitis is T cell dependent.Clin Immunol,1999,163:491

    [3]ArendW.Cytokineimbalanceinhepathogenesisof rheumatoidarthritis:theroleofinterleukin1receptor antagonist.Arthritis Rhrum,2001,30:1

    [4]CarterSD,Barnes A,Gilmore WH.Canine rheumatoid arthritis and inflammatory cytokines.Vet Immunol Immunopathol,1999,69(2-4):201

    [5]Veldhoen M,Hocking RJ,Atkins CJ,et al.TGF-β in the context of an inflammatory cytokine milieu supports the enovodifferentiationofIL-17-productingTcells. Immunity,2006,24(2):179

    [6]Chabaud M,Garnero P,Dayer JM,et al.Contribution of interleukin17tosynoviummatrixdestructionin rheumatoid arthritis.Cytokine,2000,12(7):1092

    [7]Komiyama Y,Nakae S,Matauki T,et al.IL-17 plays an importantroleinthedevelopmentofexperimental autoimmune encephalomyelitis.Immunol,2006,177(1):566

    p

    R684.305

    A

    1672-397X(2015)11-0076-04

    胡雨峰(1985—),男,博士,講師,中醫(yī)內(nèi)科學(xué)專業(yè),風(fēng)濕免疫病研究方向。

    奚飛飛,博士,助理研究員。xifeifei@163.com

    2015-08-27

    編輯:吳寧

    南京中醫(yī)藥大學(xué)自然科學(xué)基金資助項目(13xzr10);南京中醫(yī)藥大學(xué)哲學(xué)社會科學(xué)基金資助項目(13xsk29);南京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)痹病學(xué)重點學(xué)科開放課題基金項目(BBXK2013104)

