王 倩,高麗樸,鄭淑芳,史君彥,王 清
(北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心,北京100097)
乙烯受體LeETR-3缺失對(duì)鮮切番茄貯藏品質(zhì)的影響
王倩,高麗樸,鄭淑芳,史君彥,王清*
(北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心,北京100097)
果蔬鮮切后會(huì)產(chǎn)生傷乙烯,加快果蔬的后熟和衰老。本文以野生型(Wide-type,Wt型)和乙烯受體LeETR-3缺失型(Never-ripe,Nr突變型)兩個(gè)品種綠熟期番茄為實(shí)驗(yàn)材料,鮮切處理后于4℃貯藏,并在貯藏期間測定了番茄生理品質(zhì)指標(biāo)。結(jié)果表明:與Wt型番茄相比,Nr突變型番茄果皮亮度變暗和顏色轉(zhuǎn)紅發(fā)生推遲,呼吸強(qiáng)度明顯降低,失重?fù)p失減小,硬度下降延緩,可溶性固形物、可溶性糖、可滴定酸和VC含量下降緩慢,表明在貯藏期間Nr突變型番茄貯藏品質(zhì)能夠較好的得到保持。
乙烯受體,鮮切番茄,機(jī)械傷害,貯藏品質(zhì),生理
隨著生活節(jié)奏的加快和人們對(duì)生活質(zhì)量關(guān)注度的日益提高,鮮切果蔬(Fresh-cut fruits and vegetables)成為我國近幾年興起的一種新型果蔬加工產(chǎn)品[1]。因其具有品質(zhì)新鮮、營養(yǎng)衛(wèi)生且食用方便等特點(diǎn)日益受到消費(fèi)者青睞,且鮮切產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速。然而,切割機(jī)械傷會(huì)導(dǎo)致乙烯釋放量增加,即傷乙烯的生成,例如,切割誘導(dǎo)獼猴桃[2-4]、番茄[5]和南瓜[6]等果蔬產(chǎn)生大量的乙烯。鮮切番茄在西式快餐、自助餐食品產(chǎn)業(yè)中深受歡迎,番茄屬于典型的呼吸躍變型果實(shí),切割傷害誘發(fā)傷乙烯生成,呼吸速率迅速升高,風(fēng)味喪失等生理異常和品質(zhì)劣變[7-8]。
其中,傷乙烯在應(yīng)答機(jī)械性傷害中發(fā)生著信號(hào)傳遞,導(dǎo)致乙烯生理效應(yīng),致使組織自身代謝速率加快,呼吸作用加強(qiáng),從而加劇消耗大量的物質(zhì)和能量,導(dǎo)致組織的解體與衰老,失去新鮮產(chǎn)品特征和營養(yǎng)價(jià)值[9]。傷害誘導(dǎo)的傷乙烯是影響大多數(shù)鮮切果蔬品質(zhì)和縮短貨架期的重要生理因素,制約了鮮切果蔬的流通和市場拓展。
目前有研究從基因水平抑制乙烯受體來控制乙烯作用的方法[10],關(guān)于乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在番茄中研究比較深入,已經(jīng)從乙烯受體中分離出LeETR1、LeETR2、LeETR3、LeETR4、LeETR5這5個(gè)基因,其中與果實(shí)成熟和抗病性有密切關(guān)系的LeETR3(NR,Never ripe)基因研究比較熱門[11]。有文獻(xiàn)報(bào)道使用乙烯作用抑制劑1-甲基環(huán)丙烯(1-MCP)處理鮮切果實(shí),1-MCP與受體的結(jié)合會(huì)破壞乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),乙烯生理效應(yīng)的發(fā)揮受到抑制[12-13],較好地保持了鮮切果蔬的生理品質(zhì)。因此,以阻礙乙烯受體與乙烯結(jié)合為出發(fā)點(diǎn),本研究將野生型(Wide-type,Wt型)和乙烯受體LeETR-3缺失型(Never-ripe,Nr突變型)番茄為研究對(duì)象,通過在切割機(jī)械傷害脅迫下,觀察鮮切番茄果實(shí)貯藏期間品質(zhì)的變化,從生理生化水平闡明乙烯受體LeETR-3的缺失對(duì)鮮切番茄果實(shí)響應(yīng)機(jī)械性損傷的影響,為認(rèn)識(shí)乙烯在鮮切果蔬應(yīng)答機(jī)械性損傷防御反應(yīng)中的作用提供理論依據(jù)。
1.1材料與儀器
