• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    瘤背石磺多糖提取工藝優(yōu)化及其體外抗氧化活性評(píng)價(jià)

    2015-10-25 02:58:14程知慶沈和定姚理想刁亞劉宸
    生物技術(shù)通報(bào) 2015年8期
    關(guān)鍵詞:自由基多糖抗氧化

    程知慶 沈和定 姚理想 刁亞 劉宸

    (上海海洋大學(xué)省部共建水產(chǎn)種質(zhì)資源發(fā)掘與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上?!?01306)

    瘤背石磺多糖提取工藝優(yōu)化及其體外抗氧化活性評(píng)價(jià)

    程知慶 沈和定 姚理想 刁亞 劉宸

    (上海海洋大學(xué)省部共建水產(chǎn)種質(zhì)資源發(fā)掘與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海201306)

    采用傳統(tǒng)的熱水浸提法提取瘤背石磺多糖,運(yùn)用響應(yīng)面法優(yōu)化多糖的提取工藝,并以粗多糖對(duì)其體外抗氧化活性作初步研究。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn),探討浸提溫度、浸提時(shí)間、料液比對(duì)瘤背石磺多糖提取率的影響并選取實(shí)驗(yàn)水平,采用 Box-Behnken設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案,利用Design-Expert 8.05軟件分析數(shù)據(jù)。通過(guò)清除羥基自由基和 DPPH自由基的能力來(lái)檢測(cè)多糖抗氧化性能。結(jié)果顯示,最佳水提條件為浸提溫度92℃、浸提時(shí)間30 h、料液比1∶29(g/mL),在最優(yōu)工藝條件下瘤背石磺多糖的提取率為9.206%,瘤背石磺多糖對(duì)羥基自由基和DPPH自由基都具有一定的清除率。采用該方法優(yōu)化提取多糖,合理可靠,為以后的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù),且多糖具有明顯的體外抗氧化活性。

    瘤背石磺;多糖;提取工藝;響應(yīng)面法;抗氧化

    瘤背石磺(Onchidium struma)俗稱土海參、海癩子、土雞、烏紗鱉、涂龜、土鮑等,屬于軟體動(dòng)物門(mén)(Mollusca)腹足綱(Gastropoda)肺螺亞綱(Pulmonata)柄眼目(Stylommatophora)石磺科(Onchidiidae),全身裸露無(wú)殼,是用肺呼吸的一種進(jìn)化貝類[1]。在我國(guó)主要分布于江蘇、上海、浙江、福建、廣東、香港、海南、廣西等地,其生長(zhǎng)在陸地和海洋的過(guò)渡帶,分布于灘涂潮間帶高潮線附近。民間流傳瘤背石磺具有滋補(bǔ)、壯陽(yáng)、清涼、祛火、祛濕等功效[2-4]。營(yíng)養(yǎng)成分分析結(jié)果表明,瘤背石磺具有較高的藥用價(jià)值和保健作用[5]。

    研究發(fā)現(xiàn)貝類多糖也具有多種生物活性及藥用價(jià)值,紫貽貝[6]多糖具有良好的抗氧化活性;范秀萍[7]研究發(fā)現(xiàn)波紋巴非蛤多糖(PUG-1)對(duì)高脂模型小鼠具有較好的降低血脂與預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化作用,貝類多糖還具有如抗腫瘤[8-10]、抗病毒[11]、抗衰老[12]等生物活性,從生物體內(nèi)提取出來(lái)的多糖對(duì)正常細(xì)胞毒副作用小,多糖藥物的研制成為當(dāng)今世界新藥的重要發(fā)展方向之一,從而使多糖生物資源的開(kāi)發(fā)和利用成為了研究熱點(diǎn)。管菊[13]在研究中發(fā)現(xiàn)瘤背石磺中的總糖含量約為26.06%,目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于石磺的研究主要集中在系統(tǒng)分類、生物學(xué)特性、受精機(jī)制、繁殖、胚胎發(fā)育、神經(jīng)系統(tǒng)以及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值等方面,其多糖的提取、工藝條件優(yōu)化及其生物活性的研究報(bào)道幾乎沒(méi)有??紤]到實(shí)際實(shí)驗(yàn)的可操作性及實(shí)驗(yàn)室儀器的局限性,綜合考量最后采取經(jīng)典的多糖提取法——熱水浸提醇沉法,該法具有經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)單、容易操作,儀器設(shè)備易得的優(yōu)點(diǎn)。李雪梅[14]利用熱水浸提法提取出扇貝中的水溶性多糖,并對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化。本研究采用熱水浸提法提取瘤背石磺中的多糖,通過(guò)響應(yīng)面法[15,16]實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)多糖的提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,并對(duì)粗多糖的體外抗氧化能力做初步測(cè)定,以期為瘤背石磺生物活性物質(zhì)的研究和開(kāi)發(fā)提供一些參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 瘤背石磺預(yù)處理 瘤背石磺(采自上海崇明島)解剖去其內(nèi)臟,置于-80℃的低溫下備用。

    1.1.2 試劑 無(wú)水葡萄糖、苯酚、濃硫酸、1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH自由基)、水楊酸、硫酸亞鐵、過(guò)氧化氫等化學(xué)試劑均為分析純。

