單增李斯特菌的檢測(cè)方法研究進(jìn)展

李云霞，陳雯雯，顧晨榮，饒名禎，郭魯申，趙 渝

(上海師范大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院植物種質(zhì)資源開發(fā)協(xié)同創(chuàng)新中心，上海200234)

0 引言

食源性疾病是指通過攝食而進(jìn)入人體的有毒有害物質(zhì)(包括生物性病原體)等致病因子所造成的疾?。话憧煞譃楦腥拘院椭卸拘裕ǔＲ姷氖澄镏卸?、腸道傳染病、人畜共患傳染病、寄生蟲病以及化學(xué)性有毒有害物質(zhì)所引起的疾?。陙?，食源性疾患的發(fā)病率居各類疾病總發(fā)病率的前列，是當(dāng)前世界上最突出的衛(wèi)生問題［1］．

李斯特菌(Listeria)為革蘭氏陽性菌，形狀為圓尾帶狀，是一種非芽孢兼性厭氧菌，包括7個(gè)菌種［2］，僅綿羊李斯特菌(Listeria iuanuii)和單增李斯特菌(Listeria monocytogenes)兩種為致病菌，其中綿羊李斯特菌只在反芻動(dòng)物中感染，人感染綿羊李斯特菌的情況極少甚至未見報(bào)道，而單增李斯特菌是唯一能引起人畜共患病的主要致病菌［3-4］．單增李斯特菌為革蘭氏陽性短桿菌，生長(zhǎng)環(huán)境是需氧和兼性厭氧，可在極端的環(huán)境中生長(zhǎng)和存活，如生長(zhǎng)溫度為 -0．4 ～45 ℃［5］，pH 為 4．0 ～9．6［6］等．單增李斯特菌在自然界中廣泛存在，如水、土壤、植物，由于其能耐各種極端環(huán)境的生物學(xué)特性使其易通過各種途徑發(fā)生播散，可造成多種食品的污染，如奶及奶制品、肉制品水產(chǎn)品、新鮮蔬菜等．人類受感染后可導(dǎo)致胃腸炎、敗血癥、腦膜炎、流產(chǎn)，尤其是孕婦、嬰兒、老年人及免疫力低下者更易感染［7-8］．可見，食品中存在的單增李斯特菌對(duì)人類的健康安全具有很大的威脅．因此，研究高效可行快速的檢測(cè)方法來提高該菌的檢驗(yàn)速度和靈敏度，使受李斯特菌污染的食品得到及時(shí)的處理，保證食品安全進(jìn)入流通領(lǐng)域，使危害消費(fèi)者健康的風(fēng)險(xiǎn)降低至最小程度，顯得十分必要．

1 單增李斯特菌的檢測(cè)方法

1．1 傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測(cè)方法

在例如熱、冷凍干燥、干燥、鹽、防腐劑、以及其他化學(xué)品或天然抗微生物化合物等因素存在下，食品中的致病菌可能次致死受傷(sub-lethally injured)［9］．另外，面對(duì)各種環(huán)境脅迫，致病菌為了保持存活進(jìn)入休眠狀態(tài)，在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基是不可培養(yǎng)(non-culturable，VBNC)的［10］．如果從VBNC狀態(tài)復(fù)蘇，細(xì)胞可以再次進(jìn)行培養(yǎng)而引起感染．因此，在培養(yǎng)過程中復(fù)蘇是至關(guān)重要的．

