苦參堿制劑及其透皮制劑的皮膚刺激性試驗(yàn)

楊良月　常建華　曹曉東　吳樹清*　王新生，3　王 赫　王 喬　錢琳娜

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特　010018；

2.內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特　010031；

3.內(nèi)蒙古烏蘭察布市冷凍精液站，內(nèi)蒙古烏蘭察布　012000）

苦參堿制劑及其透皮制劑的皮膚刺激性試驗(yàn)

楊良月1常建華2*曹曉東1吳樹清1*王新生1，3王 赫1王 喬1錢琳娜1

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010018；

2.內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010031；

3.內(nèi)蒙古烏蘭察布市冷凍精液站，內(nèi)蒙古烏蘭察布012000）

目的：觀察苦參堿制劑和苦參堿透皮制劑作為外用藥的安全性。方法 根據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版），對(duì)家兔進(jìn)行皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：苦參堿制劑對(duì)皮膚無(wú)刺激性；苦參堿透皮制劑對(duì)皮膚有輕度刺激。結(jié)論：苦參堿制劑及苦參堿透皮制劑外用安全。

苦參堿透皮劑皮膚刺激性

苦參堿最早是從苦參植物是從苦豆子中提取、分離、提純的一種單生物堿，國(guó)內(nèi)外調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)其具有抗寄生蟲和抑菌消炎作用，尤其對(duì)蠕蟲類1、原蟲類、體外寄生蟲均有良好的治療效果，前提為進(jìn)一步探討臨床用藥的安全性和透皮劑對(duì)苦參堿透皮吸收的促進(jìn)作用，設(shè)計(jì)了皮膚刺激性試驗(yàn)，旨在研究苦參堿制劑經(jīng)皮給藥后在不影響抗寄生蟲的同時(shí)其的安全性問(wèn)題。

1　試驗(yàn)材料

試驗(yàn)藥品：苦參堿透皮制劑，規(guī)格為500 ml∶25 g；苦參堿制劑，規(guī)格為500 ml：25 g，內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院提供，透明液體制劑；兩種藥用蒸餾水各稀釋100倍，避光保存待用。

試驗(yàn)動(dòng)物：日本大耳白兔12只，雌雄各半，體重2±0.5 kg，購(gòu)自內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

2　試驗(yàn)方法

2.1皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)

2.1.1單次皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)

2.1.1.1 試驗(yàn)預(yù)處理

根據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）的操作規(guī)程在試驗(yàn)前24h用寵物脫毛器對(duì)背部?jī)蓚?cè)正常無(wú)破損區(qū)域進(jìn)行脫毛處理，去毛范圍為 15 cm×15 cm。

2.1.1.2 試驗(yàn)操作

分組：受試兔子隨機(jī)分為A組、B組兩組，每組6只；保定：助手對(duì)兔子進(jìn)行手動(dòng)保定；分區(qū)：將兔子背部右側(cè)定為對(duì)照區(qū)，左側(cè)定為試驗(yàn)區(qū)，每側(cè)有前后2個(gè)區(qū)，前面為完整皮膚試驗(yàn)區(qū)，后面為破損皮膚試驗(yàn)區(qū)；實(shí)驗(yàn)操作：破損皮膚試驗(yàn)區(qū)用注射器針頭劃“井”字破口，破損區(qū)面積 1.5 cm×1.5 cm，劃痕間距 1 cm，以輕度滲血不傷及真皮為度。完整皮膚試驗(yàn)區(qū)用記號(hào)筆標(biāo)記1.5 cm×1.5 cm區(qū)域。受試兔子隨機(jī)分為A、B兩組，每組6只，兔子右側(cè)每個(gè)受試區(qū)給予對(duì)照物蒸餾水 0.5 ml，左側(cè)每個(gè)受試區(qū)A組給予苦參堿制劑0.5 ml，B組給予苦參堿透皮制劑0.5 ml（使用前搖勻），用棉棒涂抹面積1.5 cm×1.5 cm，加2層紗布覆蓋保護(hù)，用膠布固定。每只兔子給予單獨(dú)籠子飼養(yǎng)。24 h 后用蘸有蒸餾水的紗布擦除受試物，溫水洗凈，分別于去除受試物后 10 min，20 min，1 h，2 h，24 h，48 h，72 h 觀察涂敷部位有無(wú)紅斑和水腫情況，以及上述變化的恢復(fù)時(shí)間和情況。根據(jù)表1、表2對(duì)結(jié)果進(jìn)行處理分析。

