高效液相色譜法測定半夏糖漿中麻黃堿和偽麻黃堿含量

付靜，朱月月，聶詩明

（湖北中醫(yī)藥大學藥學院，湖北武漢430065）

高效液相色譜法測定半夏糖漿中麻黃堿和偽麻黃堿含量

付靜，朱月月，聶詩明

（湖北中醫(yī)藥大學藥學院，湖北武漢430065）

目的建立測定半夏糖漿中麻黃堿和偽麻黃堿含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法采用Welch（月旭）Ultimate XB-C18柱（250mm× 4.6mm，5μm），以pH=3.0的0.02mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（含0.4%的三乙胺）-甲醇（90∶10）為流動相，流速為1mL/min，檢測波長為210 nm。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿質(zhì)量濃度分別在1.934 4～92.85μg/mL和2.481 3～119.10μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，線性回歸方程分別為Y=0.888 8X-0.067 2，r=1.000 0（n=6）和Y=0.691 1X-0.139 6，r=1.000 0（n=6），回收率均大于95.00%（n=6）。結(jié)論該方法分離度、線性關(guān)系、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率均符合要求，適合于半夏糖漿中麻黃堿和偽麻黃堿的含量測定。

半夏糖漿；麻黃堿；偽麻黃堿；高效液相色譜法

半夏糖漿由生半夏、麻黃、紫菀、桔梗、枇杷葉、遠志、陳皮、甘草、薄荷油組方，具有止咳化痰的功效，臨床常用于治療咳嗽、多痰及支氣管炎［1］。為更好地控制半夏糖漿的質(zhì)量，本研究中以該方主藥生半夏、麻黃為含量檢測對象。由于生半夏和麻黃中均含有麻黃堿和偽麻黃堿，兩組分為擬腎上腺素藥，對心血管、胃腸均有作用［2］，故本研究中建立了半夏糖漿中麻黃堿和偽麻黃堿含量的測定方法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

P680型高效液相色譜儀（戴安公司）；UVD-170型紫外檢測器；十萬分之一電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；SK7200HP型超聲清洗機。半夏糖漿（湖北端正藥業(yè)有限公司，批號為121201，121202，121203）；鹽酸麻黃堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為171241-201007，供含量測定用）；鹽酸偽麻黃堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為171241-201009，供含量測定用）；雙蒸水（實驗室自制），甲醇（美國天地公司）、乙醇及甲醇（國藥集團化學試劑有限公司）等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

稱取鹽酸麻黃堿對照品3.095mg，精密稱定，置10mL容量瓶，用流動相定容，得鹽酸麻黃堿對照品貯備液；精密稱取鹽酸偽麻黃堿對照品3.970mg，置10mL容量瓶，用流動相定容，得鹽酸偽麻黃堿對照品貯備液；精密吸取半夏糖漿5 mL，加水5 mL稀釋，用氨水調(diào)pH至11以上，用無水乙醚80 mL萃取4次，每次20 mL，揮干乙醚，殘留物用流動相溶解并定容至10 mL，用0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；按處方及工藝制成不含生半夏、麻黃的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Welch（月旭）Ultimate XB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：pH=3.0的0.02 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（含0.4%的三乙胺）-甲醇（90∶10）；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：210 nm；進樣量：20μL。在此色譜條件下，理論板數(shù)按麻黃堿峰計不少于6 000，色譜圖見圖1。

2.3 方法學考察

線性關(guān)系考察：將鹽酸麻黃堿對照品貯備液、鹽酸偽麻黃堿對照品貯備液分別稀釋為系列質(zhì)量濃度，精密吸取上述不同質(zhì)量濃度的對照品溶液各20μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂方法測定色譜峰面積，以溶液的質(zhì)量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸得鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的回歸方程分別為Y=0.888 8X-0.067 2（r=1.000 0）和Y=0.691 1X-0.139 6（r=1.000 0）。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的質(zhì)量濃度分別在1.934 4～92.85μg/mL和2.481 3～119.10μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：取對照品溶液，照擬訂色譜條件依法進樣測定。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.84%和1.06%（n=5），表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

