施氏獺蛤室內(nèi)規(guī)?；斯び缂夹g(shù)研究

王　斌，栗志民，劉志剛，劉付少梅，馮小龍

（1.廣東海洋大學水產(chǎn)學院，廣東 湛江 524025；2.湛江銀浪海洋生物技術(shù)有限公司，廣東 湛江 524025）

施氏獺蛤室內(nèi)規(guī)?；斯び缂夹g(shù)研究

王斌1，栗志民1，劉志剛1，劉付少梅2，馮小龍2

（1.廣東海洋大學水產(chǎn)學院，廣東 湛江 524025；2.湛江銀浪海洋生物技術(shù)有限公司，廣東 湛江 524025）

為解決施氏獺蛤天然種苗匱乏和人工育苗技術(shù)尚不成熟的問題，促進其產(chǎn)業(yè)發(fā)展，于2013年開展了施氏獺蛤（Lutraria sieboldii Reeve）室內(nèi)規(guī)?；斯び缂夹g(shù)研究。采用池底鋪沙，餌料以單胞藻為主，并輔以雞蛋黃和淀粉，施氏獺蛤親貝存活率89.7%，雄貝和雌貝性腺成熟率分別為89.1%和78.7%，親貝產(chǎn)卵量126萬粒/個，受精率達到93.4%。在水溫25.5～26.5℃，鹽度27.3～28.5條件下，施氏獺蛤受精后15min和25min分別釋放第一極體和第二極體，受精后35min達到2細胞期，約4 h 40min形成原腸胚期，6 h 25min形成擔輪幼蟲，受精后14 h進入面盤幼蟲期。投喂不同的開口餌料，施氏獺蛤面盤幼蟲生長速率不同。單獨投喂湛江等邊金藻、湛江等邊金藻+小球藻和單獨投喂小球藻，5日齡幼蟲殼長分別為130、118和105 μm，說明單獨投喂湛江等邊金藻培育效果最好。湛江等鞭金藻+小球藻、小球藻+牟氏角毛藻、牟氏角毛藻+湛江等鞭金藻、湛江等鞭金藻+亞心形扁藻等不同餌料組合對施氏獺蛤幼蟲和稚貝生長影響均差異顯著（P＜0.05），其中小球藻+牟氏角毛藻組合培育幼蟲效果最佳，而湛江等鞭金藻+亞心形扁藻培育稚貝效果最好。不同附著基對施氏獺蛤幼蟲的生長和存活產(chǎn)生顯著影響（P＜0.05）。采用遮光網(wǎng)、聚乙烯網(wǎng)片、細砂、河口沉積泥和附著板5種附著基，考察幼蟲生長和存活兩個指標，結(jié)果表明，附著板效果最好。通過兩批生產(chǎn)性育苗，親貝的催產(chǎn)率達到90%，浮游幼蟲平均存活率為84.3%，培育出殼長為2.5～3.0mm的稚貝3 180萬粒，平均稚貝育成率達到33.1%。

施氏獺蛤；人工育苗；促熟培育；投餌技術(shù)；附著基

施氏獺蛤（Lutraria sieboldii Reeve）隸屬于瓣鰓綱（Lamellibranchia）異齒亞綱（Heterodonta）簾蛤目（Veneroida）蛤蜊科（Mactridae）獺蛤?qū)伲↙utraria），是一種埋棲型雙殼經(jīng)濟貝類，主要分布于我國的廣東、廣西、浙江和臺灣等沿海，在日本、東南亞也有分布［1］。近10年來，國內(nèi)學者研究了其生態(tài)習性［2］、性腺發(fā)育和生殖周期［3］、融合卵裂和胚胎發(fā)育過程［4］、幼蟲和稚貝的發(fā)育和行為［5］，摸索了人工育苗、中間培育和海區(qū)養(yǎng)殖技術(shù)［6-7］及遺傳多樣性［8］。該貝生長快，養(yǎng)殖周期短，肉質(zhì)鮮美，近年來在中國南方海域具有規(guī)?；B(yǎng)殖潛力和市場前景。然而，施氏獺蛤天然種苗匱乏和人工育苗技術(shù)尚不成熟，影響了其產(chǎn)業(yè)發(fā)展。筆者在前人研究基礎(chǔ)之上，開展了施氏獺蛤室內(nèi)規(guī)?；斯び缂夹g(shù)的研究，旨在為該貝類規(guī)模化生產(chǎn)提供技術(shù)基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1材料

