擬南芥SPX1蛋白原核表達(dá)及純化分析

胡濤安艷呂群丹徐英武

（1.　浙江農(nóng)林大學(xué)亞熱帶森林培育國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，臨安　311300；2.　浙江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，杭州　310058）

擬南芥SPX1蛋白原核表達(dá)及純化分析

胡濤1安艷1呂群丹2徐英武1

（1.浙江農(nóng)林大學(xué)亞熱帶森林培育國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，臨安311300；2.浙江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，杭州310058）

包含SPX結(jié)構(gòu)域的蛋白在高等真核生物中廣泛存在，這類(lèi)蛋白的功能多數(shù)還不太清晰，但發(fā)現(xiàn)有些與磷信號(hào)相關(guān)，有些與鐵信號(hào)相關(guān)。擬南芥中含有SPX結(jié)構(gòu)域的蛋白可分為4個(gè)家族，本研究中的擬南芥SPX1（AtSPX1）屬于一個(gè)只含有SPX結(jié)構(gòu)域的蛋白組成的家族，其它家族成員還包含額外的基因序列。進(jìn)化樹(shù)分析表明，AtSPX1編碼的氨基酸序列與雙子葉植物具有較高的一致性，與單子葉植物進(jìn)化距離較遠(yuǎn)。為了揭示AtSPX1蛋白的結(jié)構(gòu)形態(tài)與其生物學(xué)功能之間的聯(lián)系，開(kāi)展了AtSPX1蛋白質(zhì)體外可溶性表達(dá)實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建了原核體外表達(dá)載體，在大腸桿菌（E.coli）細(xì)胞中獲得了該蛋白可溶性高表達(dá)。表達(dá)的蛋白包含有His標(biāo)簽方便了蛋白純化，插入的SUMO融合蛋白標(biāo)簽可以通過(guò)蛋白酶切除，而目標(biāo)蛋白通過(guò)硫酸銨沉淀實(shí)現(xiàn)了純化。進(jìn)一步分子篩層析分析表明AtSPX1以單體形式存在。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提供了一套表達(dá)純化AtSPX1蛋白的有效方案。

SPX結(jié)構(gòu)域；原核表達(dá)；蛋白純化；擬南芥

SPX結(jié)構(gòu)域是由最早發(fā)現(xiàn)的3個(gè)蛋白名稱(chēng)的首個(gè)字母縮寫(xiě)來(lái)命名的，這3個(gè)蛋白分別是酵母的SYGI［1］和Pho81［2］以及人類(lèi)的XPRI［3］，它們的氨基端都含有一個(gè)相對(duì)保守共同結(jié)構(gòu)域。目前在動(dòng)物和植物以及很多高等真核生物中都發(fā)現(xiàn)了含SPX保守結(jié)構(gòu)域的蛋白，根據(jù)所含結(jié)構(gòu)域差異的分類(lèi)，擬南芥和水稻基因組中所有編碼含SPX結(jié)構(gòu)域蛋白可以分成4個(gè)基因家族：SPX家族、SPX-RING家族、SPX-MFS家族及SPX-EXS家族［4，5］。

酵母體內(nèi)存在著一個(gè)被稱(chēng)為PHO體系的磷反應(yīng)通路，該通路多個(gè)成員含有SPX結(jié)構(gòu)域。在磷饑餓脅迫下的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制中，PHO通路研究最為詳細(xì)，研究表明，植物缺磷時(shí)會(huì)產(chǎn)生類(lèi)似于酵母PHO操縱子的多基因協(xié)同表達(dá)，組成一個(gè)高度協(xié)作的分子網(wǎng)絡(luò)來(lái)適應(yīng)磷脅迫［6-8］。植物中許多含有SPX結(jié)構(gòu)域的基因參與對(duì)缺磷脅迫的反應(yīng)，一些基因參與植物特異的磷高效吸收和利用機(jī)制，而其它基因則參與調(diào)控缺磷誘導(dǎo)的多基因表達(dá)［9，10-13］。植物中對(duì)磷饑餓響應(yīng)的許多基因都已被克隆，如AtSPX1、AtSPX3，并對(duì)其表達(dá)調(diào)控做了深入研究［14-16］。在植物的根、葉、莖中存在著SPX蛋白家庭成員大量的表達(dá)［4］。MYB家族的轉(zhuǎn)錄因子PHR2是植物磷信號(hào)通路中心因子，研究表明在水稻中SPX4蛋白作為PHR2的負(fù)調(diào)控因子參與了植物磷信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和磷平衡［17］。在擬南芥和水稻中，SPX1蛋白具有同樣的負(fù)調(diào)控PHR2的功能［10，13，16，18］，同時(shí)SPX1與SPX4蛋白均通過(guò)與PHR2蛋白結(jié)合抑制PHR2的功能［16-18］。