    1.1.3 儀器 多功能粉碎機(jī)(永康市小寶電器有限公司),AL104電子分析天平(精確至 0.0001 g,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司),美譜達(dá) UV-6100 型紫外分光光度計(jì)(上海美譜達(dá)儀器有限公司),DHG-9077A型電熱恒溫干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司),HWS-26雙列六孔恒溫水浴鍋(上?;厶﹥x器制造有限公司),TDL-40B低速臺(tái)式大容量離心機(jī)(上海圣科儀器設(shè)備有限公司),MLLI-Q超純水儀(美國(guó) Millipore 公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 瘤背石磺粗多糖的提取工藝流程 瘤背石磺→絞碎→石油醚浸泡12 h→乙醇浸泡4 h→50℃烘箱烘干→水浴浸提→過(guò)濾離心→取上清液→濃縮→脫蛋白(Sevage 試劑脫蛋白)→離心(除蛋白)→透析(4 d)→濃縮→醇沉(加入4倍體積95%乙醇,4℃靜置過(guò)夜)→離心 45℃恒溫干燥→灰白色瘤背石磺粗多糖。

    1.2.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的描繪 多糖含量的測(cè)定采用苯酚-硫酸法[17],繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1),得回歸方程為:y=0.0075x+0.0012,R2=0.9927,結(jié)果表明,葡萄糖的微克含量在16-72 μg范圍內(nèi),線性關(guān)系良好。

    1.2.3 瘤背石磺提取液中多糖含量的測(cè)定 準(zhǔn)確稱取瘤背石磺干燥粉1 g,放入50 mL的錐形瓶中,按照設(shè)定的料液比加入蒸餾水,在設(shè)定的時(shí)間和溫度下提取,過(guò)濾離心分離,取上清液,按照苯酚-硫酸法測(cè)定并計(jì)算提取液中多糖的含量。計(jì)算方程如下:

    多糖的提取率(%)=C×N×V/M×10-3×100%式中,C為待測(cè)液的濃度;N為稀釋倍數(shù);V為待測(cè)液體積;M為樣品質(zhì)量。

    1.2.4 單因素實(shí)驗(yàn) 通過(guò)熱水浸提法,分別考察料液比(20、30、40、50和60 mL/g),提取溫度(80、85、90、95和100℃),提取時(shí)間(15、20、25、30和35 h)這3個(gè)因素進(jìn)行單因素的優(yōu)化實(shí)驗(yàn),采用苯酚-硫酸法測(cè)石磺多糖濃度,以多糖得率為指標(biāo),考察各個(gè)因素對(duì)瘤背石磺多糖得率的影響。

    1.2.5 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn) 在上述單因素基礎(chǔ)上,根據(jù)Box-Behnken Design(BBD)中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,設(shè)計(jì)出3因素3水平實(shí)驗(yàn)方案[18]。以瘤背石磺多糖的提取率為響應(yīng)值,利用Design Expert 8.05 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,得出最佳提取工藝條件。實(shí)驗(yàn)因子和水平,見(jiàn)表1。

    表1 響應(yīng)面設(shè)計(jì)因素與水平表

    1.2.6 瘤背石磺多糖體外抗氧化實(shí)驗(yàn)

    1.2.6.1 清除DPPH自由基能力的測(cè)定 參照陳玉琴等[19]的實(shí)驗(yàn)方法,略有改動(dòng),降低了其中DPPH自由基的濃度為0.5 mmoL/L,進(jìn)行實(shí)驗(yàn),重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次,求取平均值,以VC作對(duì)比。

    清除率(%)=[1-(A樣品-A空白)/A對(duì)照]×100% 1.2.6.2 清除羥基自由基能力的測(cè)定 參考李粉玲等[20]的實(shí)驗(yàn)方法,略有改動(dòng),10倍稀釋了實(shí)驗(yàn)試劑的濃度,并延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間至30 min。重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次,求取平均值,以VC作對(duì)比。

    清除率(%)=[1-(A樣品-A空白)/A對(duì)照]×100%

    2 結(jié)果

    2.1 瘤背石磺多糖提取的單因素實(shí)驗(yàn)

    2.1.1 溫度對(duì)總糖得率的影響 圖1顯示,隨著浸提溫度的提高,瘤背石磺多糖的提取率明顯增高,當(dāng)溫度高于90℃時(shí),多糖的提取率增加相對(duì)緩慢。由于加熱時(shí)間過(guò)長(zhǎng),受實(shí)驗(yàn)條件限制,溫度最高只能穩(wěn)定在95℃,所以浸提溫度選擇85℃-95℃。

    圖1 浸提溫度對(duì)瘤背石磺多糖提取率的影響

    2.1.2 時(shí)間對(duì)總糖得率的影響 圖2顯示,隨浸提時(shí)間的延長(zhǎng)瘤背石磺多糖的提取率不斷提高,浸提時(shí)間達(dá)到30 h,提取率達(dá)到最大值。隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng),提取率下降。故選擇浸提時(shí)間在30 h左右。

    2.1.3 料液比對(duì)總糖得率的影響 圖 3 顯示,當(dāng)料液比低于30 mL/g時(shí),多糖的提取率一直呈現(xiàn)上升趨勢(shì),在料液比為30 mL/g時(shí)提取率達(dá)到最高,隨著料液比的繼續(xù)增大,提取率降低。故選擇30 mL/g為響應(yīng)面的最優(yōu)值。