實(shí)驗(yàn)所用Wt型番茄(Solanum lycopersicum cv Ailsa Craig)、Nr突變型番茄種子獲贈(zèng)于中國科學(xué)院植物研究所,種植于北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜所溫室,挑選無病蟲害、無機(jī)械傷和大小一致的綠熟期番茄;蒽酮、硫酸、草酸、2,6-二氯酚靛酚鈉鹽、正己烷、乙醇、丙酮均為國產(chǎn)分析純;抗壞血酸(VC) 分析純,美國sigma公司。
低溫高速離心機(jī)德國Thermo;UV-1800分光光度計(jì)日本島津公司;CR-400色彩色差計(jì)、手持?jǐn)?shù)字折射儀日本;GXH-3051紅外線分析儀北京均方理化科技研究所;PE360電子天平瑞士;質(zhì)構(gòu)儀TA-XT plus 12133型英國。
1.2實(shí)驗(yàn)方法
用2%的次氯酸鈉溶液浸洗采摘后的果實(shí),并用流水洗凈晾干后,用鋒利的不銹鋼刀切成7mm薄片后隨機(jī)放置于白色保鮮盒中,再用保鮮膜封好后于4℃條件下貯藏。每組100g,每天進(jìn)行取樣測定,其中0d條件下的測定值為切后1h測得。
1.2.1色澤的測定兩個(gè)品種鮮切番茄從貯藏環(huán)境中取出后在室溫下(20℃)平衡1h,參照Holcroft等的方法[14],采用校正過的色彩色差計(jì)進(jìn)行顏色的測定。其中,L*為亮度值,a*正值表示紅色程度、負(fù)值表示綠色程度,對(duì)兩個(gè)品種鮮切番茄果皮的亮度、顏色進(jìn)行測定。
1.2.2呼吸強(qiáng)度的測定將100g樣品放入已知體積的玻璃密封容器中,在其貯藏溫度下放置2h,使用CO2紅外線分析儀進(jìn)行測定,根據(jù)以下公式進(jìn)行呼吸強(qiáng)度的計(jì)算:
式中:Q—呼吸強(qiáng)度,mgCO2·kg-1·h-1;F—?dú)怏w流速,mL·min-1;C—CO2濃度,μL·L-1;W—試樣質(zhì)量,kg;T—測定溫度,℃。
1.2.3失重率的測定采用稱質(zhì)量法,失重率(%)=(貯前重量—貯后重量)/貯前重量×100,重復(fù)三次[15]。
1.2.4硬度的測定用P/5圓柱形探頭刺入鮮切番茄橫切面,應(yīng)變達(dá)到10%時(shí)所需的最大壓力代表硬度。
1.2.5可溶性固形物的測定取適量果肉研磨成勻漿,用手持?jǐn)?shù)字折射儀測定其含量,結(jié)果用%表示。
1.2.6可溶性糖含量的測定采用蒽酮硫酸法[16]。
1.2.7可滴定酸的測定采用酸堿滴定法測定。
1.2.8維生素C的測定采用2,6-二氯酚靛酚鈉滴定法[17]
1.3數(shù)據(jù)處理
使用Excel對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,經(jīng)SPSS軟件進(jìn)行差異顯著性分析,Ducan法(新復(fù)極差法)檢驗(yàn)差異顯著性。
2.1果皮色澤的變化
L*、a*值能較好地反映果蔬的褐變情況。L*值代表鮮切番茄亮度,是貯藏過程中由于酶促褐變或色素聚集引起表層變暗的一個(gè)指標(biāo)性參數(shù),L*值越小,表示顏色的亮度越低,褐變?cè)絿?yán)重。由圖1(a)可見,在貯藏期間,鮮切番茄的亮度值均發(fā)生下降,顯示顏色逐漸變深,失去光澤。在貯藏期間Wt型番茄L*值呈現(xiàn)持續(xù)下降的趨勢,Nr突變型在0~1d迅速下降,但后期亮度降低緩慢,貯藏期間L*值均高于Wt型番茄的L*值。a*值是色品指數(shù),負(fù)值代表顏色為綠色。從圖1(b)中可以看出,a*值為負(fù)值并呈現(xiàn)上升趨勢,表明番茄表面趨于向紅色轉(zhuǎn)變,從整體來看,Wt型較Nr型轉(zhuǎn)紅明顯。從L*、a*值變化可以看出,與Wt型番茄相比,Nr突變型番茄果皮褐變情況較輕,果皮轉(zhuǎn)紅發(fā)生推遲。
圖1 Wt型和Nr突變型鮮切番茄果皮L*值(a)和a*值(b)的變化Fig.1 The change of peel brightness(a)and chromaticity(b)of fresh-cut tomato from Wt type and Nr mutant
2.2呼吸強(qiáng)度的變化
