大腸癌中UCP2的表達(dá)及臨床意義

謝永俊　劉貴儒　常家聰★

大腸癌中UCP2的表達(dá)及臨床意義

謝永俊劉貴儒常家聰★

目的 檢測大腸癌組織中解偶聯(lián)蛋白2（UCP2）的表達(dá)與分布，探討其在大腸癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移中的作用。方法 采用免疫組化方法檢測正常大腸黏膜、大腸管狀腺瘤、大腸癌中UCP2的表達(dá)。結(jié)果 UCP2在正常大腸黏膜、大腸管狀腺瘤、大腸癌中的陽性表達(dá)量呈遞增趨勢，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；大腸癌中UCP2的表達(dá)與癌組織的浸潤深度、淋巴轉(zhuǎn)移、脈管內(nèi)癌栓相關(guān)（P＜0.05）；大腸癌中UCP2的表達(dá)是影響患者術(shù)后生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)論 UCP2在大腸癌組織中高表達(dá)，可能與大腸癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移、預(yù)后密切相關(guān)。

大腸癌 解偶聯(lián)蛋白2 臨床癥狀 生存率

大腸癌（CRC）是目前世界上最常見的惡性腫瘤，在歐美國家惡性腫瘤死因中居第2位［1］。自改革開放以來，我國大腸癌發(fā)病率逐年上升［2，3］。作者采用免疫組化染色方法檢測正常大腸黏膜、大腸管狀腺瘤及大腸癌中解偶聯(lián)蛋白2（UCP2）的表達(dá)，分析其在大腸癌中的表達(dá)與有關(guān)臨床參數(shù)的相關(guān)性，為大腸癌的可能發(fā)病機(jī)制、早期診斷、早期治療及術(shù)后預(yù)防等提供依據(jù)。

1　臨床資料

1.1標(biāo)本來源 收集2005年6月至2008年6月本院普外科手術(shù)切除標(biāo)本及病理科存檔合格組織切片，包括大腸管狀腺瘤20例，其中男11例，女9例，平均年齡69.9歲。大腸腺癌50例，其中男24例，女26例，平均年齡62.3歲。正常大腸黏膜組織20例，取自上述大腸腺癌患者行大腸切除的近側(cè)斷端大腸黏膜組織，斷端距癌組織＞5cm，組織學(xué)檢查為正常黏膜組織。所有入選患者術(shù)前未接受放療、化療或免疫治療，術(shù)后臨床診斷及病理診斷明確。手術(shù)治療后隨訪5年并計(jì)算其生存率。

1.2主要試劑 （1） 兔抗人UCP2抗體（武漢博士德生物工程有限公司）。（2）即用型MaxVisionTM試劑（福建邁新生物工程有限公司）。

1.3實(shí)驗(yàn)方法 所有標(biāo)本均用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，4μm切片，操作按照試劑說明書進(jìn)行，光鏡觀察。分別設(shè)陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照。

1.4免疫組化結(jié)果判定 光鏡下，以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃色或棕黃色顆粒為陽性染色。觀察5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞陽性比例并計(jì)分。1分：細(xì)胞陽性數(shù)＜10%。2分：10%～50%。3分：51%～80%。4分＞80%。陽性強(qiáng)度分為弱：1分、中等：2分、強(qiáng)：3分，兩者相乘得出總分值（0～12），分值0～1為-，分值2～6為+，分值8～12為++。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0軟件。計(jì)量資料采用χ2檢驗(yàn)，組間以配對(duì)t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1不同組織中UCP2的表達(dá) 大腸癌中UCP2的表達(dá)明顯高于大腸管狀腺瘤，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.007＜0.05）。見圖1、表1。

圖1　UCP2在不同組織中的表達(dá)（×200）

表1　不同組織中UCP2的表達(dá)（n）

2.2大腸癌組織中UCP2的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見圖1、表2。

表2　大腸癌組織中UCP2的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系（n）

2.3大腸癌組織中UCP2的表達(dá)與患者生存率的關(guān)系 見表3。

表3　大腸癌組織中UCP2的表達(dá)與患者生存率的關(guān)系（n）

3　討論

大腸癌早期與晚期比較，預(yù)后截然不同，進(jìn)行大規(guī)模的篩查非常重要，因此了解大腸癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移機(jī)制及尋找大腸癌腫瘤標(biāo)志物并能早期干預(yù)，對(duì)提高大腸癌的治療效果和預(yù)后具有重要的臨床意義。UCP2是1997年Fleury等［4］發(fā)現(xiàn)的線粒體內(nèi)膜解偶聯(lián)蛋白家族中的一個(gè)新成員，對(duì)其功能的研究主要集中在與能量代謝、活性氧的產(chǎn)生、衰老、肥胖、糖尿病及細(xì)胞凋亡的關(guān)系等方面。近年有研究報(bào)道，UCP2過表達(dá)還與腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在著緊密的聯(lián)系［5～8］。UCP2是一種具有高轉(zhuǎn)運(yùn)活性的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，具有介導(dǎo)質(zhì)子漏的作用，可使細(xì)胞線粒體上電子沿著呼吸鏈傳遞并伴隨著ATP形成的氧化磷酸化解偶聯(lián)，從而降低線粒體跨膜電位，影響ATP的產(chǎn)生，抑制ROS的形成，將線粒體的自由能轉(zhuǎn)變?yōu)闊崃肯模瑥亩绊懠?xì)胞的能量代謝。