2.1.2多次皮膚刺激性試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備同單次皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)，每日涂抹藥量為0.5 ml，24 h后用蒸餾水清除殘留受試物并觀察病變，連續(xù)涂抹10 d。從第2 d開始，每次涂抹前剪毛，24 h后觀察結(jié)果，記錄每天紅斑及水腫情況（標(biāo)準(zhǔn)參照表1），并觀察涂抹部位是否有色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙（或菲?。┣闆r，同時(shí)記錄其發(fā)生時(shí)間及消退時(shí)間。根據(jù)表1、表2對(duì)結(jié)果進(jìn)行積分處理，結(jié)果見表3。

3　結(jié)果及評(píng)價(jià)

對(duì)參試動(dòng)物皮膚變化進(jìn)行病理觀察，結(jié)果詳見圖1和圖2。

圖1　單次給藥皮膚狀況攝影

圖2　長(zhǎng)期給藥皮膚狀況攝影

從圖1可以看出，兔子背部正常皮膚與破損皮膚出現(xiàn)淡粉色輕微紅染，局部隆起。

從圖2可以看出，外觀可見皮膚紅腫，皮膚角質(zhì)層增厚，局部脫落。

圖3　長(zhǎng)期試驗(yàn)的透皮制劑組病理圖片

從圖3可以看出，病理組織觀察，角質(zhì)層增厚分層并逐漸脫落，真皮的纖維組織水腫導(dǎo)致纖維粗細(xì)雜亂真皮的纖維組織水腫導(dǎo)致纖維粗細(xì)不均，染色深淺不一，毛細(xì)血管內(nèi)充血。

單次給藥皮膚刺激性試驗(yàn)，按照表 1 的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算每一觀察時(shí)間點(diǎn)各組受試物以及對(duì)照品皮膚反應(yīng)積分的平均分值，按表2 進(jìn)行刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。

表1　單次皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表2　單次皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

單次皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)積分見表3

表3　單次皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)積分

3.1單次皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

單次皮膚刺激性試驗(yàn)中，對(duì)照區(qū)域皮膚無(wú)對(duì)照組無(wú)任何眼觀及病理變化；苦參堿制劑試驗(yàn)組的完整皮膚實(shí)驗(yàn)區(qū)無(wú)眼觀變化，破損皮膚實(shí)驗(yàn)區(qū)有輕微紅腫現(xiàn)象，屬于皮膚破損后的正常反應(yīng)，觀察168 h后破損皮膚恢復(fù)完全，無(wú)紅腫、變厚、色素沉著等現(xiàn)象。病理切片觀察，無(wú)明顯病理變化。皮膚均分為皮膚積分為0，臨床用藥安全，基本無(wú)刺激性。

苦參堿透皮制劑組的完整皮膚實(shí)驗(yàn)區(qū)在除去受試物1h開始出現(xiàn)紅腫反應(yīng)，在24 h內(nèi)紅腫反應(yīng)明顯，之后紅腫現(xiàn)象開始減輕，并紅腫逐漸消退，皮膚角質(zhì)層形成鱗片狀皮屑，120 h紅腫現(xiàn)象基本消失，受試部位仍然有局部增厚現(xiàn)象，皮屑逐漸脫落。240 h皮膚外觀無(wú)紅腫、變厚現(xiàn)象，無(wú)色素沉著，殘余部分皮屑。破損皮膚實(shí)驗(yàn)區(qū)跟完整皮膚實(shí)驗(yàn)區(qū)基本相同，皮膚愈合良好，眼觀未見鱗狀皮屑，無(wú)色素沉積。

3.2多次皮膚給藥刺激實(shí)驗(yàn)結(jié)果

多次皮膚刺激試驗(yàn)中，眼觀苦參堿制劑實(shí)驗(yàn)組完整皮膚區(qū)和破損皮膚區(qū)無(wú)紅腫、變厚和色素沉著。與單次皮膚給藥反應(yīng)基本相同。病理切片觀察，表皮角質(zhì)層增生，輕微脫落，彈性纖維輕微水腫無(wú)斷裂，毛囊結(jié)構(gòu)正常。

苦參堿透皮制劑組的完整皮膚實(shí)驗(yàn)區(qū)從第2 d開始出現(xiàn)紅腫、表皮及皮下組織增厚、可見用藥區(qū)域表皮隆起；第4天時(shí)開始出現(xiàn)鱗片狀皮屑，隨實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行逐漸脫落，直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。用藥區(qū)域無(wú)色素沉積。病理切片觀察，皮膚纖維組織水腫，分布間隙變大，有單核細(xì)胞浸潤(rùn)。表皮的角質(zhì)層增生，分出多層，局部脫落，裸露出棘細(xì)胞層，棘細(xì)胞層變薄，棘細(xì)胞水腫；真皮纖維水腫斷裂，分布疏松，粗細(xì)不均，著色深淺不一，毛囊周圍小血管充血出血明顯，毛細(xì)血管上皮細(xì)胞水腫。

