轉(zhuǎn)錄因子Sox2、Oct4 在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)及臨床意義

張曉云 宋增華 趙春林 鄭潔 郭建霞 周海成

結(jié)腸癌是胃腸道較為常見的惡性腫瘤之一，臨床上能夠采用多種治療方法進(jìn)行治療，例如手術(shù)、化療等綜合治療方法，然而，其發(fā)病率和病死率仍具惡性腫瘤前列，其發(fā)病趨勢呈逐年上升趨勢，癌組織的侵襲和轉(zhuǎn)移為患者死亡的主要原因［1］。結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移的相關(guān)機(jī)制尚未完全清楚，主要認(rèn)為其與多種癌基因及腺瘤轉(zhuǎn)化為腺癌與抗癌基因平衡失調(diào)有密切的關(guān)聯(lián)，這是一個(gè)長時(shí)間、多因素和多步驟的復(fù)雜變化過程［2］。因此，對結(jié)腸癌做出早期的診斷對疾病的治療和預(yù)后有關(guān)鍵的意義，本研究針對近年來就診于我院的結(jié)腸癌患者進(jìn)行Sox2 和Oct4 兩種轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的觀察和探討，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 入選2012 年1 月至2014 年1 月就診于我院的結(jié)腸癌患者48 例作為研究觀察對象，其中男26 例，女22 例;年齡27 ～75 歲，平均年齡(58±12)歲。入選患者均經(jīng)病理組織學(xué)診斷為結(jié)腸腺癌，其中高分化組18 例，中分化組17 例，低分化組13 例。采用奧美生物技術(shù)公司提供的結(jié)腸癌組織芯片，提取入選患者結(jié)腸腺癌和臨近癌旁組織。

1.2 方法

1.2.1 試劑選擇:選用美國ABGENT 公司提供的鼠抗人Sox2 單克隆抗體，ABCAM 公司提供的鼠抗人Oct4 單克隆抗體，Signa 公司提供的鼠抗β-actin 單克隆抗體以及SP 二抗體試劑盒，同時(shí)選用HyClone 公司提供的RPMI1640 培養(yǎng)液和胚牛血清和蛋白裂解液，Pierce 公司提供的化學(xué)發(fā)光試劑盒。

1.2.2 細(xì)胞系培養(yǎng):將人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480、SW620、Lovo 和永生化結(jié)腸上皮細(xì)胞HIEC 進(jìn)行保存?zhèn)溆茫囵B(yǎng)溫度保持在37℃，在5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(RPMI1640，、胚牛血清)，實(shí)驗(yàn)細(xì)胞采用對數(shù)生長期的細(xì)胞。

1.2.3 免疫組化實(shí)驗(yàn):采用免疫組化SP 法進(jìn)行組織芯片檢測，陽性對照采用陽性肺部鱗癌組織切片，陰性對照采用小鼠血清。每張切片觀察到3 個(gè)以上高倍視野，抗原染色表達(dá)評價(jià)分別為染色強(qiáng)度和細(xì)胞數(shù)兩項(xiàng)，切片按照陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行評價(jià)，陽性細(xì)胞數(shù)為0%評分為0 分，陽性細(xì)胞＜25%評分為1 分，陽性細(xì)胞25%～50%評分為2 分，陽性細(xì)胞51%～75%評分為3 分，陽性細(xì)胞＞75%評分為4 分。陽性細(xì)胞數(shù)取各視野計(jì)數(shù)的平均數(shù)。將染色強(qiáng)度分級記錄，其中無著色為0 級，弱著色為1 級，中強(qiáng)度著色為2 級，強(qiáng)著色為3 級。組織學(xué)評分為陽性細(xì)胞評分x 染色強(qiáng)度分級，總分分級:0 分為陰性(－)，1 ～4 分為陽性(+)，5～8 分為陽性(++)，9 ～12 分為陽性(+++)，陽性表達(dá)率=陽性(++)+陽性(+++)/總數(shù)×100%。1.3 觀察指標(biāo) 觀察和研究兩種轉(zhuǎn)錄因子免疫組化情況及兩種轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用回歸分析，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化情況 兩種轉(zhuǎn)錄因子在結(jié)腸癌中均表現(xiàn)為高表達(dá)，陽性產(chǎn)物均呈棕黃色顆粒，其中Oct4 主要在腺體細(xì)胞核表達(dá)，Sox2 主要在腺體細(xì)胞漿表達(dá)，Oct4 在結(jié)腸癌中陽性表達(dá)率為81.25%，明顯高于癌旁組織50%(P ＜0.05);Sox2 在結(jié)腸癌中陽性表達(dá)率為77.08%，明顯高于癌旁組織20.83%(P ＜0.05)。見表1、2，圖1、2。

表1 Oct4 在結(jié)腸癌及癌旁組織中的表達(dá) n=48，例

圖1 Oct4 在結(jié)腸癌和癌旁組織中的表達(dá)(免疫組化×400)

表2 Sox2 在結(jié)腸癌及癌旁組織中的表達(dá) n=48，例

圖2 Sox2 在結(jié)腸癌和癌旁組織中的表達(dá)(免疫組化×400)