實驗于2013年在湛江市遂溪縣草譚鎮(zhèn)湛江銀浪海洋生物技術(shù)有限公司貝類種苗場進行。親貝采自遂溪縣北部灣海域，親貝殼形完整，外觀健壯，無損傷，1.5齡，規(guī)格（殼長 ×殼高）為（12.38±2.21）cm ×（7.64±1.13）cm，鮮體質(zhì)量（138.7±15.6）g。實驗用餌料在育苗前20 d左右開始培養(yǎng)，種類有湛江等邊金藻（Isochrysiszhanjiangensis），牟氏角毛藻（Chaetoceros muelleri），亞心形扁藻（Platymonas subcordiformis），小球藻（Chlorella vulgaris）。附著基為30 cm ×30 cm黑色聚乙烯板。餌料和附著基實驗用容器為容積60 L塑料桶，裝水50 L。

1.2方法

1.2.1親貝促熟親貝促熟在3個規(guī)格為3 m ×2.5 m ×1.2 m的水池中進行，池底鋪沙厚25 cm。親貝促熟培育密度100 ind·m-2。培育水溫25.5～26.5℃，鹽度27.3～28.5。餌料以單胞藻為主，包括湛江等邊金藻（5～6 ×104ind·mL-1）、牟氏角毛藻（3～4 ×104ind·mL-1）、亞心形扁藻（1～2 ×104cell·mL-1）、小球藻（2～3 ×104cell·mL-1），并輔以雞蛋黃、干酵母、和淀粉。各組投餌量以維持水體淡淡的藻色為度，雞蛋黃、干酵母、淀粉的投喂?jié)舛染鶠?～3g·m-3，日投餌3～5次。各組每天上午8：00全換水1次，每天檢查死貝情況，及時移除死亡貝體以防止污染水質(zhì)，記錄死亡個數(shù)。換水后注意觀察性腺產(chǎn)卵排精等發(fā)育情況。每隔1周各組隨機抽取10個親貝，肉眼觀察生殖腺在內(nèi)臟團表面的覆蓋率，以覆蓋率達80%為生殖腺成熟。促熟培育時間歷時78 d，實驗結(jié)束后計算每個水池親貝存活率、成熟率。

1.2.2親貝催產(chǎn)與受精孵化親貝產(chǎn)卵池與親貝促熟培育池相同。采用流水結(jié)合升溫（將催產(chǎn)池水溫升高3℃）刺激進行親貝催產(chǎn)。雌貝產(chǎn)卵時，在水中呈顆粒狀排出，卵子密度可以控制為 5～6ind·mL-1。雄貝排精時，在水中呈煙霧狀排出，精子過多時，在排放過程中及時取出雄貝。孵化期間保持微充氣，水溫25.5～26.5℃，鹽度27.3～28.5，催產(chǎn)結(jié)束時及時移出親貝并記錄產(chǎn)卵量和受精卵數(shù)量。受精率 =（受精卵數(shù)/卵子總數(shù)）×100%。

1.2.3施氏獺蛤幼蟲開口餌料的選擇實驗當受精卵孵化至D形幼蟲時，從第1天D形幼蟲至第5天殼頂初期幼蟲，觀察不同開口餌料對幼蟲生長的影響。將池中同一批健康幼蟲轉(zhuǎn)移至60 L塑料桶內(nèi)，初始密度為 3 ind·mL-1。開口餌料的種類及其每次投喂量為湛江等邊金藻800～2500 cell·mL-1、小球藻5 000～15 000 cell·mL-1，或混合投喂湛江等邊金藻（400～1250 cell·mL-1）+小球藻（2500～7500 cell·mL-1）。每天定時取樣觀察幼蟲攝食情況，根據(jù)胃飽和程度適量增減。實驗期間水溫25.5～26.5℃，pH7.9～8.2，鹽度27.3～28.5，每天換水50%，各組均設3個平行組，實驗歷時5 d。每天隨機抽取30個個體測量幼蟲殼長。