    猜你喜歡
    知母滑膜空白對照
    基于滑膜控制的船舶永磁同步推進電機直接轉(zhuǎn)矩控制研究
    高層建筑施工中的滑膜施工技術(shù)要點探討
    Systematic review of robust experimental models of rheumatoid arthritis for basic research
    例析陰性對照與陽性對照在高中生物實驗教學(xué)中的應(yīng)用
    ICP-MS法測定不同產(chǎn)地知母中5種重金屬
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:19:06
    知母中4種成分及對α-葡萄糖苷酶的抑制作用
    中成藥(2018年5期)2018-06-06 03:11:58
    過表達H3K9me3去甲基化酶對豬克隆胚胎體外發(fā)育效率的影響(內(nèi)文第 96 ~ 101 頁)圖版
    知母多糖治療糖尿病大鼠
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:18
    Identifying vital edges in Chinese air route network via memetic algorithm
    滑膜肉瘤的研究進展
    又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲中文av在线| 夜夜爽夜夜爽视频| 亚洲第一av免费看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国内精品宾馆在线| 高清欧美精品videossex| av电影中文网址| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日韩免费高清中文字幕av| 丝袜美足系列| 99热全是精品| 尾随美女入室| 亚洲精品亚洲一区二区| 黑人猛操日本美女一级片| 热re99久久国产66热| 韩国高清视频一区二区三区| 在线观看免费视频网站a站| 大陆偷拍与自拍| 只有这里有精品99| 中国国产av一级| 国产老妇伦熟女老妇高清| 三上悠亚av全集在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲精品色激情综合| 国产精品久久久久久av不卡| 18禁动态无遮挡网站| 18+在线观看网站| 人妻夜夜爽99麻豆av| 日韩制服骚丝袜av| 丝袜美足系列| 日本91视频免费播放| 精品酒店卫生间| 成人手机av| 国产精品三级大全| 97精品久久久久久久久久精品| 一个人免费看片子| 永久网站在线| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲成人手机| av线在线观看网站| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲熟女精品中文字幕| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 日韩中字成人| 18禁观看日本| 日韩亚洲欧美综合| 在现免费观看毛片| 日本欧美国产在线视频| 久久综合国产亚洲精品| 人人澡人人妻人| 在线观看三级黄色| 日本黄色片子视频| 国产精品熟女久久久久浪| 嫩草影院入口| 大片电影免费在线观看免费| 国产一区亚洲一区在线观看| 一级毛片 在线播放| 亚洲精品色激情综合| 一级a做视频免费观看| 9色porny在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| √禁漫天堂资源中文www| 9色porny在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产av国产精品国产| 观看美女的网站| 久久久国产一区二区| 成人影院久久| 久久韩国三级中文字幕| 久久国内精品自在自线图片| 一边摸一边做爽爽视频免费| 中文字幕免费在线视频6| 国产一区有黄有色的免费视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 黄色一级大片看看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| a级毛片在线看网站| 成人黄色视频免费在线看| 草草在线视频免费看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 亚洲国产精品一区二区三区在线| 成人毛片a级毛片在线播放| freevideosex欧美| freevideosex欧美| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 婷婷色综合大香蕉| 国产精品无大码| 午夜av观看不卡| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 777米奇影视久久| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 久久久国产精品麻豆| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲色图综合在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 午夜影院在线不卡| 岛国毛片在线播放| 大香蕉久久成人网| 一级片'在线观看视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 秋霞在线观看毛片| 久久精品国产亚洲av天美| 热99久久久久精品小说推荐| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产 一区精品| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产黄片视频在线免费观看| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲人成网站在线观看播放| 成人午夜精彩视频在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 国产日韩欧美在线精品| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| av女优亚洲男人天堂| 少妇人妻精品综合一区二区| 亚洲人与动物交配视频| 久久精品国产亚洲av天美| 国产精品久久久久久久久免| 欧美bdsm另类| 亚洲精品亚洲一区二区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 综合色丁香网| 精品卡一卡二卡四卡免费| 丝袜在线中文字幕| 十八禁高潮呻吟视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 制服丝袜香蕉在线| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲情色 制服丝袜| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久国内精品自在自线图片| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 高清在线视频一区二区三区| 国产成人精品一,二区| 人妻一区二区av| 日本黄大片高清| 少妇丰满av| 免费av中文字幕在线| av不卡在线播放| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲精品一二三| 精品少妇黑人巨大在线播放| 免费观看的影片在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 韩国av在线不卡| 亚洲国产精品国产精品| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲av不卡在线观看| 伊人久久国产一区二区| 青春草视频在线免费观看| 午夜免费观看性视频| 波野结衣二区三区在线| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久久午夜欧美精品| 国产欧美亚洲国产| 看十八女毛片水多多多| av播播在线观看一区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲内射少妇av| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产69精品久久久久777片| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 少妇的逼水好多| 三级国产精品欧美在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 国产高清有码在线观看视频| 美女国产高潮福利片在线看| 十八禁高潮呻吟视频| 国产欧美亚洲国产| 