4　結(jié)論及討論

對(duì)照兩實(shí)驗(yàn)組可見，添加透皮吸收劑的實(shí)驗(yàn)組藥物對(duì)機(jī)體的刺激性比未添加透皮劑的組織刺激性大、藥物吸收多。根據(jù)病理切片觀察，紅腫部分主要有毛細(xì)血管充血紅腫部分主要由毛細(xì)血管充血、出血；真皮纖維層纖維水腫等原因造成。炎性細(xì)胞滲出較少。對(duì)照兩組破損皮膚區(qū)域，涂藥的破損皮膚的紅腫反應(yīng)相對(duì)較有輕微紅腫，無(wú)細(xì)菌感染，傷口恢復(fù)得也較快。證明苦參堿有抗炎、抗菌的作用。與周重楚（6）等人的研究相符。

實(shí)驗(yàn)中單次給藥實(shí)驗(yàn)中，未添加透皮吸收劑的實(shí)驗(yàn)組單次及多次給藥實(shí)驗(yàn)中，皮膚均無(wú)紅腫、變厚和色素沉著。證明苦參堿制劑在臨床上使用安全，無(wú)刺激性，與張?jiān)谄剑?］等人的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。而添加了透皮劑的實(shí)驗(yàn)組輕微水腫、充血效果不明顯、角質(zhì)層輕微脫落，炎性細(xì)胞少量滲出較少，證明苦參堿可以刺激局部皮膚發(fā)生輕微水腫反應(yīng)，但刺激性不強(qiáng)。

對(duì)照長(zhǎng)期試驗(yàn)兩實(shí)驗(yàn)組的病理切片，未添加透皮劑的皮膚炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較少，毛囊無(wú)任何病理變化；添加了透皮制劑的實(shí)驗(yàn)組，纖維層的水腫斷裂、間隙變大；棘細(xì)胞層的細(xì)胞層數(shù)輕微增多、細(xì)胞水腫，但小血管的紅細(xì)胞滲出少。說(shuō)明未添加透皮劑的皮膚藥物滲入皮膚的速度較慢、藥量較少，對(duì)皮膚的刺激是添加了透皮制劑皮膚病變的初期，對(duì)實(shí)質(zhì)組織的傷害極小，所以無(wú)任何眼觀病變，添加了苦參堿透皮制劑的皮膚由于吸收速度快，吸收量大迅速，所以刺激明顯，病變明顯。

本實(shí)驗(yàn)在苦參堿制劑中添加透皮劑后，證明可以使藥物能更好地滲透進(jìn)入皮膚內(nèi)，可提高藥物的生物利用度和藥效，但由于透皮制劑跟苦參堿制劑混合后為乳濁液，使用前需要充分混勻，下一步需要研究促進(jìn)二者互溶的問(wèn)題，使臨床用藥更加方便。

［1］ 蘇利波，張西臣.苦參抗寄生蟲的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)病原生物學(xué)雜志，2008，（6）：471-473.

［2］ 鄒渭洪，付成效，畢津蓮，等.氮酮、丙二醇對(duì)濕疹噴霧劑中黃芩苷透皮吸收的影響［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2012，（22）：32-34.

［3］ 孔福明.香妃夏露的皮膚刺激性和長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究［J］.國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2006，12（18）：189-191.

［4］ 張?jiān)谄剑畼淅?，解?guó)梁，等.苦豆子抑菌洗液皮膚刺激性研究［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，（3）：498-499，503.

［5］ 周重楚.苦豆子的抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)作用［J］.中國(guó)藥理學(xué)報(bào)，1989，10（4）：360.

楊良月（1988-），男，漢族，河北省邢臺(tái)市人。內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院碩士研究生，主要研究方向?yàn)榉雌c動(dòng)物抗病性能研究。

吳樹清（1957-），男，蒙古族，內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，碩士生導(dǎo)師；常建華（1959-），男，漢族，內(nèi)蒙古農(nóng)牧科學(xué)院研究員。

項(xiàng)目名稱：內(nèi)蒙古科技創(chuàng)新項(xiàng)目—苦參堿防治家畜外寄生蟲的研究。