1.2.4不同餌料組合對施氏獺蛤幼蟲生長的影響

以殼頂初期幼蟲為實驗材料，觀察不同餌料對施氏獺蛤殼頂初期幼蟲生長的影響。幼蟲規(guī)格為平均殼長（154.4±4.87）μm、平均殼高（147.7±3.76）μm，實驗在匍匐期幼蟲期終止。實驗在60 L塑料桶中進行，幼蟲初始密度2 ind·mL-1，餌料設4種組合：Ⅰ組［湛江等鞭金藻（2 500～20 000 cell·mL-1）+ 小球藻（15 000～30 000 cell·mL-1）］、Ⅱ組［小球藻（25 000～30 000 cell·mL-1）+ 牟氏角毛藻（10 000～ 15 000 cell·mL-1）］、Ⅲ組［牟氏角毛藻（10 000～15 000 cell·mL-1）+ 湛江等鞭金藻（15 000～20 000 cell·mL-1）］、Ⅳ組［湛江等鞭金藻（15 000～20 000 cell·mL-1）+ 亞心形扁藻（1500～10 000 cell·mL-1）］。每天定時取樣觀察幼蟲攝食情況，根據(jù)胃飽滿程度適量增減。實驗期間水溫26.5～28.5℃，pH 7.9 ～8.2，鹽度27.3 - 28.5，各組每日投喂2次，每天換水50%。實驗設3個平行組。每天每組隨機測30個幼蟲的殼長。

1.2.5不同餌料組合對施氏獺蛤稚貝生長的影響

以匍匐期幼蟲為實驗材料，觀察不同餌料對施氏獺蛤從附著期幼蟲至底棲稚貝生長的影響。幼蟲規(guī)格為平均殼長（566.2±5.68）μm，平均殼高（435.6±4.82）μm。實驗在60 L塑料桶中進行，餌料設4種組合：Ⅰ組［湛江等鞭金藻（2 500～20 000 cell·mL-1）+ 小球藻（15 000～30 000 cell·mL-1）］、Ⅱ組［小球藻（25 000～30 000 cell·mL-1）+ 牟氏角毛藻（2 500～15 000 cell·mL-1）］、Ⅲ組［牟氏角毛藻（10 000～15 000 cell·mL-1+ 湛江等鞭金藻（15 000～20 000 cell·mL-1）］、Ⅳ組［湛江等鞭金藻（15 000～20 000 cell·mL-1）+ 亞心形扁藻（1 500～10 000 cell·mL-1）］。每天定時取樣觀察幼蟲攝食情況，根據(jù)胃飽滿程度適量增減。實驗期間水溫 26.5 ～28.5℃，pH7.9 ～8.2，鹽度27.3 - 28.5，各組每日投喂2次，每天換水50%。實驗設3個平行組。每天每組隨機測 30個幼蟲或稚貝的殼長，實驗終止后計算每種餌料培養(yǎng)下施氏獺蛤的生長速度，即生長速率=（實驗結(jié)束時殼長-實驗起始時殼長）/實驗天數(shù)。

1.2.6不同附著基附苗實驗待幼蟲發(fā)育至匍匐幼蟲期時，選擇同一批健康幼蟲至塑料桶（60 L），初始密度1 ind·mL-1，平均殼長（260.62±12.31）μm、平均殼高（237.83±8.26）μm。設4個不同附著基組進行附苗效果實驗，A組［遮光網(wǎng)（遮光率90%，制作成直徑6 cm、高30 cm的圓柱形）］、B組［聚乙烯網(wǎng)（將孔徑為0.5 cm的深綠色聚乙烯網(wǎng)卷成直徑6 cm、高30 cm的圓柱形）］、C組［細沙（粒徑150～250 μm）］、D組［河口沉積泥（粒徑2～3 μm）］，E組［附著板，黑色聚乙烯塑料制成邊長30 cm×30 cm的正方形］。各組均設3個平行。實驗期間，水溫26.5～28.5℃，鹽度27.3～28.5。餌料為湛江等鞭金藻（5 000～20 000 cell·mL-1·d-1）、小球藻（15 000～30 000 cell·mL-1·d-1）、角毛藻（5 000 ～15 000 cell·mL-1·d-1）、亞心形扁藻（3000～10 000 cell·mL-1·d-1），每組每次混合投喂4種餌料，每日2次，投餌量根據(jù)胃飽滿程度適量增減。每天用虹吸法換水50%，每2 d隨機抽取30個稚貝測量殼長、殼高。實驗共進行28 d。實驗結(jié)束后統(tǒng)計各組稚貝數(shù)量（包括附著在桶底和桶壁上的個體）及殼長，育成率 =（實驗結(jié)束稚貝數(shù)量/實驗開始匍匐幼蟲數(shù)量）×100%，平均日生長率（μm·d-1）= ［（實驗結(jié)束稚貝平均殼長 - 實驗開始匍匐幼蟲殼長）/實驗時間］×100%。