呼吸作用是造成果實(shí)品質(zhì)下降的重要原因之一。圖2顯示,Nr突變型番茄鮮切后,1d內(nèi)發(fā)生迅速下降后緩慢上升,在貯藏后期呼吸升高不明顯,呼吸強(qiáng)度受到抑制,變化幅度比較平穩(wěn)。而Wt型番茄切割后,第1d大幅度下降后又急劇上升,而后2~4d內(nèi)又發(fā)生下降,貯藏后期,呼吸速率升高,呼吸速率波動(dòng)幅度很大。在第2d和第5d出現(xiàn)兩次峰值,Wt型番茄呼吸強(qiáng)度達(dá)到153、173mgCO2·kg-1·h-1,顯著高于Nr突變型的33、54mgCO2·kg-1·h-1。
在相同條件下,呼吸強(qiáng)度的增幅越大,表示傷呼吸代謝活動(dòng)越強(qiáng),果實(shí)中糖、酸作為呼吸底物就越會(huì)被快速消耗,品質(zhì)下降地越快。受傷組織的呼吸強(qiáng)度上升也被認(rèn)為是乙烯增加的結(jié)果[18],Nr突變型番茄呼吸速率增幅緩慢,可能是由于乙烯無法與缺失的受體結(jié)合,因而阻斷了乙烯誘導(dǎo)的生理代謝反應(yīng),包括呼吸所必需酶的激活。此外,營養(yǎng)物質(zhì)消耗較少,衰老進(jìn)程減弱,能夠更好地保持鮮切番茄的品質(zhì)。
圖2 Wt型和Nr突變型鮮切番茄呼吸速率的變化Fig.2 The change of respiration intensity of fresh-cut tomato from Wt type and Nr mutant
2.3失重率的變化
果實(shí)采摘后,仍是活的有機(jī)體,但失去營養(yǎng)和水分的供給,番茄果實(shí)切割后細(xì)胞組織暴露于空氣中,容易發(fā)生蒸騰失水加快和干物質(zhì)大量損耗而造成其重量減少,且損失的程度會(huì)隨著貯藏期的延長而增加[19]。從圖3可以看出,番茄鮮切后,出現(xiàn)失重現(xiàn)象,且隨著貯藏期間延長,兩個(gè)品種的鮮切番茄失重率均呈持續(xù)上升趨勢,失重率逐漸增加。在貯藏第2d,Wt型番茄的失重率為0.40%,明顯高于Nr突變型番茄0.18%的失重率。貯藏末期的第7d,Wt型番茄失重率達(dá)到1.26%,明顯高于Nr突變型番茄一組。結(jié)果表明,Nr突變型番茄能更好地保持其鮮切后的新鮮度,從而維持較高的貯藏品質(zhì)。
圖3 Wt型和Nr突變型鮮切番茄失重率的變化Fig.3 The change of weight loss ratio of fresh-cut tomato from Wt type and Nr mutant
2.4硬度的變化
硬度是果蔬貯藏重要的品質(zhì)指標(biāo),綠熟期番茄組織中,存在的果膠物質(zhì)使其表現(xiàn)較硬的狀態(tài),番茄鮮切后,細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性發(fā)生破壞,影響組織的硬度。且隨著貯藏時(shí)間的延長,果實(shí)變軟,硬度下降。如圖4所示,在貯藏7d過程中,兩品種番茄硬度整體均發(fā)生下降,但Nr突變型番茄比Wt型番茄下降速率低。在貯藏初期,兩品種硬度分別為10.6和10.9N,差異不明顯。但在貯藏后第7d,Nr突變型番茄硬度比Wt型番茄高10.6%。表明Nr突變型番茄能更好的保持果實(shí)硬度,延緩了番茄整個(gè)貯藏期間果實(shí)硬度的下降。
圖4 Wt型和Nr突變型鮮切番茄硬度的變化Fig.4 The change of firmness of fresh-cut tomato from Wt type and Nr mutant
2.5可溶性固形物含量的變化
綠熟番茄隨著果實(shí)的進(jìn)一步成熟,果實(shí)中的可溶性固形物含量會(huì)有所增加。番茄鮮切后傷呼吸代謝活性增強(qiáng),呼吸基質(zhì)快速消耗,可溶性固形物含量也會(huì)發(fā)生變化,可溶性固形物可以反映果蔬的品質(zhì)和后熟情況[20]。Wt型番茄呼吸強(qiáng)度明顯高于Nr突變體番茄,消耗的可溶性固形物相對(duì)會(huì)多。如圖5所示,兩個(gè)品種番茄鮮切后在貯藏期間內(nèi),可溶性固形物含量變化均呈上升趨勢,但在貯藏的第2d和第7d,Nr突變體番茄較Wt型番茄可溶性固形物含量差異不大,表明相比于Nr突變體番茄,Wt型番茄在貯藏期間由于后熟而導(dǎo)致的可溶性固形物含量增加量高,Nr突變體番茄能更好的保持品質(zhì),延緩果實(shí)的成熟。