綜上所述，SPX在植物磷信號(hào)通路中發(fā)揮了重要功能，但是SPX蛋白如何與PHR2結(jié)合并抑制后者的功能還未闡明清楚。對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究有助于闡明其中原因。本研究嘗試通過(guò)克隆擬南芥AtSPX1基因，在原核細(xì)胞內(nèi)過(guò)量表達(dá)AtSPX1蛋白，使用親和層析和分子篩層析技術(shù)進(jìn)行蛋白純化，旨在為進(jìn)一步解析SPX1的蛋白結(jié)構(gòu)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

哥倫比亞野生型擬南芥由浙江農(nóng)林大學(xué)亞熱帶森林培育國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地實(shí)驗(yàn)室栽培。E. coli DH5α感受態(tài)細(xì)胞，E. coli 表達(dá)菌株BL21（DE3）以及表達(dá)質(zhì)粒pE-SUMO為本實(shí)驗(yàn)室保存；RNA提取試劑盒購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、DNA聚合酶、各種DNA限制性?xún)?nèi)切酶購(gòu)自寶生物工程有限公司（大連）；DNA連接酶購(gòu)自New England Biolabs公司；DNA純化試劑盒、膠回收試劑盒購(gòu)自天根生化科技有限公司（北京）；引物由生工生物工程股份有限公司（上海）合成；其余各試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 AtSPX1基因克隆 用Trizol法提取擬南芥葉片組織RNA，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA。根據(jù)擬南芥SPX1基因的cDNA保守序列以及該蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)進(jìn)行引物設(shè)計(jì)進(jìn)行AtSPX1基因全長(zhǎng)克隆，上游引物A：5'-CGGGATCCATGAAGTTTGGTAAGAGTCTC AG-3'和下游引物B：5'-CCGCTCGAGCTATTTGGCT TCTTGCTCCAACA-3'（下劃線(xiàn)為Bam HI和Xho I酶切位點(diǎn)），由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)得到的產(chǎn)物連接到pMD-18T并轉(zhuǎn)化到E.coli DH5α感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)過(guò)菌檢和雙酶切實(shí)驗(yàn)后進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序正確的菌株擴(kuò)大提取質(zhì)粒后，用Bam H I和Xho I雙酶切重組質(zhì)粒和pESUMO、pET-HTT和pET-GTT載體，切膠回收目的片段。回收產(chǎn)物連接到含有同樣黏性末端載體上，連接反應(yīng)在16℃過(guò)夜。反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)化到DH5α感受態(tài)細(xì)胞并涂布于抗性的LB平板上，挑菌培養(yǎng)后菌液PCR檢測(cè)，并將檢測(cè)正確的菌液進(jìn)行測(cè)序，由此克隆得到了pE-SUMO-AtSPX1、pET-HTT-AtSPX1和pET-GTT-AtSPX1重組質(zhì)粒。

1.2.2 AtSPX1理化性質(zhì)分析 用DNASTAR5.0軟件分析cDNA序列和開(kāi)放閱讀框；利用瑞士生物信息學(xué)研究所的蛋白分析專(zhuān)家系統(tǒng)（Expert Protein Analysis System，ExPASy）提供的生物信息學(xué)工具Protparam，分析預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的氨基酸殘基性質(zhì)、分子量及理論等電點(diǎn)。采用Signal IP 3.0 Server分析信號(hào)肽序列。