1.2.7生產(chǎn)性幼蟲培育生產(chǎn)性育苗池規(guī)格為底面積24 m2、高1.3 m的水泥池。幼蟲發(fā)育到D形幼蟲時，采用43 μm孔徑篩絹網(wǎng)進行倒池，幼蟲密度3～4 ind·mL-1，開始投喂湛江等邊金藻，投餌量500～2000 cell·mL-1·d-1，每天定時取樣觀察幼蟲攝食情況，根據(jù)胃飽滿程度適量增減。水溫 26.5 ～28.5℃，鹽度27.3～28.5，pH值7.9～8.2。每池16個氣石微波狀連續(xù)充氣，每天投料前換水一次，每次換水50%，殼頂初期幼蟲至匍匐期幼蟲階段，投喂小球藻+牟氏角毛藻，附著期幼蟲至稚貝期階段，投喂湛江等鞭金藻+亞心形扁藻，投餌密度如前所述。每天上午8：00左右測量殼長、密度、溫度和鹽度。實驗期間統(tǒng)計的指標包括:催產(chǎn)率［（產(chǎn)卵親貝個數(shù)/親貝總數(shù)）×100%］，浮游幼蟲期存活率［（殼頂后期幼蟲數(shù)量/D形幼蟲數(shù)量）×100%］，稚貝育成率 ［（稚貝數(shù)/D形幼蟲數(shù)）×100%］，以及計算出苗量和幼蟲規(guī)格。

1.3數(shù)據(jù)處理

實驗設3個重復組，數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用SPSS 17.0進行單因素方差（ANOVA）分析，作圖采用EXCEL2003。

2　結(jié)果與分析

2.1親貝促熟培育效果

施氏獺蛤親貝促熟，采用池底鋪沙，培育密度100 ind·m-2，餌料以單胞藻為主，輔以雞蛋黃和淀粉，在水溫25.5～26.5℃，鹽度27.3 - 28.5條件下，親貝促熟效果如表1所示，3組親貝平均存活率89.7%，雄貝和雌貝平均性腺成熟率分別為 89.1%和78.7%，親貝平均產(chǎn)卵量126萬粒/個，平均受精率93.4%。

表1　施氏獺蛤親貝促熟效果Table 1　Conditioning effect for parental Lutraria sieboldii

2.2施氏獺蛤胚胎發(fā)育和形態(tài)特征

在水溫25.5～26.5℃，鹽度27.3～28.5條件下，施氏獺蛤胚胎發(fā)育和形態(tài)特征如表2所示。受精后15min和25min，分別釋放第一極體和第二極體。受精后35min，受精卵進行第一次不等分裂，分裂前細胞質(zhì)流向植物極，形成第一極葉，接著不等縱裂形成大小二個分裂球，即為2細胞期。細胞繼續(xù)卵裂，分別在50min、1 h 5min、1 h 35min形成4細胞期、8細胞期和16細胞期。在3 h 50min出現(xiàn)囊胚期，大分裂球逐漸陷入胚體之內(nèi)，小分裂球包圍大分裂球，形成一囊狀的結(jié)構(gòu)，囊胚的表面布有纖毛，開始游動。6h25min形成擔輪幼蟲，胚體漸變梨形，頂端膨大隆起，長一束纖毛，為頂纖毛束，其中央有一根粗大的鞭毛，長約80 μm，胚體的上半腰長一圈纖毛環(huán)。受精后14 h進入面盤幼蟲期，胚體兩側(cè)覆蓋2片較硬而透明的半圓形殼，呈“D”形，兩殼在背部成直線鉸合，胚體頂端呈橢圓盤狀，形成運動器官面盤，其四周細胞被有纖毛，消化道器官分化尚不完善。

