不同加工工藝對續(xù)斷質量的影響*

魏慶紅，胡雨，金傳山，李保明，張偉

（1.安徽省亳州市中藥材進出口檢測中心，安徽亳州236800；2.安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽合肥230031）

不同加工工藝對續(xù)斷質量的影響*

魏慶紅1，胡雨2，金傳山2，李保明1，張偉2

（1.安徽省亳州市中藥材進出口檢測中心，安徽亳州236800；2.安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽合肥230031）

目的測定川續(xù)斷皂苷Ⅵ和川續(xù)斷總皂苷的含量，探討不同產業(yè)化加工工藝對川續(xù)斷質量的影響。方法采用高效液相色譜法和紫外分光光度法分別對不同片型和不同干燥溫度加工的續(xù)斷飲片中川續(xù)斷皂苷Ⅵ和川續(xù)斷總皂苷的含量進行測定。結果切4mm的續(xù)斷片，50℃烘干后，川續(xù)斷皂苷Ⅵ及川續(xù)斷總皂苷的含量均高于其他加工工藝所得飲片。結論為保證續(xù)斷飲片的質量，確定了切制片型厚度和烘干溫度等工藝參數。

續(xù)斷；加工工藝；川續(xù)斷皂苷Ⅵ；川續(xù)斷總皂苷

續(xù)斷為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷Dipsacusasper Wall.ex Henry的干燥根，主要用于治療腰背酸痛、足膝無力、胎漏、崩漏、帶下等癥［1］。續(xù)斷的主要活性成分是以川續(xù)斷皂苷Ⅵ為代表的齊墩果烷型三萜皂苷，有促進骨損傷愈合、治療腰椎骨質增生和骨質疏松等作用［2］。續(xù)斷現行飲片加工工藝操作多憑操作人員經驗進行，切制片型和干燥溫度等技術參數缺乏統(tǒng)一標準，產品生產中的質量評價多以感觀為主。目前，國內續(xù)斷飲片外觀要求切面皮部墨綠色或棕褐色，木部灰黃色或黃褐色，而出口飲片要求斷面為豆青色，不同工藝條件的飲片造成飲片質量參差不齊，不同加工方法對藥材中皂苷類成分也有顯著影響［3-7］。本研究中采用不同切片厚度和低溫烘干技術用于續(xù)斷藥材及飲片加工工藝對質量影響的研究，通過對川續(xù)斷皂苷Ⅵ及其總皂苷的測定，為續(xù)斷飲片的產業(yè)化生產提供穩(wěn)定可行、參數可控的生產工藝，確保其質量穩(wěn)定、可控。

1　儀器與試藥

QY-300型高速截斷往復式切藥機（亳州康華制藥機械有限公司）；Y112M-4B35型箱式干燥機（安徽協和成藥業(yè)飲片有限公司）；Agilent1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；Specord 210 PLUS型紫外可見分光光度計（德國耶拿公司）；AUW220D型十萬分之一電子天平（日本島津公司）；DK-98-ⅡA型電熱恒溫水浴鍋（天津泰斯特儀器有限公司）；JK-3200B型超聲清洗儀（合肥金尼克機械制造有限公司）；IKA?RV10 basic旋轉蒸發(fā)器（成都鑫益儀器有限公司）；101-1AB型電熱恒溫鼓風干燥箱（天津泰斯特儀器有限公司）；WL-100型打粉機。川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為111685-201304）；齊墩果酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為111685-201304）；甲醇、乙腈為色譜純；香草醛、冰醋酸、高氯酸等均為分析純；續(xù)斷藥材購于亳州中藥材大市場，經安徽中醫(yī)藥大學藥學院周建理教授鑒定為川續(xù)斷Dipsacusasper Wall.ex Henry的干燥根。

2　方法與結果

2.1川續(xù)斷飲片的制備

取續(xù)斷藥材除去雜質，淘洗干凈，置塑料內膜袋燜潤適宜時間，至藥材斷面變成均勻豆青色，取出，分別切成3，4，5mm片，再分別置蒸氣炕中以40，50，60℃溫度干燥，得樣品1～9；另取續(xù)斷藥材除去雜質，淘洗干凈，置塑料框中，用編織袋蓋住燜潤至彎曲360°不折斷無硬心，取出，切4mm片，然后置蒸氣炕中50℃干燥，得樣品10，飲片切面皮部墨綠色；原藥材為樣品11。

2.2川續(xù)斷總皂苷含量測定［4-5］

2.2.1溶液制備

精密稱取減壓干燥至恒重的齊墩果酸對照品15.40 mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解，并定容至刻度，搖勻，即得齊墩果酸對照品貯備溶液。取2.1項下制備的11份樣品各200 g，粉碎，分別取續(xù)斷細粉0.25 g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚100mL，加熱回流至提取液無色，棄去石油醚提取液；待石油醚揮干后，將藥材粉末置烘箱中60℃干燥1 h，移至具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定質量；浸泡30min后，超聲提取30min，放冷再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，用甲醇定容至100mL容量瓶，即得供試品溶液。