由于致病菌存在次致死受傷(sub-lethally injured)和VBNC狀態(tài)，檢測(cè)方法通常分為兩步增菌過程．分離培養(yǎng)得到的可疑菌落再做一系列生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)、溶血實(shí)驗(yàn)、協(xié)同溶血實(shí)驗(yàn)(CAMP)等免疫學(xué)檢測(cè)，被確定為李斯特氏菌后進(jìn)一步進(jìn)行血清分型．整個(gè)檢驗(yàn)周期較長(zhǎng)，需4～7 d左右．目前我國(guó)常用的檢驗(yàn)方法主要是國(guó)標(biāo)法(GB 4789．30—2010)［11］，其采用的平板培養(yǎng)法靈敏度高，成本低，可以給出定性和定量的結(jié)果，但是步驟多、過程較復(fù)雜、周期長(zhǎng)．Zunabovic等人［12］已經(jīng)指出許多單增李斯特菌的官方檢測(cè)方法(如國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織(International Organization for Standardization(ISO)和FAD)的不同，它們使用不同的前增菌培養(yǎng)基和培養(yǎng)時(shí)間，而培養(yǎng)溫度是相同的(30℃)．選擇性增菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度(30/35/37℃)和時(shí)間依據(jù)各種標(biāo)準(zhǔn)而不同．近年來，常規(guī)的傳統(tǒng)微生物分析方法已經(jīng)被改進(jìn)為快速、便捷的簡(jiǎn)便方法，如在選擇培養(yǎng)基上使用熒光或顯色底物并且避免進(jìn)行進(jìn)一步做生化測(cè)試的需要．商業(yè)化的形態(tài)、生化、生理檢測(cè)也經(jīng)常使用傳統(tǒng)常規(guī)檢測(cè)方法［13］．

1．2 快速檢測(cè)方法

1．2．1 免疫學(xué)方法

免疫學(xué)方法是基于抗原和抗體特異性結(jié)合．抗原的抗原決定簇可識(shí)別抗體上的表位并與之結(jié)合．單克隆抗體可以識(shí)別一個(gè)特定的表位，而多克隆抗體則可以識(shí)別特定抗原或多個(gè)抗原的幾個(gè)表位．抗體和免疫學(xué)檢測(cè)的類型影響單增李斯特菌的檢測(cè)限．目前廣泛使用的檢測(cè)方法如酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)、側(cè)流免疫法(Lateral Flow Immunoassay)和免疫磁性分析(IMS)等．

ELISA法是基于抗原或抗體能吸附至固相載體的表面并保持其免疫活性，抗原或抗體與酶形成的酶結(jié)合物仍保持其免疫活性和酶催化活性的基本原理．在測(cè)定時(shí)，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析，通常使用的是夾心ELISA．Shim等人［14］研究了免疫層析法(Immuno Chromato Graphy，ICG)條帶測(cè)試和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)聯(lián)合IMS(3B12-17 MAb)定量測(cè)定單增李斯特菌．他們使用116個(gè)自然污染的肉類樣品，運(yùn)用ICG-IMS可在15 h內(nèi)檢測(cè)出這些致病菌，檢測(cè)限達(dá)到102cfu/10g．Portanti等［15］針對(duì)肉類、海鮮和乳制品中的190個(gè)自然和30個(gè)人為污染的樣品，用ISO方法驗(yàn)證ELISA法，得到的結(jié)果和標(biāo)準(zhǔn)一致，檢測(cè)限為6．6×103cfu/mL并且在樣品中的相對(duì)檢測(cè)限為5～10 cfu/g．

為了提高ELISA法的靈敏度，可將熒光標(biāo)記物添加到抗體上(ELFA)．目前酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)法常用的標(biāo)記物為堿性磷酸酶，首先將LM抗原與單克隆抗體結(jié)合，再將結(jié)合有堿性磷酸酶的抗體與LM抗原結(jié)合．堿性磷酸酶作用于底物4-甲基傘形磷酸酮，使之轉(zhuǎn)換成4-甲基傘形酮而發(fā)出熒光．通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度(熒光強(qiáng)度與抗原含量成正比)可推算出樣品中單增李斯特菌的數(shù)量．對(duì)于22種自然污染的奶酪、魚、牛奶、草莓樣品，Jaakohuhta等［16］用時(shí)間分辨熒光免疫分析(Time-resolved FIA)和商業(yè)ELISA法進(jìn)行檢測(cè)比較，兩種方法很好地相關(guān)，但是前者花費(fèi)時(shí)間更少(16 h)且更靈敏(20 cfu/mL)．