表2　施氏獺蛤胚胎發(fā)育時間和特征Table 2　Developmental time and characteristics of embryo of Lutraria sieboldii

續(xù)表2（Continued）

2.3不同開口餌料對幼蟲（前5 d）生長的影響

投喂不同開口餌料，施氏獺蛤面盤幼蟲（前5 d）生長曲線如圖1所示。在第5天時測量結(jié)果表明，湛江等邊金藻組，殼長為130 μm，湛江等邊金藻 +小球藻組，殼長為118 μm，小球藻組，殼長為105 μm，方差分析顯示，3組餌料間對面盤幼蟲的生長影響差異顯著（P＜0.05）。

圖1　不同開口餌料對幼蟲（5d）生長的影響Fig.1　Effects of different opening diets on growth for veliger（5 d）

2.4不同餌料組合對幼蟲生長的影響

如圖 2所示，投喂湛江等鞭金藻+小球藻、小球藻+牟氏角毛藻、牟氏角毛藻+湛江等鞭金藻、湛江等鞭金藻+亞心形扁藻，平均殼長分別達到274.7 μm、321.3 μm、262 μm、257.7 μm。其中，以投喂小球藻+牟氏角毛藻，施氏獺蛤幼蟲生長速率最快，方差分析表明，與其他各組差異顯著（P＜0.05）。

圖2　不同餌料組合對施氏獺蛤殼頂初期幼蟲生長的影響Fig.2　Effects of differernt diet groups on growth of Lutraria sieboldii early umbo larvae

2.5不同餌料組合對稚貝生長的影響

如圖3所示，4種餌料組合Ⅰ組（湛江等鞭金藻+小球藻）、Ⅱ組（小球藻+牟氏角毛藻）、Ⅲ組（牟氏角毛藻+湛江等鞭金藻）、Ⅳ組（湛江等鞭金藻+亞心形扁藻），對稚貝生長產(chǎn)生顯著影響，在實驗結(jié)束時，測得殼長生長速率分別為201 μm·d-1、159.2 μm·d-1、156.2 μm·d-1、209.8 μm·d-1。其中，Ⅳ組（湛江等鞭金藻+亞心形扁藻）餌料對該貝類該階段的生長影響最為顯著（P＜0.05），其次為Ⅰ組（湛江等鞭金藻+小球藻）餌料組合。

2.6不同附著基的附苗效果

實驗結(jié)果表明，不同附著基對施氏獺蛤幼蟲的生長和存活產(chǎn)生顯著影響（P＜0.05）。從圖4可見，遮光網(wǎng)、聚乙烯網(wǎng)片、細砂、河口沉積泥和附著板5種附著基幼蟲殼長生長率分別為 127.5、155.1、172.5、270.7和252.4 μm·d-1，其中以河口沉積泥和附著板幼蟲生長最快。從圖5可見，采用遮光網(wǎng)、聚乙烯網(wǎng)片、細砂、河口沉積泥和附著板作為附著基培育幼蟲，其存活率分別為 17.4%、23.1%、46.7%、14.5%、62.6%。其中以細砂和附著板為附著基培育效果最好。綜合考慮生長和存活兩個指標，施氏獺蛤幼蟲附著階段采用附著板作為附著基培育效果最好。

圖3　不同餌料組合對施氏獺蛤稚貝生長速率的影響Fig.3　Effects of different diet groups on growth rate of Lutraria sieboldii spat

2.7生產(chǎn)性育苗

如表3所示，通過2批生產(chǎn)性育苗，對親貝的催產(chǎn)率達到90%，浮游幼蟲平均存活率為84.3%，培育出殼長為2.5～3.0mm的稚貝3 180萬粒，平均稚貝育成率達到33.1%。

圖4　不同附著基對施氏獺蛤幼蟲殼長日生長率的影響Fig.4　Effects of different attachment substance on daily growth rate for larvae of Lutraria sieboldii

圖5　不同附著基對施氏獺蛤幼蟲存活率的影響Fig.5　Effects of different attachment substance on survival rate for larvae of　Lutraria sieboldii