2.2.2方法學考察

波長選擇：分別精密吸取供試品溶液和適當質量濃度的齊墩果酸對照品貯備溶液，置10mL具塞試管中，水浴揮干溶劑，精密加入0.2 mL 5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8 mL高氯酸，搖勻，100℃恒溫水浴加熱20min，取出，立即置冰水浴中冷卻15min，加入5mL冰醋酸，搖勻，以甲醇作空白對照，在400～800 nm波長范圍內紫外掃描。結果顯示，前兩者在548 nm波長處均有最大吸收值，且吸收峰相同，而甲醇在548 nm波長幾乎無吸收，故選此為測定波長。

線性關系考察：精密量取齊墩果酸對照品貯備溶液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mL，分別置10mL具塞試管中，按“波長選擇”項下方法顯色，以第1管作空白對照，于548nm波長處測定。以吸光度（A）對質量濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程A=0.056 9C-0.002 1，r=0.999 7（n=6）。結果，齊墩果酸質量濃度在2.56～12.80μg/mL范圍內與吸光度線性關系良好。

重復性試驗：取同一份樣品，依法制備供試品溶液6份，按“波長選擇”項下方法顯色后，在548 nm波長處測定。結果，川續(xù)斷總皂苷平均含量為12.95%，RSD=0.05%（n=6），表明該方法重復性良好。

精密度試驗：精密吸取齊墩果酸對照品貯備溶液0.30mL，按“波長選擇”項下方法顯色，以甲醇作空白對照，在548 nm波長處測定。結果，吸光度平均值A=0.422 4，RSD=0.05%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：以供試品溶液定容后計時，考察溶液的穩(wěn)定性，分別于0，1，2，3，4，5 h時進樣測定。結果，吸光度平均值A= 0.494 8，RSD=0.42%（n=6），表明供試品溶液在5 h內基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗：取已知總皂苷含量的續(xù)斷藥材細粉0.1 g，依法制備供試品溶液，精密取溶液9份，每份0.1mL，分別加入適量的對照品溶液，平行制備3份，按“波長選擇”項下方法顯色，在548 nm波長處測定吸光度，計算含量和回收率。結果見表1。

表1　川續(xù)繼總皂苷加樣回收試驗結果（n=9）

2.2.3樣品含量測定

分別精密吸取2.2.1項下各供試品溶液0.5mL，按“波長選擇”項下方法顯色后，在548 nm波長處測定吸光度，計算川續(xù)斷總皂苷含量。結果見表2。

表2　樣品中川續(xù)斷皂苷Ⅵ和川續(xù)斷總皂苷含量測定結果（n=11）

2.3川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量測定［1］

2.3.1色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Agilent5-Tc C18柱（150mm×4.6mm，5μm）；柱溫：40℃；流動相：乙腈-水（30∶70）；流速：1.0mL/min；檢測波長：212 nm；進樣量：10μL。理論板數按川續(xù)斷皂苷Ⅵ峰計算大于4 000。在此色譜條件下，各組分分離良好，分離度為2.6；目標峰和川續(xù)斷皂苷Ⅵ峰保留時間一致，空白溶液在相應位置無吸收。色譜圖見圖1。

2.3.2溶液制備

圖1　高效液相色譜圖

精密稱取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品16.66mg，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，取5mL，置50mL容量瓶中，用乙腈-水（30∶70）定容至刻度，即得對照品溶液。取2.1項下制備的11份樣品各200 g，粉碎，分別取細粉0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理（功率100W，頻率40 kHz）30min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置50mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3.3方法學考察

線性關系考察：精密量取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品適量，配成系列不同質量濃度的對照品溶液6份，分別進樣10μL。以峰面積（A）對進樣量（C）進行線性回歸，得回歸方程A=536.39 C-25.5，r=0.999 8（n=6）。結果，川續(xù)斷皂苷Ⅵ進樣量在0.416～8.330μg范圍內與峰面積線性關系良好。

重復性試驗：取同一份樣品，依法制備供試品溶液6份，按擬訂方法進樣測定。結果，川續(xù)斷皂苷Ⅵ平均含量為5.60%，RSD= 1.18%（n=6），表明該方法重復性良好。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次。結果的RSD=0.15%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液10μL，分別于0，2，4，6，8 h時進樣測定。結果的RSD=0.92%（n=5），表明供試品溶液在8 h內穩(wěn)定。