    圖2 浸提時(shí)間對(duì)瘤背石磺多糖提取率的影響

    圖3 料液比對(duì)瘤背石磺多糖提取率的影響

    2.2 響應(yīng)面法優(yōu)化實(shí)驗(yàn)

    依據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選擇浸提溫度、浸提時(shí)間、料液比3個(gè)因素為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)的自變量,以多糖提取率為響應(yīng)值,進(jìn)行3因素3水平的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。利用Design expert 8.05軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和回歸分析,結(jié)果如表2所示。

    2.2.1 模型方程的建立與顯著性檢驗(yàn) 通過(guò)Design-Expert 8.05軟件對(duì)表2中的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,得到多糖提取率對(duì)浸提溫度、浸提時(shí)間、料液比3個(gè)因素的二次多項(xiàng)回歸方程為:

    對(duì)該模型進(jìn)行方差分析,結(jié)果(表3)顯示,P<0.000 1,表明模型極顯著;失擬項(xiàng)P=0.576 5>0.05,沒(méi)有顯著性,說(shuō)明所選的模型對(duì)該實(shí)驗(yàn)擬合程度較好,誤差較小。其中模型的復(fù)相關(guān)系數(shù)R2=0.990 0,校正后的R2=0.977 2,說(shuō)明該模型可以解釋97.72%的響應(yīng)值Y的變化,預(yù)測(cè)R2值0.932 5與校正的值0.977 2相差不大,表明實(shí)驗(yàn)的實(shí)際值與預(yù)測(cè)值擬合的較好。

    表2 瘤背石磺多糖提取率的響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)方案及結(jié)果

    表3 擬合二次多項(xiàng)式模型的方差分析

    A、B、C三個(gè)因素的一次項(xiàng)均小于0.01,說(shuō)明這3個(gè)因素對(duì)多糖提取率都極顯著。交互項(xiàng)AB、AC都小于0.01,均達(dá)到了極顯著的水平,BC小于0.05達(dá)到顯著水平,3個(gè)因素的二次項(xiàng)均達(dá)到極顯著水平(P<0.01),說(shuō)明3個(gè)因素之間都存在一定的交互作用,且因素之間的交互作用對(duì)多糖提取率都顯著影響。表3的方差分析顯示,3個(gè)因素對(duì)瘤背石磺多糖提取率的影響程度依次為A(浸提溫度)>C(料液比)>B(浸提時(shí)間)。

    2.2.2 瘤背石磺多糖的響應(yīng)面分析 利用 Design Expert 8.05軟件,繪制各影響因素對(duì)瘤背石磺多糖的響應(yīng)曲面圖,根據(jù)響應(yīng)曲面的坡度和等高線的形狀可以比較判斷各因素及其交互作用對(duì)提取率影響的強(qiáng)弱。該擬合方程的二次項(xiàng)系數(shù)都是負(fù)數(shù),所以圖4-圖6中每個(gè)響應(yīng)曲面都是開(kāi)口向下的凸形曲面,等高線沿某一因素軸方向曲線的疏密程度反映在響應(yīng)曲面上表現(xiàn)為曲面的陡峭程度,等高圖上曲線越密,響應(yīng)曲面則越陡,說(shuō)明響應(yīng)值對(duì)該因素的變化較敏感,圖4-圖6中的響應(yīng)面3D圖顯示,當(dāng)各因素在一定范圍內(nèi)增大時(shí),響應(yīng)值也隨之增大,當(dāng)各因素超出響應(yīng)面極值繼續(xù)增加時(shí),響應(yīng)值則減小,等高圖中的中心點(diǎn)投影在3D圖中為最高點(diǎn),則該點(diǎn)的提取率最高,而根據(jù)等高線圖4-圖6中等高線沿各自軸方向的疏密程度可以比較出各因素的影響力大小分別是:A>B、A>C、C>B。等高線的形狀可反映出交互影響的強(qiáng)弱,橢圓形表示兩因素交互作用顯著,而圓形則與之相反,圖4-圖6中的等高曲線都是橢圓形,說(shuō)明浸提溫度和浸提時(shí)間、浸提溫度和料液比、浸提時(shí)間和料液比之間交互作用較為顯著且各因素之間的交互作用對(duì)多糖的提取率影響顯著。最后得出3種因素對(duì)多糖提取率的影響是:A(浸提溫度)>C(料液比)>B(浸提時(shí)間),該結(jié)果與回歸模型顯著性檢驗(yàn)相吻合。

    2.2.3 優(yōu)化與驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 根據(jù)上述響應(yīng)面的模型與結(jié)果分析,得到最佳條件下的瘤背多糖的提取率為9.206%,其中浸提溫度為91.65℃,浸提時(shí)間29.93 h,料液比29.05 mL/g。為了檢測(cè)響應(yīng)面法所得數(shù)據(jù)的可靠性,同時(shí)也為了實(shí)驗(yàn)操作方便,選取浸提溫度92℃,浸提時(shí)間30 h,料液比29 mL/g。在此條件下,平行重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次的平均值為(9.062±0.091)%。實(shí)際測(cè)得的平均值與理論預(yù)測(cè)值相差很小,說(shuō)明該模型可靠性高,工藝的重復(fù)性好。