天堂8中文在线网| 十八禁高潮呻吟视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 成人漫画全彩无遮挡| 久久国内精品自在自线图片| 国产精品久久久久久久久免| 国产av一区二区精品久久| 伊人亚洲综合成人网| 国产精品无大码| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产精品成人在线| 久久ye,这里只有精品| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 久久精品人人爽人人爽视色| 又大又黄又爽视频免费| 最近中文字幕高清免费大全6| 日本黄色片子视频| 热99久久久久精品小说推荐| 欧美日韩成人在线一区二区| 五月玫瑰六月丁香| 国产成人aa在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 满18在线观看网站| 精品午夜福利在线看| 嫩草影院入口| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 99国产精品免费福利视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 男女高潮啪啪啪动态图| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 精品人妻在线不人妻| 亚洲精品自拍成人| 久久久久久久精品精品| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产成人精品无人区| 中国三级夫妇交换| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 秋霞在线观看毛片| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲经典国产精华液单| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 人人澡人人妻人| 国产乱来视频区| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 一个人看视频在线观看www免费| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 日韩制服骚丝袜av| 中国国产av一级| 国产老妇伦熟女老妇高清| 人妻人人澡人人爽人人| 晚上一个人看的免费电影| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| .国产精品久久| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 精品久久久久久久久av| 少妇丰满av| 3wmmmm亚洲av在线观看| 免费观看性生交大片5| 久久久精品区二区三区| 秋霞伦理黄片| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲av成人精品一二三区| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲精品第二区| 久久狼人影院| 日本-黄色视频高清免费观看| 日本wwww免费看| 美女福利国产在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲色图综合在线观看| 日韩大片免费观看网站| 免费观看的影片在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产淫语在线视频| 高清视频免费观看一区二区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 欧美另类一区| 国产精品一区www在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 蜜臀久久99精品久久宅男| 男女高潮啪啪啪动态图| 最近的中文字幕免费完整| 免费人成在线观看视频色| 91久久精品电影网| 精品一区在线观看国产| 黄色视频在线播放观看不卡| 久热这里只有精品99| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 97在线视频观看| 国产日韩欧美视频二区| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美bdsm另类| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产乱人偷精品视频| 满18在线观看网站| 国产精品欧美亚洲77777| 一级黄片播放器| 国产成人午夜福利电影在线观看| 一区二区三区精品91| 久久97久久精品| 乱人伦中国视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 极品人妻少妇av视频| 日本欧美国产在线视频| 免费看不卡的av| av在线观看视频网站免费| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 国产淫语在线视频| 在线观看免费日韩欧美大片 | 麻豆成人av视频| 亚洲av成人精品一二三区| 老司机亚洲免费影院| 日韩在线高清观看一区二区三区| 26uuu在线亚洲综合色| 国产av国产精品国产| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲精品日本国产第一区| 久久久精品免费免费高清| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 伦理电影免费视频| 99热这里只有是精品在线观看| 在线播放无遮挡| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 丰满迷人的少妇在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 岛国毛片在线播放| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 人妻人人澡人人爽人人| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲美女黄色视频免费看| 观看美女的网站| 美女视频免费永久观看网站| 成人免费观看视频高清| 久久久久久伊人网av| 男人爽女人下面视频在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产精品无大码| 国产免费一区二区三区四区乱码| 一级爰片在线观看| 18在线观看网站| 高清不卡的av网站| 精品亚洲成国产av| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 青青草视频在线视频观看| 国产深夜福利视频在线观看| 中文天堂在线官网| 观看美女的网站| 性色av一级| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 久久久精品94久久精品| 国产精品人妻久久久影院| 久久午夜福利片| 免费少妇av软件| 欧美精品一区二区大全| 少妇的逼好多水| 午夜激情av网站| 久久av网站| 少妇丰满av| 一级毛片我不卡| 一级毛片aaaaaa免费看小| 91aial.com中文字幕在线观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 99热国产这里只有精品6| 国产精品熟女久久久久浪| 伦精品一区二区三区| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久亚洲国产成人精品v| 欧美bdsm另类| 国产精品久久久久久精品电影小说| 尾随美女入室| 美女国产视频在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | videosex国产| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 中文字幕制服av| 精品人妻偷拍中文字幕| 人妻少妇偷人精品九色| 一级,二级,三级黄色视频| 人妻少妇偷人精品九色| 伊人亚洲综合成人网| 曰老女人黄片| 伊人亚洲综合成人网| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产精品久久久久久精品电影小说| 在线看a的网站| av不卡在线播放| 久久人妻熟女aⅴ| 最后的刺客免费高清国语| 国产成人精品在线电影| 99久久综合免费| av有码第一页| 精品少妇内射三级| 老司机影院毛片| 卡戴珊不雅视频在线播放| 女性生殖器流出的白浆| 国模一区二区三区四区视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 性色avwww在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 