重復(fù)性試驗：取同一批樣品5份，依法制備供試品溶液并按擬訂色譜條件測定峰面積。結(jié)果，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.69%和1.18%（n=5），表明該方法的重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于1，4，8，12，24 h時測定峰面積。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.74%和1.82%（n=5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗：精密吸取已知含量的同批次半夏糖漿6份，分別加入鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿，每個質(zhì)量濃度各2份，制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，計算含量。3批樣品每1mL以鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿計的總量為33～51μg，結(jié)果見表2。

3 討論

測定麻黃堿的方法有分光光度法［3］、有薄層掃描法［4］、有高效液相法［5-6］，但這些方法一般都是測定鹽酸麻黃堿的單種成分，很少有同時測定的。麻黃堿和偽麻黃堿為異構(gòu)體，色譜分離通常比較困難。2010年版《中國藥典（一部）》采用的是極性乙醚連接苯基鍵合硅膠柱，專門用于測定麻黃中麻黃堿和偽麻黃堿的含量［7］。本研究中以通用的C18柱，參考文獻［8-10］，使用乙腈-水相關(guān)色譜條件，以pH=3.0的0.02mol/L磷酸二氫鈉緩沖液-甲醇（90∶10）為流動相，獲得了良好的分離效果。建立的方法色譜分離度、線性關(guān)系、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率均良好，適用于半夏糖漿中麻黃堿和偽麻黃堿的含量測定。

表1 鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

表2 樣品含量測定結(jié)果（μg/mL）

［1］WS3-B-1527-93.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑（第八冊）［S］.

［2］鄭萍，戴貴東，李漢青.麻黃堿及偽麻黃堿藥理作用研究進展［J］.寧夏醫(yī)學雜志，2002，24（2）：126-127.

［3］宣信長.紫外分光光度法測定麻地滴鼻液的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2001，5（2）：65.

［4］黃洪.麻杏止咳糖漿中鹽酸麻黃堿的含量測定［J］.中國藥業(yè)，2001，10（10）：96.

［5］趙成.HPLC法測定散痰寧糖漿中鹽酸麻黃堿的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2004，8（5）：361.

［6］林月英，李紅梅，竇國義.高效液相色譜法測定小兒咳喘靈沖劑中麻黃堿的含量［J］.天津藥學，2004，16（4）：18.

［7］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：190-191.

［8］楊文遠，楊美君.反相高效液相色譜法同時測定麻黃中麻黃堿和偽麻黃堿［J］.寧夏大學學報：自然科學版，1998，19（3）：253-254.

［9］成紅娟，曲婷麗，劉銳玲，等.HPLC同時測定止嗽立效口服液中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿含量［J］.中成藥，2009，31（2）：240-242.

［10］劉惠軍，陳睿，王娟.HPLC測定宣肺清熱合劑中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿含量［J］.藥學實踐雜志，2010，28（3）：199-200.

Determination of Pseudoephedrine in Pinellia Syrup by HPLC

Fu Jing，Zhu Yueyue，Nie Shiming
（College of Pharmacy，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan，Hubei，China 430065）

Objective To establish a method for determining ephedrine and pseudoephedrine in pinellia syrup by HPLC.Methods Welch Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）column was used.0.02 mo/L sodium dihydrogen phosphate was used as buffer（0.4%Triethylamine，pH=3.0）-methanol（10∶90）was used as mobile phase.The flow rate was 1 mL/min.The detection wavelength was at 210 nm.Results The liner range of ephderine and pseudoephedrine were 1.934 4-92.85μg/mL and 2.481 3-119.10μg/mL.The equations of linear regression were Y=0.888 8X-0.067 2，r=1.000 0（n=6）and Y=0.691 1X-0.139 6，r=1.000 0（n=6）.The average recovery of ephedrine and pseudoephedrine were all＞95.00%（n=6）.Conclusion This method is simple，can separate the contents completely，and can be used as content determination method of ephedrine and pseudoephedrine in pinellia syrup.

pinellia syrup；ephderine；pseudoephderine；HPLC

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）22-0114-02

付靜（1991-），女，在讀碩士研究生，研究方向為中藥新制劑、新技術(shù)，（電子信箱）565403063@qq.com；聶詩明，男，教授，研究方向為中藥新制劑、新劑型，本文通訊作者，（電子信箱）163nsm@163.com。

2014-10-27；

2015-05-05）