2.2 兩種轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的關(guān)系對Oct4 和Sox2 兩種轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)關(guān)系進(jìn)行相關(guān)性研究，Oct4 陽性表達(dá)率隨著Sox2 陽性表達(dá)率升高而升高，呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.4143，P ＜0.05)。見表3。

表3 兩種轉(zhuǎn)錄因子在結(jié)腸癌中表達(dá)的關(guān)系 例

3 討論

結(jié)腸癌是臨床常見的消化內(nèi)科惡性腫瘤之一，隨著人民生活水平的不斷提高，人們的生活方式和飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生了巨大的變化，結(jié)腸癌的發(fā)病率也逐年升高，病死率也呈現(xiàn)隨之升高的趨勢，腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤主要生物學(xué)特征，同時(shí)也是患者發(fā)生死亡的主要原因［3］。全球范圍內(nèi)每年有接近60 萬人因結(jié)腸癌發(fā)生死亡，在較發(fā)達(dá)的歐美國家，結(jié)腸癌的發(fā)病率更高，部分國家的患病率高達(dá)60/10 萬人，已經(jīng)成為惡性腫瘤死亡的第四大病因，嚴(yán)重威脅全球人類生命健康安全［4］。近年來，我國結(jié)腸癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢，多數(shù)患者一經(jīng)發(fā)現(xiàn)已經(jīng)是疾病晚期，目前針對晚期結(jié)腸癌治療的效果不甚理想［5］，所以積極探尋治療結(jié)腸癌的有效方法仍然是臨床亟待解決的問題，具有較為深刻的臨床意義［6］。Oct4 和Sox2 兩種轉(zhuǎn)錄因子與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲惡變有密切的關(guān)系，既能通過獨(dú)立的途徑發(fā)揮作用，也能互相關(guān)聯(lián)，且受到其他多種因子的影響和制約，除了表達(dá)方式較為相似意外，兩者還有共同的結(jié)合點(diǎn)，協(xié)同調(diào)控大多數(shù)的靶基因表達(dá)。

結(jié)腸癌的患病機(jī)制是逐步演變的進(jìn)程，相關(guān)因素錯(cuò)綜復(fù)雜，可能與自身免疫、年齡、遺傳和環(huán)境因素有密切的關(guān)系［7］。目前認(rèn)為結(jié)腸癌多來源于結(jié)腸腺瘤，經(jīng)過復(fù)雜地，多階段、多步驟的癌變過程發(fā)展為結(jié)腸癌，從早期腺瘤性增生逐年發(fā)生癌變具有較為經(jīng)典的信號通路變化，經(jīng)過惡性轉(zhuǎn)化和惡性演進(jìn)兩個(gè)過程逐漸加重，其中KRAS 突變具有較為突出的代表性［8］。多能誘導(dǎo)干細(xì)胞針對四個(gè)核心轉(zhuǎn)錄因子在細(xì)胞重編程和維持細(xì)胞干細(xì)胞特性中發(fā)揮著重要的作用，然而其是否能夠在結(jié)腸癌發(fā)病過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用還不是十分明確。轉(zhuǎn)錄因子Oct4 是含POU 結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子家族的組成部分，具有持續(xù)干細(xì)胞多向分化潛能、自我更新功能，而且還與多種腫瘤干細(xì)胞具有相關(guān)性，不但在胚胎干細(xì)胞、胚胎生殖細(xì)胞、胚胎和生殖腫瘤細(xì)胞中有所表達(dá)，同時(shí)也在成人組織原發(fā)腫瘤細(xì)胞中有所表達(dá);Sox2 在前腸發(fā)育過程中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用，主要在前腸內(nèi)胚層中表達(dá)［9］，Sox2 是SOX 基因家族中的組成部分，表達(dá)的是317 個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)，其與多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有明確的關(guān)系。二者共同協(xié)同作用，能夠維持胚胎干細(xì)胞自我更新過程中發(fā)揮重要的作用，是維持膠質(zhì)瘤祖細(xì)胞增值和遺傳特征的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子［10］。

本研究入選近年來就診于我院的結(jié)腸癌患者作為研究觀察對象，采用免疫組化SP 法進(jìn)行Sox2 和Oct4兩種轉(zhuǎn)錄因子的檢測，觀察其在匹配的癌旁組織中的表達(dá)，探尋其再結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的相互關(guān)系和作用。研究結(jié)果顯示，兩種轉(zhuǎn)錄因子在結(jié)腸癌中均表現(xiàn)為高表達(dá)，陽性產(chǎn)物均呈棕黃色顆粒，其中Oct4 主要在腺體細(xì)胞核表達(dá)，Sox2 主要在腺體細(xì)胞漿表達(dá)，Oct4 和Sox2 在結(jié)腸癌中陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織;Oct4陽性表達(dá)率隨著Sox2 陽性表達(dá)率升高而升高，呈正相關(guān)關(guān)系。本研究提示，Sox2 和Oct4 兩種轉(zhuǎn)錄因子在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織，其表達(dá)呈正相關(guān)，兩種轉(zhuǎn)錄因子在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用。本研究結(jié)果與目前臨床研究結(jié)果基本一致，但本研究樣本含量少，尚需高質(zhì)量研究進(jìn)一步驗(yàn)證。

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