午夜91福利影院| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| av卡一久久| 女人久久www免费人成看片| av国产精品久久久久影院| 看免费成人av毛片| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲人成77777在线视频| av卡一久久| 亚洲成色77777| 亚洲精品色激情综合| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 国产成人a∨麻豆精品| 看十八女毛片水多多多| 一区二区三区免费毛片| 永久网站在线| 国产精品久久久久久精品电影小说| 中文天堂在线官网| 人妻系列 视频| av在线观看视频网站免费| 久久精品久久久久久久性| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美丝袜亚洲另类| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲图色成人| 黑人高潮一二区| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 精品一区二区三区视频在线| 日韩av不卡免费在线播放| 韩国av在线不卡| 欧美精品一区二区免费开放| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 午夜激情久久久久久久| 国产午夜精品一二区理论片| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 99re6热这里在线精品视频| 精品少妇久久久久久888优播| 九草在线视频观看| av电影中文网址| 亚洲成人av在线免费| 视频中文字幕在线观看| 亚洲精品第二区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 色网站视频免费| 中文字幕最新亚洲高清| 边亲边吃奶的免费视频| 久久99热这里只频精品6学生| 精品视频人人做人人爽| 极品人妻少妇av视频| 国产精品久久久久久精品古装| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲精品国产av成人精品| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲国产精品一区三区| 99久久精品一区二区三区| 国产精品人妻久久久影院| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲综合色惰| 自线自在国产av| 免费高清在线观看视频在线观看| 久久久久网色| 国产av码专区亚洲av| 亚洲成人手机| 久久精品国产亚洲av涩爱| 十分钟在线观看高清视频www| 人人澡人人妻人| 午夜视频国产福利| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 久久99热这里只频精品6学生| 91精品三级在线观看| 成人漫画全彩无遮挡| 人妻 亚洲 视频| 女人精品久久久久毛片| 亚洲图色成人| 国产熟女午夜一区二区三区 | 久久毛片免费看一区二区三区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 中文字幕免费在线视频6| 日本午夜av视频| 欧美 日韩 精品 国产| 国产精品 国内视频| 99久久精品国产国产毛片| 看十八女毛片水多多多| 欧美性感艳星| 成人午夜精彩视频在线观看| 精品久久蜜臀av无| 丝袜在线中文字幕| 午夜日本视频在线| 建设人人有责人人尽责人人享有的| a级毛片在线看网站| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 伦理电影大哥的女人| 搡老乐熟女国产| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 青春草国产在线视频| 国产精品一国产av| 久久久精品区二区三区| 国产精品偷伦视频观看了| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 成人手机av| 飞空精品影院首页| 久久精品国产自在天天线| 国产精品蜜桃在线观看| 国产av码专区亚洲av| 亚洲国产最新在线播放| 久久人妻熟女aⅴ| 成年人午夜在线观看视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 午夜91福利影院| 国产男女超爽视频在线观看| av卡一久久| 欧美激情国产日韩精品一区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 18+在线观看网站| 青春草亚洲视频在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 一级二级三级毛片免费看| 中国美白少妇内射xxxbb| 91久久精品国产一区二区三区| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲美女视频黄频| 亚洲国产成人一精品久久久| 日韩精品有码人妻一区| 久久精品国产亚洲av天美| 精品久久久久久久久亚洲| 韩国高清视频一区二区三区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久久午夜欧美精品| 亚洲精品成人av观看孕妇| 日韩人妻高清精品专区| av女优亚洲男人天堂| 亚洲国产精品一区二区三区在线| av电影中文网址| 久久国产精品大桥未久av| 精品国产国语对白av| 九九在线视频观看精品| 久久国产亚洲av麻豆专区| 少妇被粗大的猛进出69影院 | freevideosex欧美| 国产乱来视频区| 日本与韩国留学比较| 简卡轻食公司| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲国产精品成人久久小说| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲成人手机| 夫妻性生交免费视频一级片| 精品少妇内射三级| 大香蕉久久网| 插阴视频在线观看视频| 伊人亚洲综合成人网| a级毛色黄片| 满18在线观看网站| 一级黄片播放器| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产黄色免费在线视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 最黄视频免费看| 在线观看人妻少妇| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 97超碰精品成人国产| 国产高清有码在线观看视频| 久久国产精品大桥未久av| 99久国产av精品国产电影| 男女免费视频国产| 在线免费观看不下载黄p国产| av免费观看日本| 中文字幕亚洲精品专区| 中国三级夫妇交换| 80岁老熟妇乱子伦牲交| xxxhd国产人妻xxx| 久久精品人人爽人人爽视色| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲精品国产av蜜桃| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 午夜福利视频在线观看免费| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 丁香六月天网| 亚洲av福利一区| 久久av网站| 亚洲成人手机| 三级国产精品欧美在线观看| 三级国产精品片| 最黄视频免费看| 午夜影院在线不卡| 日韩强制内射视频| 99re6热这里在线精品视频| 久久午夜福利片| 人成视频在线观看免费观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 男人操女人黄网站| 久久久久久久大尺度免费视频| 久久久久久伊人网av| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产精品女同一区二区软件| videosex国产| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲精品,欧美精品| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产成人av激情在线播放 | 69精品国产乱码久久久| 亚洲不卡免费看| 一边亲一边摸免费视频| 国产成人freesex在线| 一级毛片我不卡| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产精品久久久久久精品古装| 一区二区av电影网| 精品一区二区三卡| 亚洲情色 制服丝袜| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 一级黄片播放器| www.色视频.com| 一级毛片aaaaaa免费看小| 免费观看性生交大片5| 99国产综合亚洲精品|