1.2.3 AtSPX1的原核表達(dá) 重組表達(dá)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株RosettaTM（DE3）和BL21（DE3），從抗氨芐霉素和卡那霉素平板上挑取單克隆，接入2 mL LB液體培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)，當(dāng)菌體OD600達(dá)到0.6時(shí)，其中一部分加入0.3 mmol/L IPTG誘導(dǎo)，在37℃搖床上誘導(dǎo)5 h，收集菌體。另一部分加入0.3 mmol/L IPTG誘導(dǎo)，在20℃搖床上誘導(dǎo)14 h，收集菌體。超聲（工作5 s間歇6 s，總時(shí)間1 min，功率20%）破碎，SDS-PAGE檢測(cè)蛋白表達(dá)及可溶性情況。

1.2.4 重組AtSPX1蛋白的純化與SUMO標(biāo)簽酶切 8 000×g離心收集誘導(dǎo)后的1 L菌液細(xì)胞，加入20 mL裂解液（1 mol/L NaCl，20 mmol/L Tirs-HCl pH 8.0，10% glycerol）冰水下功率為200 W，工作6 s間歇8 s超聲20 min，靜置15 min后，在4℃條件下轉(zhuǎn)速17 000 r/min離心35 min。收集上清液，將上清液加入已經(jīng)平衡好的Ni-NTA柱，放入冰浴搖床緩慢搖動(dòng)結(jié)合30 min后，將純化柱置于支架上，收集未特異性結(jié)合瓊脂糖樹(shù)脂上的雜蛋白液，用20個(gè)柱體積Wash Buffer（1 mol/L NaCl，20 mmol/L Tris-HCl pH 8.0，10% glycerol，100 mmol/L Imidazole）洗脫非特異性結(jié)合的雜蛋白，最后用15倍樹(shù)脂體積的 Elution Buffer（1 mol/L NaCl，20 mmol/L Tris-HCl pH8.0，10% glycerol，250 mmol/L Imidazole）收集目的蛋白。向蛋白洗脫液中加入U(xiǎn)LP1蛋白酶，低溫4℃酶切過(guò)夜。

1.2.5 硫酸銨沉淀純化AtSPX1蛋白 將上述酶切反應(yīng)液用超濾濃縮柱進(jìn)行濃縮，在目的蛋白的濃度達(dá)到0.3 mg/mL時(shí)，測(cè)量濃縮液體積并查表確定硫酸銨的用量。將硫酸銨分4次加入濃縮液中，每次加入硫酸銨后都輕微搖晃離心管，最后將離心管冰上靜置10 min，12 000 r/min離心5 min后棄上清，加入3 mL裂解液（1 mol/L NaCl，20 mmol/L Tirs-HCl pH8.0，10% glycerol）將離心管底部沉淀懸浮。

1.2.6 分子篩層析分析目的蛋白與質(zhì)譜鑒定 將硫酸銨沉淀法所獲的目的蛋白懸浮液用超濾濃縮柱進(jìn)行濃縮，4 000×g離心濃縮至500 μL體積后上樣，使用分子篩SuperdexTM12 10/300 GL分離純化目的蛋白，以緩沖液（1 mol/L NaCl，20 mmol/L Tirs-HCl pH 8.0）0.5 mL/min流速分離純化目的蛋白，取10 μL fraction蛋白樣品加入2 μL蛋白上樣緩沖液，煮沸10 min，點(diǎn)樣于12%聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE），完成電泳后觀(guān)察目的蛋白的純化情況。將切取的目的蛋白SDS-PAGE膠點(diǎn)轉(zhuǎn)入離心管中，樣品質(zhì)譜鑒定由上海博苑生物技術(shù)有限公司進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 AtSPX1蛋白理化性質(zhì)及信號(hào)肽預(yù)測(cè)