此外，側(cè)流免疫法或免疫色譜法(immunochromatography)的抗體和其靶標(biāo)物反應(yīng)是肉眼可見的，它依賴于樣品中的靶標(biāo)物向固定在膜表面的抗體遷移．Cho等人［17］研究了一種側(cè)流層析免疫法聯(lián)合磁選步驟，在牛奶樣品中用單增李斯特菌的單克隆抗體LZF7和LZH1在2h內(nèi)檢出靶標(biāo)菌，檢測(cè)限為102cfu/mL．

1．2．2 生物傳感器

生物傳感器(biosensor)是一種由生物識(shí)別元件和信號(hào)轉(zhuǎn)換元件組成的檢測(cè)目標(biāo)化合物的分析裝置．其中，生物識(shí)別元件(感受器，bioreceptor)是具有分子識(shí)別能力的生物活性物質(zhì)(如細(xì)胞、細(xì)胞器、細(xì)胞膜、酶、抗體、核酸、有機(jī)物分子等);信號(hào)轉(zhuǎn)換元件(換能器，transducer)主要有電化學(xué)電極、表面等離子共振器件、場(chǎng)效應(yīng)晶體管等．生物傳感器的原理是信號(hào)轉(zhuǎn)換元件可以將待測(cè)物與分子識(shí)別元件特異性結(jié)合后，所產(chǎn)生的復(fù)合物(或光、熱等)轉(zhuǎn)變?yōu)榭梢暂敵龅碾娦盘?hào)、光信號(hào)等，從而達(dá)到分析檢測(cè)的目的．生物傳感器有多種分類方法，根據(jù)生物傳感器的信號(hào)轉(zhuǎn)換器可分為電化學(xué)式生物傳感器、光學(xué)式生物傳感器等．

Radhakrishnan等人［18］在沒有增菌的前提下，用交流阻抗法和單克隆IgG1抗體檢測(cè)出人工接種番茄提取物的單增李斯特菌，檢測(cè)限可達(dá)4 cfu/mL．Leonard等［19］采用BIAcore3000生物傳感器檢測(cè)Listeria monocytogenes，30min 內(nèi)，檢測(cè)限可達(dá)到 1 ×105cell/mL．Davis等［20］用絲網(wǎng)印刷碳電極(screen-printed carbon electrode，SPCE)條作一次性安培傳感器(disposable amperometric sensors)，在1 h內(nèi)檢測(cè)出藍(lán)莓樣品中的單增李斯特菌，檢測(cè)限為102cfu/g．Vaughan等［21］用石英晶體微天平(quartz crystal microbalance，QCM)對(duì)Listeria monocytogenes進(jìn)行快速檢測(cè)，研究表明:在溶液中，該傳感器實(shí)時(shí)檢測(cè)李斯特菌的檢測(cè)限是1×107cells/mL，該傳感器能夠重復(fù)使用10次以上．Sharma等［22］用懸臂梁壓電生物傳感器和商業(yè)的抗單增李斯特菌多克隆抗體在牛奶樣品中檢出目標(biāo)菌，檢出限為103cells/mL，此方法增加第3個(gè)抗體連接步驟，可使檢出限1 h內(nèi)降低到102cells/mL．這些使用生物傳感器的檢測(cè)方法的檢測(cè)時(shí)間都小于24 h，有的甚至只需短短幾小時(shí)，但是它們的檢測(cè)限通常要比使用擴(kuò)增方法高，可見該方法的靈敏度有待提高．

1．2．3 基于噬菌體的檢測(cè)方法

基于噬菌體檢測(cè)方法在食品安全和檢測(cè)中的應(yīng)用很早就被提及［23-24］，其優(yōu)點(diǎn)包括檢測(cè)目標(biāo)的特異性強(qiáng)，靈敏度高，可以區(qū)分死活細(xì)胞等．可用噬菌體尾蛋白的商業(yè)免疫學(xué)方法檢測(cè)單增李斯特菌，在市場(chǎng)上也有用噬菌體在李斯特菌細(xì)胞中產(chǎn)生修飾報(bào)告蛋白的系統(tǒng)．通過使用超順磁珠，噬菌體蛋白可對(duì)李斯特菌進(jìn)行分離、檢測(cè)．從275個(gè)自然污染的食品樣品(生菜、奶酪、三文魚、肉類、牛奶)中可以檢出該致病菌，經(jīng)6 h前增菌后，所有食品樣品的檢測(cè)限為102cfu/g，而24 h增菌后，除軟奶酪之外所有樣品的檢測(cè)限可達(dá)0．1 cfu/g，其靈敏度要比標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)方法高［25］．Walcher等［26］用噬菌體蛋白包裹的磁珠從污染的牛奶樣品中分離單增李斯特菌，再用RT-PCR等檢測(cè)靶標(biāo)菌．這使得IMS、DNA-isolation和RT-PCR(在prfA;毒力因子的轉(zhuǎn)錄激活因子下)檢測(cè)限可達(dá)102～103cfu/mL．