表3　施氏獺蛤生產(chǎn)性育苗效果Table 3　Productive breeding effects of Lutraria sieboldii

3　討　論

3.1親貝促熟

雙殼貝類的人工育苗是指親貝的選擇、蓄養(yǎng)、誘導排放精卵、受精、幼蟲培育及采苗過程，因此，親貝促熟無疑是人工育苗成敗的關(guān)鍵之一［9］。目前親貝選擇主要來源于海區(qū)天然親貝。這種方法挑取的親貝性腺發(fā)育不同步，經(jīng)常出現(xiàn)催產(chǎn)失?。换蛘哂捎趶娏掖碳づ懦?，精卵成熟度不夠而導致胚胎畸形率高、幼蟲體質(zhì)差、生長緩慢、不能抵御外界環(huán)境的變化而中途夭折。本研究在親貝催產(chǎn)前約2.5～3個月，挑取施氏獺蛤親貝，避免選擇個體太小和太大個體，同時保證個體健壯、無創(chuàng)傷、無寄生蟲和病害。親貝個體太小產(chǎn)卵量少，個體太大多為老熟個體，對誘導刺激反應緩慢，卵子質(zhì)量較差。采用有底質(zhì)（池底鋪沙厚25 cm）培育，符合其埋棲生活習性。使用金藻、硅藻和綠藻的混合投喂，投喂密度依照藻類細胞大小，堅持少量多次的原則，這與皺肋文蛤［10］、古蚶［11］、菲律賓蛤仔［12］人工促熟類似。值得注意的是，在親貝促熟期間，投喂了強化餌料雞蛋黃。生殖腺發(fā)育的好壞是貝類繁殖成敗的關(guān)鍵，其中脂質(zhì)的積累是影響生殖腺發(fā)育的主要因素之一，因為脂質(zhì)是貝類生殖腺發(fā)育的重要能源和結(jié)構(gòu)物質(zhì)，脂類成分和脂肪酸組成在生殖腺發(fā)育過程中經(jīng)歷了重要的量變，這些變化直接影響性細胞的質(zhì)量，從而影響胚胎發(fā)育和卵子孵化，同時在生殖過程、生化和物質(zhì)代謝等方面均有很重要的作用［13］。研究表明，親貝促熟時通過強化餌料蛋黃的投喂不僅可以人為加強親貝營養(yǎng)，增強其體質(zhì)，讓親貝逐漸適應育苗環(huán)境，降低誘導催產(chǎn)過程中對親貝的傷害和催產(chǎn)后的死亡，而且有效地促進了親貝的性腺發(fā)育，保證大批親貝集中產(chǎn)卵排精［14-15］。本研究親貝平均存活率、雄貝和雌貝平均性腺成熟率、親貝平均產(chǎn)卵量和平均受精率等指標均較高，可能與親貝促熟過程中投喂餌料多樣化，營養(yǎng)均衡全面有關(guān)。此外，親貝促熟期間保持連續(xù)充氣，適量換水，及時清理糞便等措施保證了水質(zhì)新鮮和換水前后水溫、鹽度的穩(wěn)定，避免了流產(chǎn)的發(fā)生。

3.2幼蟲發(fā)育不同階段的投餌技術(shù)

幼蟲培育是指D形幼蟲開始到幼蟲變態(tài)為稚貝的階段，幼蟲培育技術(shù)包括選優(yōu)、投餌、換水、倒池與清底、充氣、抑菌、理化因子觀測等［9］。過去有關(guān)貝類幼蟲發(fā)育不同階段餌料種類及搭配的研究較少［16-18］。本研究著重開展了幼蟲發(fā)育不同階段的投餌技術(shù)，包括開口餌料的選擇、幼蟲浮游階段和稚貝期。實驗結(jié)果表明，D形幼蟲開口餌料以湛江等邊金藻最佳，經(jīng)過5 d的培育，湛江等邊金藻組殼長生長分別比湛江等邊金藻+小球藻組和小球藻組提高10.17%和23.81%。這與D形幼蟲消化器官的結(jié)構(gòu)和單胞藻的結(jié)構(gòu)有關(guān)。D形幼蟲期消化器官分化尚未完善，胃和消化盲囊不發(fā)達，口徑較小，要求餌料浮于水中，易被攝食，容易消化，營養(yǎng)價值高。湛江等邊金藻直徑不超過10 μm，無細胞壁，具有鞭毛浮游性強，而小球藻缺乏鞭毛浮游性差，且具有細胞壁不易消化。