利用ProtParam工具預(yù)測(cè)表明AtSPX1蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量為30.07 kD，理論等電點(diǎn)（p I值）7.76，含酸性氨基酸（DE）16.4%，堿性氨基酸（KR）16.8%，親水性氨基酸（AILFWV）、極性氨基酸（NCQSTY）和帶電氨基酸（RKHYCDE）的比例分別為35.6%、22.6%和30.9%。根據(jù)在線(xiàn)網(wǎng)站Signal IP 3.0 Server分析AtSPX1蛋白，結(jié)果顯示AtSPX1蛋白序列中預(yù)測(cè)到一個(gè)雙向核定位信號(hào)，位于該蛋白序列的第30-46位氨基酸的位置。

2.2 pE-SUMO-AtSPX1原核表達(dá)載體的構(gòu)建

測(cè)序驗(yàn)證表明成功構(gòu)建重組AtSPX1質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化成功的菌株提取質(zhì)粒進(jìn)行PCR鑒定（圖1-A）和雙酶切（圖1-B）均得到目的片段，成功構(gòu)建了pESUMO-AtSPX1原核表達(dá)載體。

圖1 AtSPX1基因PCR擴(kuò)增結(jié)果（A）和pE-SUMOAtSPX1限制性酶切分析（B）

2.3 重組蛋白AtSPX1的表達(dá)檢測(cè)

誘導(dǎo)溫度、時(shí)間及載體對(duì)原核表達(dá)蛋白的可溶性有重要影響，高溫條件下菌株快速表達(dá)目的蛋白容易使蛋白形成不正確的構(gòu)象折疊最后以包涵體的形式存在，不利于獲得可溶性蛋白。菌液濃度在OD600值0.4-0.6時(shí)，以37℃不加入IPTG培養(yǎng)5 h為對(duì)照組，以IPTG終濃度0.3 mmol/L的為誘導(dǎo)條件，分別在37℃，5 h 和20℃，14 h的誘導(dǎo)條件下進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。SDS電泳結(jié)果（圖2）顯示，3種載體只有pE-SUMO-AtSPX1蛋白在20℃條件下上清有表達(dá)（圖2-C）。

2.4 Ni-NTA法純化重組AtSPX1蛋白

不同咪唑梯度洗脫蛋白后的SDS-PAGE檢測(cè)結(jié)果（圖3）顯示，從第7號(hào)孔道可以看出，在高濃度咪唑（1 mol/L NaCl，20 mmol/L Tris-HCl pH8.0，10% glycerol，250 mmol/L Imidazole）條件下，可洗脫出條帶單一目的蛋白。

圖2 分別含pET-HTT（A）、pET-GTT（B）和pE-SUMO（C）三種載體的AtSPX1融合蛋白的表達(dá)檢測(cè)

圖3 SDS-PAGE檢測(cè)AtSPX1 Ni-NTA親和層析純化

2.5 硫酸銨沉淀

在15 mL洗脫下的蛋白液中（1 mol/L NaCl，20 mmol/L Tirs-HCl pH 8.0，250 mmol/L Imidazole，10% glycerol），加入0.1%（W/W）ULP1蛋白酶，低溫4℃酶切過(guò)夜，用硫酸銨沉淀的方法能夠?qū)袠?biāo)蛋白和標(biāo)簽分開(kāi)（圖4）。生物信息學(xué)分析表明，AtSPX1蛋白N端存在一個(gè)17個(gè)氨基酸的雙向核定位信號(hào)，這個(gè)片段在純化過(guò)程中很容易降解掉，所以圖4中酶切過(guò)后出現(xiàn)兩條帶。

圖4 硫酸銨沉淀

圖5 AtSPX1的凝膠過(guò)濾層析圖（A）及SDS檢測(cè)（B）

2.6 分子篩層析分析

將硫酸銨沉淀法獲得的蛋白用10 kD超濾濃縮柱濃縮至體積500 μL，通過(guò)AKTA Purifier，上樣至凝膠過(guò)濾層析柱SuperoseTM12 10/300 GL作進(jìn)一步純化。作為標(biāo)準(zhǔn)的牛血清蛋白（BSA）、卵清蛋白（Ovalbumin）、木瓜凝乳蛋白酶（Chymopapain）大小分別為67、43和25 kD，對(duì)比作為標(biāo)準(zhǔn)的3種蛋白的洗脫體積和分子量關(guān)系可知［19］，目的蛋白峰位置所對(duì)應(yīng)的分子量大小在卵清蛋白（43 kD）位置之后和木瓜凝乳蛋白酶（25 kD）之前（圖5-A），初步確定其為單體（30 kD），并且重組蛋白只出現(xiàn)明顯的單峰，說(shuō)明蛋白的均一性較好。分子篩層析后，分管收集的蛋白變性后用聚丙烯酰胺凝膠變性電泳檢測(cè)，結(jié)果（圖5-B）顯示蛋白分子量為30 kD，蛋白純度較高。