1．2．4 分子生物學(xué)方法

被單增李斯特菌污染的樣品通常細(xì)菌量少，給檢測(cè)帶來很大的難度，而分子生物學(xué)檢測(cè)方法通過擴(kuò)增少量細(xì)菌中特定的基因信號(hào)而達(dá)到檢測(cè)的目的．目前，很多分子生物學(xué)方法現(xiàn)已被用于食品樣品中單增李斯特菌的檢測(cè)，如核酸探針雜交技術(shù)和PCR技術(shù)等，其中以常規(guī)PCR技術(shù)為基礎(chǔ)的各種新型PCR技術(shù)(如定量PCR(qPCR)、實(shí)時(shí)熒光PCR(Real-time PCR)、多重PCR等)不斷出現(xiàn)，并廣泛應(yīng)用于單增李斯特菌的檢測(cè)，使得食品中單增李斯特菌的檢測(cè)愈來愈快捷簡(jiǎn)便．近年來，隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，在PCR基礎(chǔ)上又開發(fā)了一些新的檢測(cè)技術(shù)，如恒溫?cái)U(kuò)增［27］，包括環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)、超分支滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)(hyperbranchedrolling cycle amplification，HRCA)、核酸序列依賴性擴(kuò)增技術(shù)(nucleic acid sequence-based amplification，NASBA)．

1．2．4．1 多重 PCR

多重PCR是在同一PCR反應(yīng)體系中加入2對(duì)或2對(duì)以上的引物，可同時(shí)擴(kuò)增出多個(gè)核酸片段進(jìn)行檢測(cè)，該方法能同時(shí)檢測(cè)出多種病原菌．Kanuganti等［28］用李斯特菌屬的23SrRNA基因和單增李斯特菌的hlyA特異基因，能在樣品中同時(shí)鑒定單增李斯特菌和李斯特菌屬的其他細(xì)菌．Zeng等人［29］用多重PCR在牛奶樣品中檢測(cè)李斯特菌屬和單增李斯特菌，以及牛奶加工環(huán)境中(原料奶、污水、容器表面)分離得到的單增李斯特菌的iap和hly．Germini等［30］使用多重PCR檢測(cè)液體狀態(tài)蛋樣品中的單增李斯特菌(prfA基因)、沙門氏菌、大腸桿菌，在經(jīng)過15 h增菌后檢測(cè)限為0．4 cfu/g．

1．2．4．2 實(shí)時(shí)熒光 PCR(Real-time PCR)

實(shí)時(shí)熒光PCR是在傳統(tǒng)PCR的基礎(chǔ)上，在反應(yīng)混合物中加入熒光標(biāo)記，它能結(jié)合在雙鏈DNA的位置，依據(jù)循環(huán)的增加而導(dǎo)致熒光量的增加，可直接對(duì)靶DNA進(jìn)行定量的檢測(cè)．其減少了檢測(cè)過程假陽性的發(fā)生率，縮短檢測(cè)周期，彌補(bǔ)了常規(guī) PCR技術(shù)靈敏度低、特異性差等缺點(diǎn)．Rossmanith等［31］用實(shí)時(shí)熒光PCR在人工污染的牛奶和三文魚、鵝肝醬、奶酪樣品中檢測(cè)單增李斯特菌(prfA)，檢測(cè)限分別為0．3 cfu/mL和0．07 ～0．6 cfu/g．Rodriquez-Lazaro等人［32］用實(shí)時(shí)熒光 PCR 檢測(cè)豬肉、家禽肉類，即食生菜沙拉和奶酪樣品的單增李斯特菌，當(dāng)25 g樣品稀釋1∶10時(shí)檢測(cè)結(jié)果最好，經(jīng)過24 h富集后可在27 h內(nèi)完成檢測(cè)，檢測(cè)限為 0．08 ～0．16 cfu/g．