3.1UCP2與大腸癌發(fā)生的關(guān)系 本資料結(jié)果顯示，正常大腸黏膜組織中UCP2幾乎無表達(dá)，大腸癌中UCP2的表達(dá)明顯高于大腸管狀腺瘤，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示UCP2的表達(dá)與大腸癌的發(fā)生有關(guān)。Horimoto等［9］報(bào)道在結(jié)腸癌組織中UCP2的mRNA和蛋白的表達(dá)是正常結(jié)腸黏膜組織的3～4倍，并用免疫組化法檢測結(jié)腸增生性息肉、結(jié)腸管狀腺瘤、結(jié)腸腺癌中UCP2的表達(dá)，結(jié)果顯示UCP2的表達(dá)率分別為11.1%、58.8%、86.0%。張紅杰等［10］、Kuai XY等［11］通過免疫組化法檢測UCP2在增生性息肉、絨毛管狀腺瘤、結(jié)腸癌中的陽性表達(dá)率分別為20.0%、55.0%、73.1%，而且UCP2在Ⅰ期和Ⅱ期、Ⅲ期結(jié)腸癌組織中的陽性表達(dá)率分別為55.6%、81.1%、85.1%。本資料結(jié)果與上述結(jié)果基本一致。另外有研究報(bào)道，UCP2在肝細(xì)胞癌、膽管細(xì)胞癌、乳腺癌腫瘤組織中的表達(dá)較正常組織明顯增加［12～15］。

3.2UCP2與大腸癌生物學(xué)特性的關(guān)系 本資料結(jié)果顯示，UCP2在大腸癌中的蛋白表達(dá)與患者年齡、性別、病理分化程度無關(guān)。UCP2在大腸癌族中的表達(dá)水平與腫瘤的浸潤深度、淋巴轉(zhuǎn)移、脈管內(nèi)癌栓相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。UCP2的解偶聯(lián)作用限制了線粒體對(duì)葡萄糖的利用，還將丙酮酸轉(zhuǎn)運(yùn)出線粒體基質(zhì)，參與糖酵解生產(chǎn)乳酸。在白血病細(xì)胞中的UCP2 siRNA被沉默后，可觀察到乳酸產(chǎn)生減少，提示UCP2在糖酵解作用中發(fā)揮了積極的作用［16］。Derdak等［17］研究結(jié)果提示UCP2-/-小鼠可能在氧化應(yīng)激條件下對(duì)惡劣環(huán)境的抵抗能力下降，對(duì)致癌劑的敏感性增強(qiáng)。張紅杰［10］等研究認(rèn)為UCP2在結(jié)腸腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，可能通過調(diào)控ROS水平來激活ERKl/2、JNKl/2，致使腸上皮細(xì)胞增殖演變?yōu)閻盒阅[瘤來實(shí)現(xiàn)。因此，UCP2可能通過參與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的能量代謝和腫瘤細(xì)胞的ROS水平等，從而在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。

3.3UCP2與生存率的關(guān)系 本資料中50例經(jīng)手術(shù)治療的大腸腺癌患者隨訪5年，17例死亡，病死率34%，對(duì)大腸腺癌組織中UCP2的表達(dá)分析認(rèn)為隨著大腸腺癌組織中UCP2蛋白表達(dá)的增加，＜5年病死率逐漸升高，表明大腸腺癌患者組織中UCP2的表達(dá)高低是影響大腸腺癌患者術(shù)后生存的獨(dú)立因素。

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Purpose To explore the role and clinical significance of UCP2 in the development，infiltration and metastasis of colorectal adenocarcinoma. Methods the expression of UCP2 in normal colorectal tissue，colorectal adenoma and colorectal adenocarcinoma were detected by immunohistochemical analysis. Results The Results of immunohistochemistry showed the difference of UCP2 proteins positive expression among the normal colorectal tissue，the colorectal adenoma and the colorectal adenocarcinoma were signifi cant（P＜0.05）. the positive expression of UCP2 was closely correlated with depth of tumor infi ltration、metastasis of lymph node and Intravascular cancer embolus（P＜0.05）.The positive expression of UCP2 was independent risk factors for survial in patients with carcinoma of large intestine after operation.Conclusion UCP2 may play an important role in tumorigenesis，infi ltration and metastasis of colorectal adenocarcinoma.

Colorectal cancer UCP2 Clinical symptoms Survival

230031安徽省 解放軍第105醫(yī)院肛腸科（謝永?。?28000內(nèi)蒙古通遼市庫倫旗中醫(yī)院肛腸科（劉貴儒）230032安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科（常家聰）