2.7 MALDI-TOT/TOF質(zhì)譜鑒定重組蛋白

對(duì)SDS-PAGE考馬氏亮藍(lán)染色后的目的蛋白進(jìn)行MALDI-TOT/TOF質(zhì)譜。上海博苑生物技術(shù)有限公司提供的檢索結(jié)果顯示（檢索程序是Mascot：http：//www.matrixscience.com，數(shù)據(jù)庫(kù)為NCBInr），目的蛋白為gi|15241275，檢測(cè)結(jié)果中有21條肽段與目的蛋白AtSPX1序列相匹配。圖6-A紅色部分表示與目的蛋白所匹配的多肽片段，覆蓋率超過(guò)60%。圖6-B是Mascot Score直方圖，右邊紅色表示匹配的結(jié)果，得分為938分且有顯著性差異（P＜0.05）。左邊陰影區(qū)域?yàn)樾∑蜗嗥ヅ涞碾亩?，不具備顯著性差異，為不可信任結(jié)果。

圖6 AtSEP3蛋白質(zhì)肽質(zhì)量指紋圖譜鑒定（A）及M ascot Score直方圖（B）

3 討論

近年來(lái)，關(guān)于植物響應(yīng)磷營(yíng)養(yǎng)脅迫的生理生化機(jī)制和信號(hào)傳導(dǎo)途徑的研究已經(jīng)有了較大的進(jìn)展，研究顯示一部分SPX蛋白參與了磷的吸收代謝過(guò)程。但也有研究結(jié)果表明，OsSPX1基因表達(dá)水平下降引起植物對(duì)冷脅迫的敏感性增強(qiáng)［11，12］。 AtSPX1基因和OsSPX1具有50.5%的相似性，表明AtSPX1和植物低溫耐受性也可能有關(guān)。同時(shí)SPX結(jié)構(gòu)域在多個(gè)物種間有著較高的保守性，說(shuō)明了SPX結(jié)構(gòu)域?qū)@些蛋白所行使的功能是不可缺少的。目前亞細(xì)胞定位的結(jié)果顯示了AtSPX1定位于細(xì)胞核中，這與生物信息學(xué)預(yù)測(cè)AtSPX1蛋白在氨基端含有一個(gè)17個(gè)氨基酸的雙向核定位信號(hào)相一致。這個(gè)片段在純化過(guò)程中容易被降解掉，也解釋了硫酸銨沉淀后出現(xiàn)兩條帶的結(jié)果，兩條帶經(jīng)過(guò)質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)測(cè)定都是AtSPX1蛋白。在目前的原核表達(dá)過(guò)程中，20℃誘導(dǎo)發(fā)現(xiàn)有可溶性AtSPX1蛋白表達(dá)，而37℃誘導(dǎo)可溶性表達(dá)則明顯減少。進(jìn)一步改變誘導(dǎo)溫度、時(shí)間以及IPTG濃度，發(fā)現(xiàn)可溶性沒(méi)有明顯增加，同時(shí)改變蛋白表達(dá)宿主細(xì)胞也沒(méi)有明顯效果。這個(gè)問(wèn)題計(jì)劃在后期的實(shí)驗(yàn)中通過(guò)重新構(gòu)建不含核定位信號(hào)的表達(dá)載體來(lái)解決，這有可能提高蛋白的產(chǎn)量。