1．2．4．3 核酸探針雜交技術(shù)

核酸探針雜交技術(shù)是以李斯特菌屬或種特異核酸序列(RNA或DNA)為探針，可以進(jìn)行李斯特菌屬或種水平上的鑒定．1988年，Datta等人［33］克隆出李斯特氏菌β溶血素基因的一個(gè)500 bp DNA片斷并進(jìn)行測(cè)序，以此序列合成4種寡核苷酸探針，經(jīng)斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該探針只與李斯特氏菌反應(yīng)，與其他種的李斯特氏菌和屬外的細(xì)菌均呈陰性，該方法表現(xiàn)出很好的特異性．但探針雜交無法分辨死菌和活菌，所以檢測(cè)無法完全避免假陽性結(jié)果．隨著探針技術(shù)的逐漸成熟，研究人員將多個(gè)DNA特異性探針固定到芯片上，制成基因芯片，采用熒光標(biāo)記法提高檢測(cè)靈敏度．基因芯片能夠同時(shí)檢測(cè)多種菌，可以減少實(shí)驗(yàn)次數(shù)，并且檢測(cè)所需的引物較少．Volokhov等［34］以李斯特的6種毒力蛋白基因?yàn)榘谢蛟O(shè)計(jì)多重PCR，從而開發(fā)出了基因芯片檢測(cè)單增李斯特菌，檢測(cè)時(shí)可達(dá)到種的水平．

1．2．4．4 恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)是繼PCR技術(shù)后發(fā)展起來的一門新型的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)，它是一種以恒溫方式擴(kuò)增DNA及RNA的方法，如LAMP、HRCA、NASBA等．該方法有操作簡(jiǎn)便、特異性好、靈敏度高不需要特殊的儀器設(shè)備等特點(diǎn)．環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是由Notomi等［35］2000年建立的體外擴(kuò)增特異DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，LAMP法是針對(duì)靶基因上的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4條引物，利用鏈置換型DNA聚合酶在恒溫條件下進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，可在15～60 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)109～1010倍的擴(kuò)增，反應(yīng)能產(chǎn)生大量的擴(kuò)增產(chǎn)物即焦磷酸鎂白色沉淀，可以通過肉眼觀察白色沉淀的有無來判斷靶基因是否存在．Wang等［36］以單增李斯特菌的iap基因作為引物，采用LAMP法檢測(cè)125個(gè)牛奶樣品中單增李斯特氏菌，建立了食品中單增李斯特菌LAMP檢測(cè)方法，當(dāng)經(jīng)過6 h富集，該方法100%與ISO標(biāo)準(zhǔn)一致，檢測(cè)限為186 cfu/mL．Wan等［37］基于單增李斯特菌hlyA靶向基因，用單疊氮丙啶的LAMP法檢測(cè)雞肉、豬肉、牛肉和奶粉中的單增李斯特菌，在純培養(yǎng)情況下檢測(cè)限為102cfu/mL而在全部測(cè)試食品樣品情況下則為3．1×103cfu/g．

2 各種檢測(cè)方法的特點(diǎn)

單增李斯特菌檢測(cè)方法很多(表1)，都具有不同特點(diǎn)，并且檢測(cè)的靈敏度通常隨前增菌而增加．常規(guī)(培養(yǎng)和色譜)技術(shù)是基于表型測(cè)試．其優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、可操作性強(qiáng)、成本低，但是檢驗(yàn)周期較長(zhǎng)、特異性低，不能滿足食品中單增李斯特菌及時(shí)、快速、靈敏的檢測(cè)要求，不利于食品的監(jiān)督管理和疾病預(yù)防［41-42］．在現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)管或疾病快速診斷時(shí)，單增李斯特菌的各種快速檢測(cè)方法表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)，然而最終確認(rèn)單增李斯特菌仍然需要依靠傳統(tǒng)常規(guī)檢測(cè)技術(shù)．