加樣回收試驗：取已知含量的4號續(xù)斷藥材細粉9份，各約0.25 g，分別精密加入高、中、低3個質量濃度的對照品溶液適量，依法制備供試品溶液，同一質量濃度平行制備3份，并按擬訂色譜條件測定含量，計算回收率。結果見表3。）

表3　川續(xù)繼皂苷Ⅵ加樣回收試驗結果（n=9）

2.3.4樣品含量測定

分別取2.3.2項下供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，以外標法計算樣品中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量。結果見表2。

3　討論

由不同加工方式得到飲片的含量測定結果可知，在不同的切片厚度和干燥溫度下，續(xù)斷藥材切4 mm厚片、干燥溫度為50℃條件下，加工得到的飲片中川續(xù)斷皂苷Ⅵ及總皂苷含量最高。在同樣切片厚度與干燥溫度條件下，續(xù)斷藥材“發(fā)汗”至外觀為斷面豆青色時的續(xù)斷樣品，其質量優(yōu)于切面皮部墨綠色或棕褐色的樣品。說明合理的加工炮制方法對續(xù)斷飲片質量有明顯影響。

目前，國內續(xù)斷飲片外觀要求切面皮部墨綠色或棕褐色，木部灰黃色或黃褐色；出口續(xù)斷飲片外觀要求為斷面豆青色，要達此要求，需將續(xù)斷藥材燜潤，此過程類似傳統(tǒng)加工的“發(fā)汗”，燜潤時間根據季節(jié)不同有所變化。

本研究結果證實，續(xù)斷飲片斷面為豆青色時，其質量優(yōu)于切面為皮部墨綠色或棕褐色的樣品，表明出口續(xù)斷飲片外觀要求斷面為豆青色具有一定的道理。但在燜潤過程中要常翻動藥材，避免樣品霉變。在后期的研究中將對續(xù)斷藥材燜潤的器械、環(huán)境進行研究，以規(guī)范其燜潤過程。同時，也將對續(xù)斷飲片“發(fā)汗”至斷面豆青色的內在質量變化繼續(xù)深入研究與探討，保證續(xù)斷飲片質量的穩(wěn)定。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出社，2010：309-310.

［2］程志安，吳燕峰，黃智清，等.續(xù)斷對成骨細胞增殖、分化、凋亡和細胞周期的影響［J］.中醫(yī)正骨，2004，12（16）：705-707.

［3］楊中林，劉雙躍，秦民堅.不同加工方法對續(xù)斷中Akebia Saponin D含量變化的影響［J］.中醫(yī)藥信息，2000，17（1）：16-17.

［4］王初.發(fā)汗與不發(fā)汗續(xù)斷中水溶性浸出物和川續(xù)斷皂苷Ⅵ的比較［J］.中草藥，2007，38（6）：865-866.

［5］劉艷，李瑋，王建科，等.綜合評分法優(yōu)選川續(xù)斷產地加工方法［J］.中藥材，2012，35（12）：1 922-1 924.

［6］金奇，來平凡，杜偉鋒，等.“發(fā)汗”對續(xù)斷質量的影響［J］.中華中醫(yī)藥學刊，2011，29（12）：2 636-2 638.

［7］劉永，衛(wèi)瑩芳，閆婕，等.不同產地續(xù)斷中總皂苷的含量測定［J］.時珍國醫(yī)國藥，2009，20（11）：2 767-2 768.

Influence of Different Processing Technology on Quality of Radix Dipsacis

Wei Qinghong1，Hu Yu2，Jin Chuanshan2，Li Baoming1，Zhang Wei2
（1.Import and Export of Chinese Medicinal Materials Testing Center of Bozhou，Bozhou，Anhui，China 236800；2.College of Pharmacy，Anhui University
of Chinese Medicine，Hefei，Anhui，China 230031）

Objective To determine the content of akebia saponinsⅥand total saponins，and to investigate the industrialization of different processing technology on the quality of Radix Dipsaci.M ethods The content of akebia saponinsⅥand total saponins of different type and different drying temperature processing of Radix Dipsaci decocting pieces were determined by HPLC and UV spectrophotometry.Results By cutting 4 mm fragment and drying at 50℃，the content of akebia saponinsⅥand total saponins were higher than other processing technology slices.Conclusion The cutting production process parameters such as thickness and drying temperature are determined to ensure the quality of Radix Dipsaci decocting pieces.

Radix Dipsaci；processing technic；Dipsacus L.akebia saponinsⅥ；Dipsacus L.total saponins

R283.1；R282.71；R284.1

A

1006-4931（2015）18-0014-03

魏慶紅（1970-），男，河南鄭州人，主管藥師，研究方向為中藥材進出口質量標準，（電子信箱）bcwqh@126.com。

2014-10-27）

*國家國際科技合作專項項目，項目編號：2011DFA31950。