分子篩實(shí)驗(yàn)表明純化的AtSPX1蛋白是以單體形式存在，同時(shí)這個(gè)蛋白只包含一個(gè)SPX結(jié)構(gòu)域，表明SPX結(jié)構(gòu)域自身并不傾向于形成同型二聚體。擬南芥的SPX2、SPX3、SPX4與SPX1相似性分別是66%、47%和44%，它們都只包含一個(gè)長(zhǎng)度大約為150個(gè)氨基酸的SPX結(jié)構(gòu)域。這個(gè)分析暗示擬南芥同源SPX家族成員也可能是單體。但是不同SPX蛋白的SPX結(jié)構(gòu)域長(zhǎng)度明顯不同，例如，水稻的OsSPX4的SPX結(jié)構(gòu)域包含170個(gè)氨基酸，擬南芥11個(gè)PHO1蛋白都含有300-360個(gè)氨基酸不等的SPX結(jié)構(gòu)域，不能排除這些蛋白形成多聚體的可能性。有實(shí)驗(yàn)表明，擬南芥的AtSPX1蛋白的功能與鐵和磷營(yíng)養(yǎng)有關(guān)聯(lián)［8］，可能是這兩種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的交叉點(diǎn)之一，研究SPX結(jié)構(gòu)域在其中的作用以及與它蛋白的互作是值得關(guān)注的方向。

4 結(jié)論

本研究成功構(gòu)建了擬南芥SPX1基因原核表達(dá)載體pE-SUMO-AtSPX1，在大腸桿菌（E.coli）細(xì)胞中獲得了該蛋白可溶性高表達(dá)，經(jīng)過(guò)親和層析、硫酸銨沉淀、分子篩層析方法得到高純度的AtSPX1蛋白，分子篩層析分析表明AtSPX1以單體形式存在。

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［18］ Wang Z， Ruan W， Shi J， et al. Rice SPX1 and SPX2 inhibit phosphate starvation responses through interacting with PHR2 in a phosphate-dependent manner［J］. Proc Natl Acad Sci USA，2014， 111（41）：14953-14958.

［19］Zhang F， Xu Y， Zhang Z. Heterologous expression， purification，crystallization and preliminary X-ray diffraction analysis of KDO8P synthase from Arabidopsis thaliana［J］. Protein Expression and Purification， 2014， 101：133-137.

（責(zé)任編輯 李楠）

Prokaryotic Expression and Purification of AtSPX1 Protein in Arabidopsis thaliana

Hu Tao1An Yan1Lü Qundan2Xu Yingwu1
（1. The Nurturing Station for the State Key Laboratory of Subtropical Silviculture，Zhejiang A & F University，Lin’an311300；2. College of Life Science，Zhejiang University，Hangzhou310058）

The proteins containing SPX domain exist widely in eukaryotes， and the functions of this kind of proteins are not clear yet，however some of them are involved in phosphorus signaling and some in iron signaling. SPX proteins in Arabidopsis thaliana can be divided into 4 families. AtSPX1 used in this paper belongs to the family containing only SPX domain， while other 3 families containing extra gene sequences. Phylogenetic analysis showed that amino acid encoded by AtSPX1 was close with dicots in sequence， but distant from monocots. In order to reveal the relationship between structural property and biological function， we carried out solubility expression experiments of the proteins in vitro，constructed prokaryotic expression vector in vitro， and had the high soluble expression of the protein in Escherichia coli’s cells. The expressed His-tag proteins allowed the purification more convenient， i.e， the inserted SUMO fusion protein tag could be digested by protease， and the target protein could be purified by ammonium sulfate precipitation. The further purification was completed using size exclusion chromatographic column， which yielded a profile corresponding to a monomeric AtSPX1 in solution. This work provided a strategy for the purification of AtSPX1 protein.

SPX domain；prokaryotic expression；protein purification；Arabidopsis thaliana

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.08.013

2014-12-12

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31270715），浙江農(nóng)林大學(xué)科研發(fā)展基金項(xiàng)目（2010FR072）

胡濤，男，碩士研究生，研究方向：生物物理；E-mail：462109237@qq.com

徐英武，男，博士，教授，研究方向：生物物理學(xué)；E-mail：yxu@zafu.edu.cn