    圖4 提取率f=(A,B)響應(yīng)曲面及等高線圖(C=30.00)

    圖5 提取率f=(A,C)響應(yīng)曲面及等高線圖(B=30.00)

    圖6 提取率f=(B,C)響應(yīng)曲面及等高線圖(A=90.00)

    2.3 瘤背石磺多糖體外抗氧化實(shí)驗(yàn)

    2.3.1 DPPH自由基清除能力 圖7顯示,在測(cè)定的濃度范圍內(nèi),VC和瘤背石磺多糖對(duì)DPPH自由基都有較強(qiáng)的清除能力,但與多糖相比,VC的清除能力明顯更強(qiáng)且一直維持在較高水平。多糖對(duì)DPPH自由基的清除力隨著瘤背石磺多糖濃度的增加呈正相關(guān)關(guān)系,當(dāng)濃度大于2 mg/mL時(shí),多糖對(duì)DPPH自由基的清除率明顯增強(qiáng)。當(dāng)多糖濃度為10 mg/mL時(shí),清除率最高達(dá)到76.98%。對(duì)DPPH的清除率IC50為4.36 mg/mL。

    2.3.2 羥基自由基清除能力 圖8顯示,在測(cè)定的多糖濃度范圍內(nèi),瘤背石磺多糖和VC均對(duì)羥基自由基有較強(qiáng)的清除力。與多糖相比,VC的清除能力更強(qiáng)且一直維持在較高的水平。瘤背石磺多糖對(duì)羥基自由基的清除力隨多糖濃度的增加而增強(qiáng),最高清除率達(dá)到80%。說(shuō)明瘤背石磺多糖對(duì)羥基自由基的清除能力達(dá)到較高的水平。對(duì)羥基自由基的清除率IC50為3.12 mg/mL。

    圖7 瘤背石磺多糖對(duì)DPPH自由基的清除率

    3 討論

    本實(shí)驗(yàn)對(duì)瘤背石磺多糖提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。選取3個(gè)影響因素(浸提溫度、浸提時(shí)間、料液比)進(jìn)行單因素的優(yōu)化實(shí)驗(yàn),在單因素基礎(chǔ)上,根據(jù)Box-Behnken Design(BBD)中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,以多糖提取率為響應(yīng)值,設(shè)計(jì)出3因素3水平實(shí)驗(yàn)方案,利用Design Expert 8.05軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,得出最佳提取工藝條件。通過(guò)多糖清除DPPH自由基和羥基自由基的能力來(lái)評(píng)價(jià)多糖的抗氧化活性。

    在單因素的實(shí)驗(yàn)中,浸提溫度、浸提時(shí)間和料液比對(duì)多糖提取率的影響均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。當(dāng)浸提溫度低于95℃時(shí),隨著溫度的逐漸升高,分子的運(yùn)動(dòng)加劇,加快了多糖溶解擴(kuò)散的速度,從而使多糖的提取率上升,所以在適度范圍內(nèi)浸提溫度的升高有利于多糖的提取,但溫度過(guò)高會(huì)破壞多糖的結(jié)構(gòu),部分多糖水解為單糖或低聚糖,從而導(dǎo)致多糖提取率下降[21];在一定的浸提時(shí)間內(nèi),多糖隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng),在水中的溶解度不斷增加,當(dāng)多糖擴(kuò)散達(dá)到平衡時(shí),多糖的提取率下降,浸提時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)影響甚至破壞多糖結(jié)構(gòu)從而導(dǎo)致多糖的提取率下降;濃度梯度是提取的動(dòng)力,在一定范圍內(nèi)提高料液比有利于多糖的提取,但當(dāng)料液比超過(guò)某一極限時(shí),再提高料液比則效果不明顯,同時(shí)考慮到節(jié)約能源,所以選擇最優(yōu)料液比為30 mL/g。

    在多糖抗氧化實(shí)驗(yàn)中,以VC作為陽(yáng)性對(duì)照,考察多糖對(duì)兩種自由基的清除能力。首先DPPH自由基由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有十分活潑的單電子,其醇溶液呈紫色,并且在517 nm處有一強(qiáng)吸收峰,瘤背石磺多糖的加入可以捕獲并清除其單電子,導(dǎo)致溶液褪色和吸收強(qiáng)度的減弱[22];其次根據(jù)Fenton反應(yīng),H2O2與Fe2+發(fā)生氧化還原反應(yīng),生成OH·自由基,其存活時(shí)間較短但具有極高的反應(yīng)活性,與水楊酸結(jié)合生成一種在510 nm處有強(qiáng)吸收的有色物質(zhì),抗氧化劑多糖的加入清除并降低了OH·自由基的濃度,則有色物質(zhì)生成量減少,溶液顏色變淡且吸光度減?。?3]。

    4 結(jié)論

    利用響應(yīng)面法優(yōu)化瘤背石磺多糖提取的工藝條件,確定多糖的最佳提取工藝為浸提溫度92℃,浸提時(shí)間30 h,料液比29 mL/g,提取率為9.062%。對(duì)瘤背石磺多糖體外抗氧化實(shí)驗(yàn)表明,在一定的濃度范圍內(nèi),多糖對(duì)DPPH自由基和羥基自由基的清除能力都較強(qiáng)。

    [1]Britton KM. The Onchidiacea(Gastropoda, Pulmonata)of Hong Kong with a worldwide review of the genera[J]. Journal of Molluscan Studies, 1984, 50(3):179-191.

