DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合化療治療晚期結(jié)直腸癌的臨床探討

張建剛　葉知鋒　黃伶　黃挺　張志娣

DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合化療治療晚期結(jié)直腸癌的臨床探討

張建剛?cè)~知鋒黃伶黃挺張志娣

目的 探討樹突狀細(xì)胞-細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（DC-CIK）聯(lián)合化療對晚期結(jié)直腸癌的療效。方法 回顧性分析42例行DCCIK細(xì)胞療法聯(lián)合化療的晚期結(jié)直腸癌患者的臨床資料，采用1：1配對的方法，選擇同期單獨行化療的42例晚期結(jié)直腸癌患者作為對照組。對兩組的有效率（RR）、疾病控制率（DCR）、生存期及無疾病進(jìn)展時間進(jìn)行觀察比較。結(jié)果 DC-CIK治療組患者的疾病控制率（DCR）明顯高于化療組（76.19% VS 52.38%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；治療組的中位生存期明顯高于化療組（17.5個月VS 13.3個月），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.008）。結(jié)論 DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合化療可以明顯提高晚期結(jié)直腸癌患者的疾病控制率，延長生存期。

晚期結(jié)直腸癌 DC-CIK細(xì)胞 疾病控制率 生存期

近30年來，隨著我國經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展及國民生活飲食方式的改變，結(jié)直腸癌的發(fā)病率和病死率已明顯升高，目前已位居常見惡性腫瘤的第4名。其中20%～25%的初診患者即為Ⅳ期，失去手術(shù)根治機(jī)會，治療以化療為主，但療效不滿意。因此需探索新的大腸癌治療手段，改善患者預(yù)后。以樹突狀細(xì)胞（Dendritic cell，DC）和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（Cytokine-induced killer cells，CIK）為基礎(chǔ)的腫瘤細(xì)胞免疫治療成為目前研究的熱點之一。自2010年4月至2014年6月間，作者采用DC-CIK細(xì)胞免疫治療聯(lián)合化療治療42例晚期結(jié)直腸癌患者，取得了較好的療效，現(xiàn)總結(jié)報道如下。

1　臨床資料

1.1一般資料 所選病例為本院行DC-CIK細(xì)胞免疫治療聯(lián)合化療的42例Ⅳ期結(jié)直腸癌患者，設(shè)為治療組；并按1：1配對選擇同期單獨行化療的42例Ⅳ期結(jié)直腸癌患者，設(shè)為對照組。治療組男24例，女18例；年齡≤60歲16例、＞60歲26例。對照組男22例，女20例；年齡≤60歲15例、＞60歲27例。入組標(biāo)準(zhǔn)：均為病理組織學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查確診的Ⅳ期結(jié)直腸癌患者；KPS評分≥60分；預(yù)計生存期≥3個月；血常規(guī)、肝腎功能及心肺功能基本正常；所有患者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：心臟及肝腎功能不全；合并其它惡性腫瘤者；不能配合治療及無法評估療效者。兩組性別、年齡、病理類型、轉(zhuǎn)移部位、化療方案等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2DC-CIK細(xì)胞的制備及回輸 取患者抗凝外周血50ml，常規(guī)Ficoll分離單個核細(xì)胞（PBMC）。PBMC用pH 7.4的PBS洗滌3次，將細(xì)胞按2×106/ml數(shù)量懸浮于10%的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)2h，棄上清液，獲得貼壁的PBMC。每孔加入rhGM-CSF、rhIL-4的完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)DC，第5天加入IL-1β、PGE-2、TNF-α，置37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h，獲得成熟的DC。PBMC經(jīng)pH 7.4的PBS洗滌3次，將細(xì)胞按2×106/ml數(shù)量懸浮于10%的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，加入TNF-γ、anti-CD3mAb、IL-2，誘導(dǎo)產(chǎn)生CIK。第7天將DC與CIK按照1：5比例混合培養(yǎng)5～7d，產(chǎn)生DC-CIK。收集12d誘導(dǎo)擴(kuò)增后獲得的DCCIK，用0.9%生理鹽水配成200ml液體靜脈回輸，1次/d，每次回輸細(xì)胞數(shù)約1×109，連續(xù)6次為1個療程。

1.3治療方法 患者按治療方式不同分為兩組：（1）DC-CIK治療組：接受FOLFOX、XELOX、希羅達(dá)單藥等方案化療，聯(lián)合DC-CIK細(xì)胞免疫治療?；熃Y(jié)束后5～7d開始行DC-CIK細(xì)胞回輸治療，回輸前予地塞米松或異丙嗪針常規(guī)抗過敏預(yù)處理。每例患者行≥2個療程的DC-CIK細(xì)胞免疫治療。（2）對照組：單純接受FOLFOX、XELOX、希羅達(dá)單藥等方案化療。

1.4觀察指標(biāo) 主要終點評價指標(biāo)為生存時間，次要終點評價指標(biāo)為無進(jìn)展生存時間、近期療效及不良反應(yīng)。生存時間（OS）的計算由患者入組接受治療開始，直至任何原因的死亡或最后1次隨訪。無進(jìn)展生存時間（PFS）的計算由患者入組接受治療開始，直至腫瘤進(jìn)展或最后1次隨訪。

