早期自然流產(chǎn)胚胎染色體數(shù)目異常行熒光原位雜交技術(shù)檢測的研究

丘文君

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院，廣東 廣州 510150）

早期自然流產(chǎn)胚胎染色體數(shù)目異常行熒光原位雜交技術(shù)檢測的研究

丘文君

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院，廣東 廣州 510150）

目的 針對早期自然流產(chǎn)患者，研究分析熒光原位雜交技術(shù)對其胚胎染色體數(shù)目異常檢測的效果分析。方法 在我院的早期自然流產(chǎn)患者中抽取60例為研究對象，用熒光原位雜交技術(shù)（FISH）對患者胚胎絨毛的5條染色體：13、18、21和X、Y染色體進(jìn)行快速檢測。結(jié)果 采用FISH檢測，所有結(jié)果與常規(guī)染色體核型分析一致，檢測率為100%，患者中出現(xiàn)染色體異常25例，占患者總數(shù)的41.7%。結(jié)論 FISH檢測技術(shù)用于早期自然流產(chǎn)胚胎染色體數(shù)目異常的檢測具有方法簡單、過程迅速等優(yōu)點(diǎn)，有助于提高診斷的成功率。

早期自然流產(chǎn)；熒光原位雜交技術(shù)；染色體異常

早期自然流產(chǎn)指的是發(fā)生在妊娠12周之前的非人工流產(chǎn)。導(dǎo)致自然流產(chǎn)的原因很多包括父母染色體異常［1］，母體內(nèi)分泌失調(diào)、生殖道異?；蚋腥镜龋渲写蠹s一半以上的早期流產(chǎn)是由胚胎染色體異常導(dǎo)致的。熒光原位雜交技術(shù)（FISH）是近些年在細(xì)胞遺傳學(xué)上發(fā)展的新型檢測技術(shù)，相比于傳統(tǒng)的檢測技術(shù)，快速、準(zhǔn)確、靈敏度高成為FISH技術(shù)的最顯著優(yōu)點(diǎn)［2］。FISH是一種探針檢測技術(shù)，檢測特異微生物種群的存在和豐度。由于FISH可以迅速準(zhǔn)確診斷染色體數(shù)目異常問題，目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用在產(chǎn)前診斷?，F(xiàn)抽取我院2012年12月至2013年12月的早期自然流產(chǎn)患者共60例，對其行FISH快速檢測，分析檢測效果。報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料：從2012年12月至2013年12月在本院治療的早期自然流產(chǎn)患者中抽取60例為研究對象。孕婦患者年齡在19～41歲，平均年齡28.6歲?；颊呷焉飼r間在51～98 d，平均妊娠時間為72.3 d。關(guān)于產(chǎn)婦流產(chǎn)次數(shù)，其中1次流產(chǎn)的29例，2次流產(chǎn)的20例，3次以上流產(chǎn)的11例。

1.2FISH檢測方法

1.2.1標(biāo)本取材：選擇流產(chǎn)產(chǎn)婦的胎兒絨毛組織，首先用生理鹽水清洗干凈；然后用消毒剪刀去掉脫膜組織，以選取其中的絨毛或是肌肉組織；最后在無菌環(huán)境下將標(biāo)本剪碎，并去除不能剪碎的部分。

1.2.2FISH探針選擇：本次研究所用的兩種FISH探針都來自英國Cytocell公司：第18，X，Y染色體探針，是特異性重復(fù)序列著絲粒探針，用藍(lán)、綠、紅三種顏色直接標(biāo)記，區(qū)域定位為［3］：p11.1～q11.1；第13和21染色體探針為位點(diǎn)特異性單一序列探針，由紅色和綠色分別直接標(biāo)記，區(qū)域定位為：13q14.3，21q22.2。

1.2.3雜交檢測：①將標(biāo)本加入規(guī)定溫度的Kcl溶液處理；再加入固定液預(yù)固定，多次離心去上清處理后室溫下干燥保存；②將①中得到的玻片經(jīng)過正規(guī)的消化、漂洗、脫水、自然干燥；然后將探針混合物10 μL滴加到玻片雜交區(qū)在規(guī)定環(huán)境中進(jìn)行雜交。③雜交后，將玻片依次由46 ℃水浴鍋、70%乙醇漂洗，之后暗處干燥；在目標(biāo)區(qū)域滴加15 μL的DAPI復(fù)染劑，暗處放置觀察。

