茶葉中6種主要兒茶素的高效液相色譜方法建立及應(yīng)用

嚴(yán)志達(dá)（臺(tái)州市星明藥業(yè)有限公司，浙江 臺(tái)州 317700）

茶葉中6種主要兒茶素的高效液相色譜方法建立及應(yīng)用

嚴(yán)志達(dá)
（臺(tái)州市星明藥業(yè)有限公司，浙江 臺(tái)州 317700）

摘 要：茶葉是有益人身體健康的最佳飲料，通過(guò)現(xiàn)代的醫(yī)學(xué)臨床證明，茶葉中的兒茶素對(duì)茶葉中多酚類(lèi)物質(zhì)高效清除自由基能力起著重要決定作用，通過(guò)加強(qiáng)對(duì)其相關(guān)理論的研究能夠更深層次的了解茶葉的功效原理。本文主要就茶葉中六種主要兒茶素的高效液相色譜方法進(jìn)行構(gòu)建并對(duì)其實(shí)際應(yīng)用詳細(xì)分析探究，希望此次理論研究對(duì)實(shí)際操作能起到一定指導(dǎo)作用。

關(guān)鍵詞：茶葉；兒茶素；高效液相色譜

0 引言

古代，茶被譽(yù)為是萬(wàn)病之藥，茶不僅能夠用來(lái)解渴，而最為重要的就是其組成的成分對(duì)人的身體健康有著促進(jìn)作用，有著多種醫(yī)療保健的功能。我國(guó)有著豐富的茶葉資源，而將這些資源的作用得到充分發(fā)揮就是當(dāng)前茶葉深加工領(lǐng)域的重要研究對(duì)象。在這一發(fā)展背景下對(duì)茶葉中的一些主要成分加強(qiáng)研究就有著其實(shí)質(zhì)性意義。

1 兒茶素檢測(cè)方法及高效液色譜分離

1.1 兒茶素檢測(cè)方法分析

針對(duì)茶葉中的兒茶素進(jìn)行檢測(cè)其方法是多樣的，其中的氣相色譜法是能夠快速定量以及分析方便的方法，在這一方法作用下對(duì)茶葉兒茶素進(jìn)行分析，常用衍生化試劑來(lái)改善樣品預(yù)處理方法，這樣能夠讓兒茶素衍生的更加徹底。對(duì)茶葉成分的組成進(jìn)行詳細(xì)分析并對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估，通過(guò)溶劑的提取方法能夠起到有效的作用，這一方法的應(yīng)用主要就是采取水溶劑以及甲醇溶劑和乙醇溶劑等，運(yùn)用這一方法能夠?qū)翰杷貜牟枞~的基質(zhì)當(dāng)中得到有效的提取出來(lái)。除了以上這一方法外，通過(guò)超聲波萃取法也比較有效，這主要是通過(guò)超聲波技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用所產(chǎn)生空化作用，從而就能夠?qū)⑵湓谖镔|(zhì)化學(xué)成分的提取作業(yè)當(dāng)中加以應(yīng)用[1]。

1.2 茶葉中六種主要兒茶素高效液相色譜分離

高效液相色譜法能夠按照固定相以及流動(dòng)相極性強(qiáng)弱分成正、反相液色譜法，而樣品的性質(zhì)則決定著最終的分離模式。首先從反相高校液色譜法的層面進(jìn)行實(shí)施分析，在這一分離措施下主要是通過(guò)水以及甲醇等作為是有機(jī)溶劑，這些溶劑主要是為了能夠?qū)α鲃?dòng)相溶劑的強(qiáng)度進(jìn)行有效調(diào)節(jié)。在這一過(guò)程中，給予在流動(dòng)相極性要比固定相極性大很多，而在樣品的分子在這一過(guò)程中的分配和保留的化合物就相對(duì)比較強(qiáng)，從而就能夠反映出極性如果是比較大的話(huà)，那么在物質(zhì)方面就會(huì)先出峰，相反，倘若是極性相對(duì)比較小就是后出峰[2]。

2 六種兒茶素提取量的影響因素及HPLC方法應(yīng)用

2.1 六種兒茶素提取量影響因素分析

六種兒茶素提取量的影響因素是多方面的，主要體現(xiàn)在實(shí)踐對(duì)其產(chǎn)生的影響，溶劑提取中所需的時(shí)間愈長(zhǎng)提取的就會(huì)愈充分，而兒茶素較為容易氧化，同時(shí)也可能在長(zhǎng)時(shí)間提取中受氧化造成提取量的降低，根據(jù)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)就能夠看到，六種兒茶素總量在四十到五十分鐘的時(shí)候值最大。從而就能夠看出，這主要是與茶葉中的兒茶素氧化存在著一定的關(guān)聯(lián)，在一段時(shí)間后，隨著提取的時(shí)間不短的增加，那么在茶葉中的兒茶素氧化的速率也會(huì)比溶出的速率要大很多。