免疫學(xué)方法的特異性是基于抗原-抗體的特異性結(jié)合，該方法檢測(cè)可以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，速度快，重復(fù)性好，對(duì)于食品中存在的干擾不敏感，其特異性并無足夠高且靈敏度低于分子生物學(xué)的方法．生物傳感器檢測(cè)快速(＜24 h)，有的甚至只需幾個(gè)小時(shí)，分析檢測(cè)步驟簡(jiǎn)單，使在線實(shí)時(shí)檢測(cè)成為可能．但是，其檢測(cè)限要比其他方法高，所以在靈敏性方面，生物傳感器還有待提高．此外生物傳感器的響應(yīng)時(shí)間和壽命還需要進(jìn)一步加快和延長(zhǎng)．基于噬菌體的檢測(cè)方法在檢測(cè)時(shí)目標(biāo)的特異性強(qiáng)，靈敏度高，可以區(qū)分死活細(xì)胞．

相對(duì)于其他技術(shù)，使用DNA或RNA序列作為靶向序列的分子生物學(xué)方法特異性更強(qiáng)，Jasson等［41］研究發(fā)現(xiàn)相比于DNA，RNA提供了有關(guān)細(xì)菌生存能力的更多信息并有更高的靈敏度;另一方面，由于rRNA較穩(wěn)定，細(xì)菌細(xì)胞死亡后其降解速度較慢，以rRNA作為靶向序列的檢測(cè)可能就會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果［43］．分子生物學(xué)方法檢測(cè)迅速、可重復(fù)性強(qiáng)，能夠同時(shí)設(shè)置多參數(shù)檢測(cè)，并且可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化．但是，分子生物學(xué)方法存在一定的缺陷:其花費(fèi)的成本較高，在檢測(cè)過程中出現(xiàn)假陽性率偏高，并且易對(duì)食品的品質(zhì)產(chǎn)生負(fù)面影響，尤其是PCR法［41-42］．

除了檢測(cè)步驟外，多數(shù)方法包括樣品制備或富集，這些都會(huì)對(duì)最終的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響．同樣地，食品的種類、食品樣品中其他微生物對(duì)目標(biāo)病原體的應(yīng)力條件(如亞致死損傷的細(xì)胞)都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果［41］．

表1 單增李斯特菌的常規(guī)檢測(cè)方法和各種快速檢測(cè)方法

3 總結(jié)

單增李斯特菌是一種重要的食源性致病菌，雖然感染率較低，但死亡率很高．盡管我國(guó)尚未有相關(guān)單增李斯特菌食物中毒的報(bào)導(dǎo)，但這種病菌在自然界廣泛存在，食品中存在的單增李斯特菌對(duì)我國(guó)人民的健康帶來了很大的威脅，因此在食品上市和消費(fèi)前開展李斯特菌的相關(guān)檢測(cè)非常必要．隨著對(duì)復(fù)雜生物體系中痕量組分檢測(cè)的要求越來越高，超高靈敏度檢測(cè)在食品安全中的需求也越來越高．目前我國(guó)主要的檢測(cè)方法為傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法結(jié)合顯色培養(yǎng)基和基于生化反應(yīng)的VITEK系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，無法滿足對(duì)食品的實(shí)時(shí)檢測(cè)需要．而現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)展出多種單增李斯特菌的快速檢測(cè)方法，并且可在48 h內(nèi)完成檢測(cè)．對(duì)于單增李斯特菌的快速檢測(cè)，免疫學(xué)方法、分子生物學(xué)方法仍然是主線．另外，檢測(cè)中增菌時(shí)間正在縮短或者一些新技術(shù)中無需前增菌．目前，進(jìn)一步改進(jìn)現(xiàn)有的快速檢測(cè)方法或?qū)⒁延械姆椒ㄓ袡C(jī)結(jié)合，建立一套更加快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的檢測(cè)體系運(yùn)用到實(shí)際樣品檢測(cè)中是今后研究的重要內(nèi)容．

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