    [2]邱立言. 蘇滬沿海瘤背石磺的形態(tài)和習(xí)性[J]. 動(dòng)物學(xué)雜志,1991, 26(3):33-36.

    [3] 沈和定, 陳漢春, 陳賢龍, 等. 石磺繁殖生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào), 2006, 30(6):753-760.

    [4] 孫變娜, 沈和定. 特色海洋中藥--石磺[J]. 現(xiàn)代養(yǎng)生, 2013(11):8.

    [5]黃金田, 王愛(ài)民. 瘤背石磺營(yíng)養(yǎng)成分分析及品質(zhì)評(píng)價(jià)[J]. 海洋科學(xué), 2008, 32(11):29-35.

    [6]鄒艷君, 雷榮劍. 紫貽貝粗多糖的提取及其體外抗氧化的研究[J]. 海峽藥學(xué), 2014, 26(7):41-43.

    [7]范秀萍, 董曉靜, 吳紅棉, 等. 波紋巴非蛤多糖對(duì)高脂模型小鼠血脂的影響[J]. 現(xiàn)代食品科技, 2014(1):7-10, 21.

    [8]王蒞莎, 朱蓓薇, 孫黎明, 等. 鮑魚(yú)內(nèi)臟多糖的體外抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性研究[J]. 大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2008, 27(4):289-293.

    [9]杜挺挺, 陳蔭, 鐘城城, 等. 貽貝多糖的結(jié)構(gòu)修飾及其體外抗腫瘤活性測(cè)定[J]. 浙江海洋學(xué)院學(xué)報(bào):自然科學(xué)版, 2014(4):354-357.

    [10] Chen SG, Wang Jf, Xue CH, et al. Sulfation of a squid ink polysaccharide and its inhibitory effect on tumor cell metastasis[J]. Carbohydrate Polymers, 2010, 81(3):560-566.

    [11]范巧云, 許禮發(fā), 李朝品, 等. 扇貝多糖體外抗乙型肝炎病毒活性的研究[J]. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào), 2011, 27(4):307-310.

    [12]陳大勇, 張鳳先, 李慧萍, 等. 動(dòng)物源多糖的藥理活性研究進(jìn)展[J]. 經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào), 2013, 17(2):109-112.

    [13]管菊, 沈和定, 錢(qián)靜, 等. 四種石磺營(yíng)養(yǎng)成分分析及價(jià)值評(píng)價(jià)[J]. 食品工業(yè)科技, 2013, 34(17):349-353.

    [14]李雪梅, 蘇運(yùn)聰, 王頡. 響應(yīng)面法優(yōu)化水溶性扇貝多糖的提取工藝[J]. 中國(guó)食品學(xué)報(bào), 2014, 2(14):127-132.

    [15]Hill WJ, Hunter WG. A review of response surface methodology:A literature review[J]. Technometrics, 1966, 8:571-590.

    [16]Mead R, Pike DJ. A review of response surface methodology from a biometrics view point[J]. Biometrics, 1975, 31(12):803-851.

    [17]張惟杰. 糖復(fù)合物生化研究技術(shù)[M]. 第2版. 杭州:浙江大學(xué)出版社, 2006.

    [18]萬(wàn)閱, 齊計(jì)英, 曾紅, 等. 響應(yīng)面法優(yōu)化香菇多糖的超聲輔助提取工藝[J]. 生物技術(shù)通報(bào), 2015, 31(1):79-85.

    [19]陳玉琴, 南海娟, 劉坤峰. 蕨菜多糖提取及抗氧化特性[J].北方園藝, 2014(14):128-132.

    [20]李粉玲, 蔡漢權(quán), 林澤平. 紅豆多糖抗氧化性及還原能力的研究[J]. 食品工業(yè), 2014, 35(2):190-194.

    [21]郝繼偉. 響應(yīng)面法優(yōu)化超聲輔助提取蒙山松茸多糖工藝[J].中藥材, 2010, 33(7):1159-1163.

    [22]陳玉琴, 南海娟, 劉坤峰. 蕨菜多糖提取及抗氧化特性[J].北方園藝, 2014(14):128-132.

    [23]王超, 甄潤(rùn)英. 海蘆筍多糖超聲波輔助提取工藝及抗氧化活性研究[J]. 食品與機(jī)械, 2012, 28(6):138-141.

    (責(zé)任編輯 馬鑫)

    Process Optim ization of Extracting Polysaccharides from Onchidium struma,and Evaluation of Its Antioxidant Activity in Vitro

    Cheng Zhiqing Shen Heding Yao Lixiang Diao Ya Liu Chen
    (Key Laboratory of Exploration and Utilization of Aquatic Genetic Resources,Shanghai Ocean University,Ministry of Education,Shanghai201306)

    Taking Onchidium struma as the raw material, its polysaccharides was extracted by the traditional method of hot water. Process of extracting polysaccharides from O. struma was optimized by response surface methodology. Through the single factor experiment,the effects of extraction temperature, extraction time, and liquor-to-material ratio to the extraction rate of polysaccharide were investigated. Furthermore, the experiments were done by Box-Behnken, and the data was analyzed by Design-Expert 8.05 software. Antioxidant activity of O. struma polysaccharides was determined by the capacity of scavenging free hydroxyl radical and DPPH radical. On the basis of the analysis of regression equation, determination of factors affecting the extraction of polysaccharide was conducted by the extraction rate of polysaccharide served as response value. Extraction temperature at 92℃, extraction time of 30 h, and liquor-to-material ratio of 1∶29 g/mL, leaching rate of O. struma polysaccharide reached 9.206%. O. struma polysaccharide had ability to clear off free hydroxyl radical and DPPH radical. Conclusively,the extraction technology is reasonable and reliable for the extraction of polysaccharides O. struma, which provides the theoretical support for the future industrial production, and its polysaccharides have significant antioxidation in vitro.