1.3診斷標(biāo)準(zhǔn)：對于每例樣本計數(shù)200個細(xì)胞，信號異常率介定值為10%和60%：＜10%視為陰性，＞60%視為陽性，10%～60%視為結(jié)果異常。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法：使用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié) 果

①染色體數(shù)目異常類型：60例樣本均檢測成功，其中25例結(jié)果異常。關(guān)于異常類型如表1所示。②流產(chǎn)次數(shù)對于染色體數(shù)目異常的影響：比較1次流產(chǎn)和多次流產(chǎn)中染色體的異常情況，具體見表2。

表1　染色體異常類型數(shù)目比率

表2　流產(chǎn)次數(shù)與染色體異常的關(guān)系

3　討 論

孕婦的早期流產(chǎn)，約50%以上由胚胎染色體異常導(dǎo)致。并且流產(chǎn)風(fēng)險隨著流產(chǎn)次數(shù)和孕婦年齡的增加而增高。導(dǎo)致自然流產(chǎn)的原因還包括：母體內(nèi)分泌失調(diào)、母體生殖道異常和感染以及其他如生活習(xí)慣等因素［4］。其中胚胎染色體異常又包括多種情況：三倍體、多倍體、X單體、染色體平衡易位、缺失等。正常人群染色體異常率為0.2%，而在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)夫婦中發(fā)生率為4%，其中母源與父源之比為3∶1。據(jù)歷史資料［5］，胚胎染色體異常為首次自然流產(chǎn)的主要原因，而對于非首次或多次流產(chǎn)孕婦其發(fā)生率會更高。

熒光原位雜交技術(shù)的檢測原理——利用非放射性熒光物質(zhì)和核酸探針雜交原理，在核中或是染色體上顯示DNA序列位置。其探針可以長時間保存，研究表明其具有快速、安全、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用在細(xì)胞遺傳學(xué)、基因定位、產(chǎn)前診斷等研究領(lǐng)域。

本次研究通過FISH檢測早期流產(chǎn)患者染色體異常情況，由檢測值與常規(guī)染色體核型對比分析可知，檢測成功率為百分之百。在檢測出的25位染色體異常患者中，最多的為三體異常共16例，占總異常數(shù)的64%，其次為X單體，占28%。研究結(jié)果還表明，染色體異常隨著產(chǎn)婦流產(chǎn)次數(shù)比率增大（P＜0.05）。

綜上所述，F(xiàn)ISH技術(shù)可以高效的檢測早期自然流產(chǎn)中染色體異常情況，能夠提高診斷的有效率。進(jìn)而提高該病患者的生活幸福指數(shù)，值得臨床推廣。

［1］施瓊，王箭，袁泰先，等.染色體數(shù)目異常自然流產(chǎn)胚胎hsMAD2基因研究［C］.遺傳學(xué)進(jìn)步與人口健康高峰論壇論文集，2011，20（11）:29.

［2］劉永林，張麗，陳益民，等.孕早期婦女外周血白細(xì)胞Toll樣受體表達(dá)的研究［C］.2009中國杭州生殖健康學(xué)術(shù)論壇暨浙江省計劃生育學(xué)與生殖醫(yī)學(xué)分會學(xué)術(shù)年會論文匯編，2010，33（6）:22-23.

［3］Weremowicz S，Sandrom DJ，Morton CC，et a1.Fluorescenceinsitu hybridization （FISH） for rapid detection of aneuploidy:experience in 911 prenatal cases［J］.Prenat Diagn，2011，21（4）:110-112.

［4］曾瓊連，姚美玉.復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者封閉抗體的檢測與臨床應(yīng)用［C］.第十次全國中醫(yī)婦科學(xué)術(shù)大會論文集，2011，8（3）:791-793.

［5］石東紅，謝魯文，劉茜.2720例自然流產(chǎn)患者染色體分析［C］.第五次全國中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編，2013，21（5）:69.

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1671-8194（2015）20-0157-02