施氏獺蛤從D形幼蟲發(fā)育成匍匐幼蟲約需1周時間，本研究采用湛江等鞭金藻+小球藻、小球藻+牟氏角毛藻、牟氏角毛藻+湛江等鞭金藻、湛江等鞭金藻+亞心形扁藻等4種不同餌料組合，觀察了對幼蟲生長的影響。結(jié)果顯示，投喂小球藻+牟氏角毛藻，施氏獺蛤幼蟲生長速率最快，殼長比湛江等鞭金藻+小球藻、牟氏角毛藻+湛江等鞭金藻、湛江等鞭金藻+亞心形扁藻3個組合分別提高了17%、22.6%和24.7%。在此階段，幼蟲從浮游階段轉(zhuǎn)為匍匐階段，運動能力較弱，其對微藻的濾食效應主要取決于微藻濃度、運動能力及其在空間中分布格局。本研究顯示施氏獺蛤幼蟲對小球藻+牟氏角毛藻的濾食明顯強于其他3種餌料組合，究其原因，小球藻和牟氏角毛藻均缺乏鞭毛，個體相對較小，運動能力相對較弱，且其初始濃度相對較高，導致其在水體中分布相對較為均勻而更易被幼蟲高效濾取。與其他單胞藻相比，牟氏角毛藻具有耐高溫、繁殖速度快、抗污染能力強等優(yōu)點，同時藻體內(nèi)含有大量的脂肪酸、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)，是海產(chǎn)經(jīng)濟動物一種理想的餌料生物，在對蝦類育苗、梭子蟹育苗以及泥蚶、牡蠣等貝類育苗生產(chǎn)中，作為幼體的優(yōu)質(zhì)餌料被廣泛應用［19-22］。

幼蟲附著到稚貝培育階段，餌料投喂采用與幼蟲階段相似的4種餌料組合，結(jié)果顯示，投喂湛江等鞭金藻+亞心形扁藻效果最好，與湛江等鞭金藻+ 小球藻、小球藻+牟氏角毛藻、牟氏角毛藻+湛江等鞭金藻3個組合相比，殼長生長速率分別提高了4.3%、31.8%和34.3%，這可能與該階段幼蟲的背光習性增強，其攝食量在夜間更大有關(guān)。亞心型扁藻在夜間極易下沉，提高了該階段幼蟲和稚貝的攝食機率。從實驗結(jié)果來看，湛江等鞭金藻+小球藻組合對該階段的生長效果也較好。

3.3施氏獺蛤幼蟲的附苗技術(shù)

雙殼類的成體無論固著生活型、附著生活型，還是埋棲生活型，其生命史的早期都要經(jīng)過足絲附著生活的階段，稱為附著期。施氏獺蛤?qū)儆诘讞愵?，其后期面盤幼蟲在變態(tài)時并不從浮游生活直接轉(zhuǎn)為底棲生活，而是在從浮游生活轉(zhuǎn)為底棲生活之間有一個7～9 d的附著期。據(jù)觀察，適時在水體中投放附著器，后期幼蟲可及時變態(tài)進入附著期；池底不投放任何附著器，幼蟲也可以附著在池壁和池底，但進入附著期的時間將會推遲3～5 d。如果不投放任何附著器，幼蟲大量附著在育苗池的底部，而育苗池底部的糞便、死亡的藻類、原生動物、細菌等不利于附著幼蟲的存活、生長，所以在施氏獺蛤幼蟲變態(tài)期應適時投放附著器可提高幼蟲的成活率［6］，同時，附著基的種類是影響貝類幼蟲變態(tài)和稚貝生長的重要因素［23-27］。實驗結(jié)果表明不同附著基上幼苗的日生長率和成活率差異顯著，從幼蟲殼長日生長率來看，河口沉積泥＞附著板＞細砂＞聚乙烯網(wǎng)片＞遮光網(wǎng)，從存活率來看，附著板＞細砂＞聚乙烯網(wǎng)片＞遮光網(wǎng)＞河口沉積泥。通過考察生長和存活兩個指標，施氏獺蛤幼蟲附著階段，采用附著板作為附著基培育效果最好。以河口沉積泥作為附著基，其生長率要高出其他附著基組，這可能與施氏獺蛤附著幼蟲和稚貝的生長不僅需要餌料的補充，而且與沉積泥中含有豐富的微量元素供附著幼蟲和稚貝攝取有關(guān)，河口沉積泥促進附著幼蟲和稚貝生長的機制有待進一步研究。然而，從存活率來看，河口沉積泥作為附著基，附著幼蟲和稚貝的存活率最低，這與沉積泥中沉積的附著幼蟲和稚貝排泄的糞便和死亡的藻類，容易滋生原生動物和細菌，水質(zhì)易于惡化有關(guān)。