    Onchidium struma;polysaccharide;extraction;response surface method;antioxidation effect

    10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.08.027

    2015-01-14

    國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(41276157),上海高校水產(chǎn)學(xué)一流學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目

    程知慶,女,碩士研究生,研究方向:海洋生物資源研究與開(kāi)發(fā);E-mail:986256709@qq.com

    沈和定,男,博士,教授,研究方向:海洋生物學(xué);E-mail:hdshen@shou.edu.cn

    猜你喜歡
    自由基多糖抗氧化
    6000倍抗氧化能力,“完爆”維C!昶科將天然蝦青素研發(fā)到極致
    自由基損傷與魚(yú)類普發(fā)性肝病
    自由基損傷與巴沙魚(yú)黃肉癥
    陸克定:掌控污染物壽命的自由基
    米胚多糖的組成及抗氧化性研究
    熟三七多糖提取工藝的優(yōu)化
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:45
    檞皮苷及其苷元清除自由基作用的研究
    豬皮膠原蛋白抗氧化肽的分離純化及體外抗氧化活性研究
    乳清低聚肽的制備及其抗氧化活性
    綠茶抗氧化肽的分離純化與抗氧化活性研究
    亚洲专区中文字幕在线| 国内精品久久久久久久电影| 99热这里只有精品一区 | 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲激情在线av| 欧美成人性av电影在线观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 18禁美女被吸乳视频| 久久这里只有精品19| 观看免费一级毛片| 国产99白浆流出| 久久天堂一区二区三区四区| 成人无遮挡网站| 久久草成人影院| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 成人无遮挡网站| 日韩欧美在线二视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| ponron亚洲| 国产高清视频在线观看网站| 成人性生交大片免费视频hd| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日韩欧美一区二区三区在线观看| a在线观看视频网站| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲熟女毛片儿| 丰满的人妻完整版| 午夜福利视频1000在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 他把我摸到了高潮在线观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 免费观看精品视频网站| 午夜视频精品福利| 久久久久久大精品| 性欧美人与动物交配| 黑人操中国人逼视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 中文字幕高清在线视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| av在线天堂中文字幕| 免费在线观看亚洲国产| 不卡av一区二区三区| 色在线成人网| 日韩av在线大香蕉| 99久久成人亚洲精品观看| 一个人看的www免费观看视频| 一区福利在线观看| 十八禁人妻一区二区| 亚洲天堂国产精品一区在线| 人妻夜夜爽99麻豆av| 天堂动漫精品| 亚洲人成伊人成综合网2020| 天天一区二区日本电影三级| 免费av毛片视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲电影在线观看av| 黄片小视频在线播放| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲成人久久性| 国产黄a三级三级三级人| 99精品久久久久人妻精品| 成人一区二区视频在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 嫩草影院入口| 中文字幕久久专区| 久久精品人妻少妇| 精品免费久久久久久久清纯| 99久久成人亚洲精品观看| 国产视频一区二区在线看| 国产精品一及| 欧美日韩福利视频一区二区| 又黄又粗又硬又大视频| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲国产精品成人综合色| 国产激情久久老熟女| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲av成人av| 国产美女午夜福利| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 五月伊人婷婷丁香| 久久久久国内视频| 国产激情偷乱视频一区二区| 欧美在线黄色| 午夜免费激情av| 99热这里只有是精品50| 久久欧美精品欧美久久欧美| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 精品人妻1区二区| 精品国产乱码久久久久久男人| 免费看日本二区| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲国产色片| 亚洲专区字幕在线| 在线永久观看黄色视频| 一本久久中文字幕| 99热这里只有是精品50| 婷婷精品国产亚洲av在线| 我要搜黄色片| 最近最新中文字幕大全电影3| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 变态另类丝袜制服| 少妇的丰满在线观看| 亚洲欧美日韩东京热| 国产精品一区二区三区四区久久| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 18禁美女被吸乳视频| 欧美中文综合在线视频| 黄色 视频免费看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| e午夜精品久久久久久久| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 久久亚洲精品不卡| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 五月伊人婷婷丁香| 久久午夜亚洲精品久久| 国产精品亚洲美女久久久| 一a级毛片在线观看| 在线观看午夜福利视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产三级中文精品| 免费搜索国产男女视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 男人舔奶头视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 午夜成年电影在线免费观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久久国产精品麻豆| 久久久国产成人精品二区| 757午夜福利合集在线观看| 丰满的人妻完整版| 操出白浆在线播放| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 成人特级av手机在线观看| 女人被狂操c到高潮| 日韩精品中文字幕看吧| 十八禁网站免费在线| 三级毛片av免费| 欧美乱色亚洲激情| 香蕉av资源在线| 亚洲成人久久爱视频| 搞女人的毛片| 日本精品一区二区三区蜜桃| 99久久综合精品五月天人人| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲av熟女| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲精华国产精华精| 欧美一级a爱片免费观看看| 午夜福利在线在线| 丝袜人妻中文字幕| 欧美乱色亚洲激情| 免费高清视频大片| 女人被狂操c到高潮| 精品不卡国产一区二区三区| 色综合站精品国产| 精品久久久久久久久久久久久| 国产高潮美女av| 男女之事视频高清在线观看| 中文在线观看免费www的网站| 国产高清视频在线播放一区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产高清三级在线| 精品久久久久久,| 18美女黄网站色大片免费观看| 一级毛片精品| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 午夜精品久久久久久毛片777| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲片人在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产 | 午夜精品在线福利| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲av成人av| 精品日产1卡2卡| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| a级毛片a级免费在线| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 欧美一级毛片孕妇| 又粗又爽又猛毛片免费看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 在线国产一区二区在线| 亚洲,欧美精品.| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲一区二区三区色噜噜| 久久中文字幕一级| 亚洲欧美日韩高清在线视频| avwww免费| 成人性生交大片免费视频hd| 99视频精品全部免费 在线 | 亚洲成人免费电影在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 欧美一级a爱片免费观看看| 美女大奶头视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产成+人综合+亚洲专区| 久久中文看片网| av片东京热男人的天堂| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲av第一区精品v没综合| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲国产欧美人成| 国产av一区在线观看免费| 久久久久亚洲av毛片大全| 国模一区二区三区四区视频 | 啪啪无遮挡十八禁网站| 在线观看舔阴道视频| 久久天堂一区二区三区四区| 色综合欧美亚洲国产小说| 成人av一区二区三区在线看| 性色avwww在线观看| 久久精品国产综合久久久| 免费av毛片视频| e午夜精品久久久久久久| 亚洲熟女毛片儿| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 日本一本二区三区精品| www日本黄色视频网| 国产欧美日韩一区二区精品| 小说图片视频综合网站| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品一及| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 岛国在线免费视频观看| 9191精品国产免费久久| 国产黄a三级三级三级人| 日本三级黄在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 日韩精品中文字幕看吧| 极品教师在线免费播放| 免费一级毛片在线播放高清视频| 丰满人妻一区二区三区视频av | 成人18禁在线播放| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产真实乱freesex| 成年版毛片免费区| 一夜夜www| 丁香六月欧美| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲avbb在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美色欧美亚洲另类二区| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 免费在线观看日本一区| 亚洲,欧美精品.| 精品日产1卡2卡| 波多野结衣高清无吗| 国产亚洲精品久久久com| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 90打野战视频偷拍视频| xxx96com| 精品国产三级普通话版| 成熟少妇高潮喷水视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产视频内射| 此物有八面人人有两片| 成人av在线播放网站| 一二三四在线观看免费中文在| 99国产综合亚洲精品| 看免费av毛片| 波多野结衣高清作品| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 亚洲精品在线观看二区| 美女 人体艺术 gogo| 久久精品91蜜桃| 国产成人精品无人区| 在线观看舔阴道视频| 变态另类丝袜制服| 免费观看精品视频网站| 亚洲激情在线av| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲精品在线观看二区| 美女 人体艺术 gogo| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 丰满人妻一区二区三区视频av | 亚洲 欧美一区二区三区| 久久天堂一区二区三区四区| av黄色大香蕉| 久久久成人免费电影| 国产单亲对白刺激| 在线视频色国产色| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲精品在线观看二区| 免费在线观看成人毛片| 神马国产精品三级电影在线观看| 久久久国产成人免费| 亚洲中文字幕日韩| 嫁个100分男人电影在线观看| 曰老女人黄片| 久久亚洲真实| 国产精品一区二区精品视频观看| 男女视频在线观看网站免费| 成人国产综合亚洲| 69av精品久久久久久| 成人永久免费在线观看视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 少妇的逼水好多| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 91麻豆精品激情在线观看国产| 校园春色视频在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日本黄色片子视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 狂野欧美激情性xxxx| 国产三级中文精品| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| xxxwww97欧美| 亚洲成人精品中文字幕电影| 免费看日本二区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 狂野欧美激情性xxxx| av中文乱码字幕在线| 国产麻豆成人av免费视频| 老汉色∧v一级毛片| 毛片女人毛片| 国产极品精品免费视频能看的| 性色avwww在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 岛国在线观看网站| 免费搜索国产男女视频| av天堂中文字幕网| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久香蕉精品热| 丝袜人妻中文字幕| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 两性夫妻黄色片| 亚洲国产高清在线一区二区三| www.www免费av| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲黑人精品在线| www日本在线高清视频| 成在线人永久免费视频| 国产午夜精品论理片| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲性夜色夜夜综合| 少妇的逼水好多| 久久久久久久午夜电影| 国产亚洲精品av在线| 成人特级av手机在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日韩三级视频一区二区三区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久久久久久久免费视频了| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 啦啦啦韩国在线观看视频| 哪里可以看免费的av片| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲无线观看免费| 18禁美女被吸乳视频| 不卡av一区二区三区| 日日干狠狠操夜夜爽| 国内精品一区二区在线观看| 免费看a级黄色片| 一区福利在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 成人18禁在线播放| 999精品在线视频| 亚洲国产欧美人成| 久久久久性生活片| 亚洲一区二区三区不卡视频| 