1.5療效評價 根據(jù)1999年美國臨床腫瘤學(xué)年會提出的實體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行療效評價，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩(wěn)定（SD）和疾病進(jìn)展（PD），有效率（RR）=（CR+PR）/（CR+PR+SD+PD），疾病控制率（DCR）=（CR+PR+SD）/（CR+PR+SD+PD）。

1.6不良反應(yīng)和隨訪 （1）不良反應(yīng)：根據(jù)美國國立癌癥研究所制定的通用藥物毒性反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)，將各種不良事件分為0～Ⅳ度。（2）隨訪：全部病例隨訪至2014年6月30日，無失訪病例，隨訪率為100%。

1.7統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件。采用Kaplan-Meier生存曲線和Logrank test檢驗比較兩組總生存率及無進(jìn)展生存率。計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1療效評價 DC-CIK治療組的RR為45.24%，對照組的RR為28.57%，兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.113）；DC-CIK治療組的DCR為76.19%，對照組的DCR為52.38%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.023），見表1。

表1　兩組患者的臨床療效比較（n）

2.2生存分析 DC-CIK治療組和對照組的中位生存期（mOS）分別為17.5個月（95%CI，15.34～19.66）、13.3個月（95%CI，12.22～14.38）。Kaplan-Meier生存曲線和Logrank test檢驗結(jié)果表明，治療組的生存期明顯長于化療組（χ2=7.024，P=0.008）。見圖1。

2.3無進(jìn)展生存分析 DC-CIK治療組和化療組的中位無進(jìn)展生存期（mPFS）分別為6.3個月（95%CI，5.41～7.19）、5.1個月（95%CI，4.52～5.68）。Kaplan-Meier生存曲線和Logrank test檢驗結(jié)果表明，治療組的無進(jìn)展生存期明顯長于對照組（χ2=8.384，P=0.004）。見圖2。

2.4不良反應(yīng)觀察 治療組42例患者，有4例在回輸DC-CIK細(xì)胞的過程中出現(xiàn)低熱（體溫＜38.5℃），無需特殊處理，自行降至正常。對心、肝和腎功能未見有明顯影響，亦未見其它嚴(yán)重不良反應(yīng)。

3　討論

圖1　兩組總生存率比較

圖2　兩組無進(jìn)展生存率比較

目前晚期結(jié)直腸癌的主要治療方法為化療及支持治療，但常規(guī)化療的療效已達(dá)平臺期，故需聯(lián)合其他治療方法以改善患者的預(yù)后。腫瘤免疫治療既能直接殺滅腫瘤細(xì)胞又能增加機(jī)體的免疫功能，無明顯不良反應(yīng)，已成為抗腫瘤治療的第4個主要治療方法［1］。其中，DC-CIK是該領(lǐng)域中極具發(fā)展前景的免疫細(xì)胞，已在多種惡性腫瘤的治療中取得一定的療效，但在晚期結(jié)直腸癌中運用報道較少。

CIK是一種新型的過繼免疫細(xì)胞，兼有T淋巴細(xì)胞特異性殺傷及自然殺傷（NK）細(xì)胞非主要組織相容性復(fù)合體（MHC）限制性殺傷能力［2］，其抗腫瘤活性強(qiáng)于以往的LAK細(xì)胞、CD3AK細(xì)胞。多項研究發(fā)現(xiàn)，CIK細(xì)胞對耐藥的腫瘤細(xì)胞也有殺傷作用［3，4］，故CIK細(xì)胞治療與化療聯(lián)合運用可產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。DC作為已知功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞，是激活機(jī)體特異性抗瘤應(yīng)答的關(guān)鍵，可有效抵制腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸機(jī)制。國內(nèi)有研究［5］表明：實體腫瘤病灶內(nèi)DC浸潤程度與患者預(yù)后有關(guān)，浸潤DC數(shù)量高者，預(yù)后好。DC與CIK是高效和諧的腫瘤免疫治療的兩個重要組成部分，前者識別病原，激活獲得性免疫系統(tǒng)，后者通過發(fā)揮自身細(xì)胞毒性和分泌細(xì)胞因子殺傷腫瘤細(xì)胞。DC與CIK共同培養(yǎng)后不僅能促進(jìn)CIK細(xì)胞增殖、分化和增強(qiáng)細(xì)胞毒活性，而且能提高DC遞呈抗原的特異性和促進(jìn)DC的成熟［6］，從而發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤的作用。

CIK抗腫瘤作用機(jī)制尚未完全明了，既往研究提示可能為以下途徑：（1）CIK對腫瘤細(xì)胞的直接殺傷作用。CIK通過粘附因子LFA/ICAM-1途徑與腫瘤細(xì)胞結(jié)合，釋放顆粒酶和穿孔素，使腫瘤細(xì)胞裂解死亡［7］；（2）CIK能促進(jìn)凋亡相關(guān)蛋白合成，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及壞死［8］；（3）CIK可分泌多種細(xì)胞因子，對腫瘤細(xì)胞有直接抑制作用，還能調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)間接殺傷腫瘤細(xì)胞。國內(nèi)有學(xué)者［9］報道，化療聯(lián)合CIK治療的結(jié)直腸癌患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均顯著高于化療前，提示CIK治療可顯著改善患者的免疫功能。