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（責任編輯：陳莊）

Studies on Large Scale Artificial Breeding of Lutraria sieboldii

WANG Bin1，LI Zhi-min1，LIU Zhi-gang1，LIUFU Shao-min2，F(xiàn)ENG Xiao-long2
（1.Fisheries College of Guangdong Ocean University，Zhanjiang 524025，China；2.Zhanjiang Silver Wave Marine Biotechnology Company Ltd.，Zhanjiang 524022，China）

A large scale artificial breeding of Lutraria sieboldii was conducted in 2013.The results showed that by adopting methods of bottom culture in sand，feeding with microalgae，egg yolk and starch，the survival rate of parent shellfish reached 89.7%.Gonadal maturation rates of male and female parent shellfish were 89.1% and 78.7% respectively，and the amount of spawned eggs of per parent shellfish was 1.26 million，of which the fertilization rate reached 93.4%.Under the condition of water temperature of 25.5-26.5 and water salinity of 27.3-28.5，the first polar body（pb1）and the second polar body（pb2）were released respectively in15min and 25min after fertilization.About 35min after eggs fertilization，the second cell stage was formed.As the cells divided，their number continued to increase.After about 4 h 40min，6h 25min and 14 h ，gastrula，trochophore and D-shaped larvae was formed..Shell lengths of Lutraria sieboldii veliger larvae increased with the time extension by fed with three different diets，including Isochrysis zhanjiangensis，Isochrysiszhanjiangensis plus Chlorellavulgaris，and Chlorella vulgaris，reaching 130μm，118μm and 105μm.Cultivation effect was best with Isochrysis zhanjiangensis as opening diet after 5 days cultivation.Lutraria sieboldiiv larvaes increased markedly by using four diets including Isochrysis zhanjiangensis plus Chlorella vulgaris，Chlorella vulgaris plus Chaetoceros muelleri，Chaetoceros muelleri plus Isochrysis zhanjiangensis，Isochrysis zhanjiangensis plus Platymonas subcordiformis.Compared with other 3 diets，Chlorella vulgaris plus Chaetoceros muelleri was best for larvae cultivation from early umbo larvae to creeping larvae.The same 4 diets had markedly effects on Lutraria sieboldii from attachment larvae to spat.Compared with other 3 diets，zhanjiangensis，Isochrysiszhanjiangensis plus Platymonas subcordiformis were best for larvae cultivation，with growth rate of shell lengths of 209.8 μm·d-1.Secondly，growth rate of shell length was 201μm·d-1while fed Isochrysiszhanjiangensis plus Chlorella vulgaris.Growth and survival of Lutraria sieboldii larvae was affected by different attachment substances including shading network，polyethylene network film，sediment mud and attachment plate.Through observing growth and survival，attachment plate was the best attachment substance for Lutraria sieboldiiv larvae cultivation，with the growth rate of 252.4 μm·d-1andthe survival rate of62.6%.Through the two batch of seedling production，induced spawning rate of parent shellfish reached 90%，the average survival rate of larvae was 84.3%.Total spats（shell length 2.5-3.0mm）of 3180 were cultivated，and breeding rate of spat reached 33.1%.

Lutraria sieboldii；artificial breeding；condition；feeding technique；attachment substance

S968.31

A

1673-9159（2015）01-0035-08

2014-12-05

廣東省科技廳產(chǎn)學研項目（2011B090400216）；廣東省海洋與漁業(yè)局項目（A201001H01）；高校重大科研成果培育計劃項目（GDOU2013050326）

王斌，2015屆水產(chǎn)養(yǎng)殖本科生。Email：wangbinscyz@163.com

栗志民，副教授。Email：lizhimin811@163.com