圖5 Wt型和Nr突變型鮮切番茄可溶性固形物含量的變化Fig.5 The change of soluble solids content of fresh-cut tomato from Wt type and Nr mutant
2.6可溶性糖含量的變化
果蔬鮮切后所有代謝生命活動(dòng)所需的能量和物質(zhì)主要來源于果蔬組織中糖的氧化分解。果蔬中可溶性糖含量的高低與其品質(zhì)、成熟度和貯藏性密切相關(guān),是果蔬組織中重要的能量貯藏物質(zhì),也是果蔬呼吸作用的主要底物[21]。如圖6所示,Nr突變體番茄和Wt型番茄鮮切后在貯藏期間內(nèi),可溶性糖含量變化均發(fā)生下降,而Nr突變體品種番茄降低速度相對(duì)緩慢。貯藏第0d,Wt突變體番茄和Nr型番茄可溶性糖含量為0.747和0.740mg·g-1,相差不大。但到貯藏的第7d,兩個(gè)品種的可溶性糖含量分別下降至0.622和0.684mg·g-1。整個(gè)貯藏期間,Nr型番茄可溶性糖含量下降速率比Wt突變體番茄要緩慢,能更好地維持番茄的可溶性糖含量。
圖6 Wt型和Nr突變型鮮切番茄可溶性糖含量的變化Fig.6 The change of soluble sugar content of fresh-cut tomato from Wt type and Nr mutant
2.7可滴定酸含量的變化
果蔬鮮切后仍具有代謝活性,在貯藏期間內(nèi)仍進(jìn)行著新陳代謝活動(dòng),有機(jī)酸作為呼吸作用底物被不斷分解消耗,另外還有部分有機(jī)酸被轉(zhuǎn)化為糖類等其他物質(zhì)。因此,隨著果實(shí)的成熟,可滴定酸含量逐漸減少。圖7顯示鮮切番茄在貯藏期內(nèi),可滴定酸含量呈現(xiàn)減小的趨勢,并且從鮮切番茄貯藏期內(nèi)呼吸速率的變化情況可以看出,第1~2d和第4~5d呼吸速率迅速增強(qiáng),在此相同過程中,可滴定酸含量同時(shí)發(fā)生明顯下降,可能是與鮮切后番茄呼吸強(qiáng)度相關(guān),并且是呈正相關(guān)性。從圖7可以看出,Nr突變體番茄和Wt型番茄兩個(gè)品種在整個(gè)貯藏過程中,Nr突變型番茄可滴定酸含量比Wt型番茄高,在貯藏末期,Nr突變型番茄可滴定酸含量為0.45%,高于Wt型番茄0.38%的可滴定酸含量,減少酸含量的消耗和轉(zhuǎn)化,保持番茄較高的酸含量。
圖7 Wt型和Nr突變型鮮切番茄可滴定酸含量的變化Fig.7 The change of titratable acid content of fresh-cut tomato from Wt type and Nr mutant
2.8VC含量的變化
VC是新鮮果蔬中最重要的維生素源,其含量是反映鮮切番茄品質(zhì)的重要指標(biāo),果實(shí)在發(fā)育早期就含一定的VC,在脫離母體后的綠熟期,VC的合成仍會(huì)少量的進(jìn)行。但從圖8可以看出,在貯藏過程中VC含量均發(fā)生減少,可能是由于番茄鮮切后,呼吸作用加強(qiáng),消耗使得有機(jī)物逐漸減少,合成VC的底物不足,且VC不穩(wěn)定,容易被接觸的空氣氧化還原,使得果蔬在遭受機(jī)械傷害后會(huì)使得VC含量發(fā)生迅速的下降[22]。圖8中,兩個(gè)品種番茄在整個(gè)貯藏期間,VC含量發(fā)生減少,但Nr突變型番茄較Wt型番茄下降趨勢較緩。且Wt型番茄VC含量下降42%,而Nr突變型番茄中VC含量只下降25%,VC的流失得到延緩,能更好地保持番茄的貯藏品質(zhì)。
圖8 Wt型和Nr突變型鮮切番茄Vc含量的變化Fig.8 The change of vitamin C content of fresh-cut tomato from Wt type and Nr mutant
番茄鮮切后仍然是具有生命代謝的有機(jī)體,切割產(chǎn)生的傷乙烯誘導(dǎo)一系列與果實(shí)后熟相關(guān)的生理反應(yīng),造成傷呼吸急劇升高,呼吸作用的底物消耗加快,發(fā)生褐變等品質(zhì)劣化,貯藏期縮短,降低商品價(jià)值,已經(jīng)成為果實(shí)加工貯藏保鮮的主要障礙之一[23-24]。盡管目前對(duì)果實(shí)中乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的途徑已經(jīng)研究的比較深入,但對(duì)于鮮切果蔬響應(yīng)機(jī)械傷害的機(jī)制特別是傷乙烯的應(yīng)答機(jī)制,仍缺乏深層次系統(tǒng)的研究。