多項研究［10，11］亦表明，化療聯(lián)合DC-CIK細(xì)胞免疫治療比單純化療不僅可以提高晚期腫瘤患者的免疫功能，還可以提高患者的DCR，延長無疾病進(jìn)展時間，改善生活質(zhì)量，且不良反應(yīng)少。本資料結(jié)果顯示，化療聯(lián)合DC-CIK細(xì)胞免疫治療比單純化療可以提高晚期結(jié)直腸癌患者的DCR，延長總生存期及無進(jìn)展生存期，不良反應(yīng)可耐受。至于兩組患者的RR差異不明顯的原因，考慮可能與入組患者腫瘤分期晚（均為Ⅳ期）、惡性度高（低分化腺癌占比較高）及病例數(shù)較少有關(guān)，也有可能與免疫治療起效較慢而不適合目前實體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)。因此，DC-CIK細(xì)胞免疫治療作為一種新興的抗腫瘤輔助治療手段，只有與手術(shù)、放化療等有機(jī)結(jié)合，才能獲得更好的臨床療效。

綜上所述，DC-CIK細(xì)胞聯(lián)合化療治療晚期結(jié)直腸癌患者的療效確切，不良反應(yīng)少，值得臨床推廣。

1Rosenberg SA，Restifo NP，Yang JC，et al.Adoptive cell transfer：a clinical path to effective cancer immunotherapy.Nat Rev Cancer，2008，8（4）：299～308.

2Peng Wang，Jinpu Yu，Songyuan Gao，et al.Experimental study on the treatment of intracerebral glioma xenograft with human cytokineinduced killer cells. Cellular Immunol，2008，253（1～2）：59～65.

3李世俊，張連生，柴曄，等.樹突狀細(xì)胞與細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞共培養(yǎng)對多藥耐藥腫瘤細(xì)胞系的殺傷活性.中華腫瘤雜志，2007，29（10）：733～737.

4Niu Q，Wang W，Li Y，et al.Cord blood-derived cytokine-induced killer cells biotherapy combined with second-line chemotherapy in the treatment of advanced solid malignancies. Int Immunopharmac ol，2011，11（4）：449～456.

5龔選舉，閻玉虎，吳建平，等.肺癌組織中腫瘤浸潤樹突狀細(xì)胞對預(yù)后的影響.中華腫瘤雜志，2000，22（2）：135～137.

6Wang YF，Kunda PE，Lin PE，et al.Cytokine-induced killer cells cocultured with complete tumor antigen-loaded dendritic cells，have enhanced selective cytotoxicity on carboplatin-resistant retinoblastoma cells. Oncol Rep，2013，29（5）：1841～1850.

7Marten A，Ziske C，Schottker B，et al.Interactions between dendritic cells and cytokine-induced killer cells lead to an activation of both populations. Immunother，2001，24（6）：502～510.

8Verneris MR，Kornacker M，Mailander V，et al. Resistance of ex vivo expanded CD3+CD56+T cells to Fas-mediated apoptosis. Cancer Immunol Immunother，2000，49（6）：335～345.

9張京雨，張曉明.CIK細(xì)胞過繼性免疫治療對結(jié)直腸癌化療患者免疫指標(biāo)的影響 . 腫瘤學(xué)基礎(chǔ)與臨床，2009，22（1）：51.

10Yang L，Ren B，Li H，et al. Enhanced anti-tumor effects of DC-activated CIKs to chemotherapy treatment in a single cohort of advanced non-small cell lung cancer patients. Cancer Immunol Immunother，2013，62（1）：65～73.

11Wu C，Jiang J，Shi L，et al. Prospective study of chemotherapy in combination with cytokine-induced killer cells in patients suffering from advanced non-small cell lung cancer. Anticancer Res，2008，28（6B）：3997～4002.

Objective To evaluate the effect of DC-CIK adoptive immunotherapy combined with chemotherapy in the treatment of advanced colorectal cancer. Methods We retrospectively analyzed 42 patients of advanced colorectal cancer treated with DC-CIK adoptive immunotherapy combined with chemotherapy and choose 42 patients at the same period as control treated only with chemotherapy.The response rate（RR），disease control rate（DCR），median overall survival time and progression-free survival time were investigated and compared between the two groups. Results The disease control rate in the DC-CIK treatment group was significantly higher than that in the chemotherapy group（76.19% VS 52.38%），and the difference was statistically significant（P＜0.05）.The median overall survival time in the DC-CIK treatment group was significantly longer than that in the chemotherapy group（17.5 VS 13.3months），and the difference was statistically significant（P=0.008）. Conclusion DC-CIK adoptive immunotherapy combined with chemotherapy could significantly improve the disease control rate and the overall survival time of patients with advanced colorectal cancer.

Advanced colorectal cancer DC-CIK cells Disease control rate Survival time

310007 杭州市中醫(yī)院腫瘤科