少妇人妻一区二区三区视频| 夜夜爽天天搞| 亚洲在线自拍视频| 午夜福利在线在线| 成人午夜高清在线视频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 欧美日韩黄片免| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 在线观看66精品国产| 舔av片在线| 高清在线国产一区| 1000部很黄的大片| 国产高清有码在线观看视频| 国产高清三级在线| 久久国产乱子伦精品免费另类| 桃红色精品国产亚洲av| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲片人在线观看| 日韩有码中文字幕| 搞女人的毛片| 国产精品一及| 免费在线观看亚洲国产| 欧美不卡视频在线免费观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 香蕉av资源在线| 一进一出抽搐动态| 又紧又爽又黄一区二区| 99国产综合亚洲精品| 级片在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 色视频www国产| 一级黄色大片毛片| 日韩三级视频一区二区三区| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产伦人伦偷精品视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲自拍偷在线| 美女cb高潮喷水在线观看 | 国产黄a三级三级三级人| 99久久综合精品五月天人人| 悠悠久久av| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 999久久久精品免费观看国产| 国产欧美日韩精品亚洲av| 日本黄色片子视频| 亚洲精品在线美女| 黄频高清免费视频| 国产精品一区二区免费欧美| 最好的美女福利视频网| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲国产欧美网| 97超视频在线观看视频| 热99re8久久精品国产| 黄色日韩在线| 午夜福利免费观看在线| 日韩欧美在线二视频| 日韩人妻高清精品专区| 91久久精品国产一区二区成人 | 中国美女看黄片| 一级毛片高清免费大全| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲人与动物交配视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 久久久国产精品麻豆| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲精品一区av在线观看| 日韩高清综合在线| 国产成+人综合+亚洲专区| 久久中文看片网| 首页视频小说图片口味搜索| 三级国产精品欧美在线观看 | 亚洲国产欧美网| 久久久久久久久久黄片| 性欧美人与动物交配| ponron亚洲| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲av五月六月丁香网| 极品教师在线免费播放| 淫妇啪啪啪对白视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产成人av激情在线播放| 亚洲精品在线观看二区| 两性夫妻黄色片| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 少妇人妻一区二区三区视频| 99在线视频只有这里精品首页| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲第一电影网av| 日韩欧美国产一区二区入口| 日本a在线网址| 午夜精品一区二区三区免费看| 午夜福利18| 俺也久久电影网| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲美女视频黄频| 热99re8久久精品国产| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美激情在线99| 免费观看精品视频网站| 少妇人妻一区二区三区视频| 香蕉国产在线看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| www国产在线视频色| 亚洲成人久久性| 免费搜索国产男女视频| 欧美高清成人免费视频www| 国产91精品成人一区二区三区| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产爱豆传媒在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 在线国产一区二区在线| 久久99热这里只有精品18| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲中文字幕日韩| 午夜亚洲福利在线播放| 一级毛片女人18水好多| 午夜福利欧美成人| 亚洲成人久久爱视频| 小说图片视频综合网站| 偷拍熟女少妇极品色| 国产av麻豆久久久久久久| 亚洲av美国av| 99久久综合精品五月天人人| 国产乱人视频| 99riav亚洲国产免费| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美中文综合在线视频| 精品人妻1区二区| 最近在线观看免费完整版| 成人国产综合亚洲| 观看美女的网站| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 免费人成视频x8x8入口观看| 一个人看的www免费观看视频| 欧美黑人巨大hd| 国产黄片美女视频| 日韩av在线大香蕉| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 禁无遮挡网站| 日韩免费av在线播放| 成人性生交大片免费视频hd| 91字幕亚洲| 在线看三级毛片| 国产成人系列免费观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美大码av| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产高清三级在线| 天堂动漫精品| 成人一区二区视频在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产av麻豆久久久久久久| 国产三级黄色录像| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 91av网站免费观看| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲黑人精品在线| 女同久久另类99精品国产91| 俺也久久电影网| 亚洲精品在线美女| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 香蕉久久夜色| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 黑人操中国人逼视频| 一进一出好大好爽视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 在线视频色国产色| 亚洲avbb在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 欧美一级a爱片免费观看看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产探花在线观看一区二区| 成人特级av手机在线观看| 在线观看舔阴道视频| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久亚洲真实| 亚洲电影在线观看av| 在线观看日韩欧美| 国产爱豆传媒在线观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美中文日本在线观看视频| 搡老岳熟女国产| 国产单亲对白刺激| 午夜a级毛片| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲av美国av| 中文字幕久久专区| 视频区欧美日本亚洲| 国产伦在线观看视频一区| 一夜夜www| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 中国美女看黄片| 身体一侧抽搐| x7x7x7水蜜桃| 在线视频色国产色| 国产精品 欧美亚洲| 国产高清视频在线观看网站| 国产伦精品一区二区三区四那| av在线天堂中文字幕| 亚洲av五月六月丁香网| 男插女下体视频免费在线播放| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲自拍偷在线| 成人三级做爰电影| 国产精品,欧美在线| 欧美最黄视频在线播放免费|