通過對(duì)Wt型番茄和Nr突變型番茄兩個(gè)品種番茄鮮切后貯藏期間品質(zhì)的分析研究,結(jié)果表明,乙烯受體LeETR-3缺失型番茄能夠較好地提高貯藏品質(zhì)。其機(jī)理可能是由于乙烯感知受體的缺失,切割誘發(fā)的傷乙烯無法與其正常結(jié)合,從而能夠抑制乙烯所誘導(dǎo)的與果實(shí)后熟相關(guān)的一系列生理生化反應(yīng)。從生理生化角度證實(shí)乙烯受體LeETR-3的缺失對(duì)應(yīng)答機(jī)械性損傷的影響,進(jìn)一步提供乙烯參與損傷防御反應(yīng)的理論依據(jù)。此外,探索果實(shí)應(yīng)答鮮切機(jī)械傷害的機(jī)理對(duì)番茄鮮切品種的選育也有著重要的理論指導(dǎo)意義。但仍需要進(jìn)一步從分子、蛋白水平更深層次的系統(tǒng)研究乙烯應(yīng)答鮮切機(jī)械性損傷的防御反應(yīng)。
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Effect of ethylene receptor LeETR-3-deficient on storage quality of fresh-cut tomato
WANG Qian,GAO Li-pu,ZHENG Shu-fang,SHI Jun-yan,WANG Qing*
(Vegetable Research Center,Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences,Beijing 100097,China)
The wound ethylene was produced by fresh-cut,which accelerates the ripening and senescence of fruits and vegetables.The quality change of green-ripe tomato from two different cultivars,wild-type and ethylene receptor LeETR-3-deficient(Never-ripe,Nr)mutant was investigated during storage at 4℃ after fresh-cut processing.Results showed that Nr mutant fruit skin changing to red was retarded,weight loss and the respiration intensity was inhibited,fruit firmness was well maintained,also the decrease of soluble solids,soluble sugar,titratable acid,vitamin C and the chlorophyll’s-degrading of fresh-cut tomato was mitigated compared with the Wt-type,revealing an excellent fresh-keeping effect of Nr mutant tomato during storage.
ethylene receptor;fresh-cut tomato;mechanical damage;storage quality;physiological
TS255.3
A
1002-0306(2015)10-0330-05
10.13386/j.issn1002-0306.2015.10.061
2014-06-23
王倩(1988-),女,碩士研究生,研究員助理,研究方向:農(nóng)產(chǎn)品貯藏與加工。
王清(1979-),女,博士,副研究員,研究方向:農(nóng)產(chǎn)品貯藏與加工。
國家自然科學(xué)基金(31101364);蔬菜加工流通品質(zhì)控制關(guān)鍵技術(shù)研究(D131100000913002);北京市果類蔬菜創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)(GCTDZJ2014033017)。