另外茶葉中兒茶素的料液對(duì)兒茶素的提取也會(huì)有著相應(yīng)的影響，在含量超過(guò)相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)那么有限兒茶素含量就會(huì)由于過(guò)量溶劑稀釋對(duì)其精密度造成影響，同時(shí)也會(huì)對(duì)溶劑造成浪費(fèi)的現(xiàn)象。除此之外，抗氧化劑自身的含量多少對(duì)其也會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)影響，因?yàn)閮翰杷卦跍囟认鄬?duì)較高的情況下就比較容易發(fā)生氧化，溫度低的條件下的提取量也會(huì)因此而降低，對(duì)其含量的測(cè)定就會(huì)有著很大的難度。結(jié)合基質(zhì)當(dāng)中成分含量的也正通過(guò)這一水溶液對(duì)茶葉兒茶素進(jìn)行提取對(duì)方法建立難度不會(huì)受到影響。

2.2六種主要兒茶素HPLC方法應(yīng)用

對(duì)茶葉中的六種兒茶素進(jìn)行方法驗(yàn)證的過(guò)程中，要能夠采取具體的措施，要能對(duì)其加強(qiáng)在實(shí)驗(yàn)層面的投入。通過(guò)高效液相色譜儀四元泵， DAD二極管陣列檢測(cè)器； G1969A ESITOF -MS電噴霧飛行時(shí)間質(zhì)譜儀；MIKRO 22R冷凍離心機(jī)；MilliQ-50超純水系統(tǒng)等[3]。然后對(duì)樣品進(jìn)行有效的處理，首先就是要稱(chēng)取0.5克的茶葉樣品，將其放置在100升的錐形瓶當(dāng)中，再進(jìn)行加入五十毫升的九十?dāng)z氏度的熱水，進(jìn)行震蕩，在沉浸十分鐘之后進(jìn)行離心旋轉(zhuǎn)十分鐘，接著進(jìn)行獲取十毫升上層清液放置在五十毫升的容量瓶當(dāng)中，最后采用純水進(jìn)行稀釋?zhuān)瑢?duì)稀釋的程度達(dá)到0.45微米微孔濾膜即可待測(cè)。

接著就是對(duì)色譜自身的所需要保持的條件，在這一方面要能夠充分重視，色譜柱Sinochrom ODS -BP416mm i.d×200mm,5μm，其中的流動(dòng)相A、B分別是甲醇以及一定量的三氟乙酸水溶液。在洗脫的程序上主要是先對(duì)百分之十三的甲醇溶液進(jìn)行五分鐘的洗脫，等待十分鐘再對(duì)百分之二十的甲醇=容易洗脫五分鐘，依次是百分之四十，百分之八十，在流速上要保持每分鐘0.8毫升，在這些操作都完成之后再取樣十微升[4]。

試驗(yàn)方法在進(jìn)行驗(yàn)證后就能實(shí)施日常應(yīng)用，從具體的措施實(shí)施情況來(lái)看，主要是把建立的實(shí)驗(yàn)方法用在茶葉樣品當(dāng)中的六種兒茶素含量測(cè)定，這也是方法建立比較根本的一個(gè)目的。從準(zhǔn)確度以及精密度方面來(lái)看，對(duì)準(zhǔn)確度的確定方式有回收測(cè)定摻入空白基質(zhì)中的被測(cè)物，和參比標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較以及被測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)品加入法。精密度主要是在重復(fù)使用這一操作步驟的時(shí)候，對(duì)一均勻樣品實(shí)施多次的抽樣測(cè)定，而在各測(cè)定結(jié)果間的一致程度。

3 結(jié)語(yǔ)

總而言之，針對(duì)茶葉中的六種主要兒茶素的研究通過(guò)其專(zhuān)屬性以及定量限等對(duì)各個(gè)物質(zhì)的含量以及樣品處理方法有著相應(yīng)的說(shuō)明。而研究中的方法驗(yàn)證是檢驗(yàn)及完善方法比較重要的一個(gè)內(nèi)容，所以要能夠通過(guò)多種方法進(jìn)行實(shí)際的驗(yàn)證。此次的理論研究由于受到文章的篇幅限制，僅從側(cè)面進(jìn)行了相應(yīng)的反映，希望此次的理論分析能在思路上提供理論依據(jù)，借此希望能夠?qū)ζ浒l(fā)展有所裨益。

參考文獻(xiàn)：

[1]鄭清梅,陳昆平,鐘艷梅,韓春艷,張子容,鄭佳玲.4類(lèi)茶葉及其茶渣主要成分的測(cè)定與分析[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2015（06）.

[2]盧濤,蘭先秋,朱斌,羅安林,宋航.不同茶多酚中兒茶素的測(cè)定及柱層析法提取EGCG的比較[J].化工進(jìn)展,2013（05）.

[3]王傳金,魏運(yùn)洋,朱廣軍,杜楊艷.聚酰胺色譜法分離制備高純度表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯[J].應(yīng)用化學(xué),2013（04）.