河北酸棗總黃酮提取工藝研究

田秀紅，黎梅，張慧姣，高文玲，田文軒

（1.河北師范大學(xué)旅游學(xué)院，河北石家莊050024；2.河北師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，河北石家莊050024；3.石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北石家莊050035）

河北酸棗總黃酮提取工藝研究

田秀紅1，黎梅2，*，張慧姣2，高文玲2，田文軒3

（1.河北師范大學(xué)旅游學(xué)院，河北石家莊050024；2.河北師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，河北石家莊050024；3.石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北石家莊050035）

采用超聲波提取法、常溫浸泡法、水浴加熱法和微波提取法四種方法提取酸棗中的總黃酮，探討酸棗總黃酮的最佳提取工藝。酸棗的總黃酮含量采用紫外分光光度法檢測(cè)。用微波提取法、時(shí)間為150 s、用水作溶劑時(shí)提取的總黃酮含量最高，為2.509 mg/g。結(jié)果表明微波輔助是提取酸棗總黃酮的有效方法。

酸棗；總黃酮；超聲波法；常溫浸泡法；水浴加熱法；微波法

酸棗（Wildjujube），別名山棗、棘，為鼠李科（Rhamnaceae）棗屬植物（Ziziphusjujuba Mill）的果實(shí)。主要是野生在山坡、曠野或路旁，主產(chǎn)區(qū)位于太行山一帶，以河北南部的邢臺(tái)為主，素有“邢臺(tái)酸棗甲天下”之美譽(yù)，是全國(guó)最大的酸棗產(chǎn)業(yè)基地。

酸棗營(yíng)養(yǎng)豐富且含大量生物活性成分，如大棗皂甙Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ（ziziphus saponinⅠ，Ⅱ，Ⅲ）、酸棗仁皂甙B（jujuboside B）、光千金藤堿（stepharine）、葡萄糖、果糖、蔗糖、環(huán)磷腺苷（cAMP）、環(huán)磷烏苷（cGMP）等，具有獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值［1-4］。其中黃酮類(lèi)有效成分，具有預(yù)防心腦血管疾病、防癌抗癌及抗氧化等功效［5-6］。

近年來(lái)，現(xiàn)代提取技術(shù)微波輔助、超聲波輔助等在環(huán)境、生化、食品及天然產(chǎn)物等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，如天然產(chǎn)物中揮發(fā)油、苷類(lèi)多糖、生物堿等成分的提取［7-9］。本實(shí)驗(yàn)以乙醇為溶劑，用紫外分光光度法分析酸棗總黃酮的含量；運(yùn)用超聲波輔助提取、常溫浸泡提取、水浴加熱提取和微波輔助提取等4種方法，旨在獲得最佳數(shù)據(jù)，為確定酸棗總黃酮的提取工藝提供實(shí)驗(yàn)參考。

1　材料與儀器

1.1樣品和試劑

樣品：河北邢臺(tái)酸棗

試劑：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品：由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；甲醇，乙醇，亞硝酸鈉，三氯化鋁，氫氧化鈉，以上試劑均為分析純?cè)噭?，均由山東華魯恒升化工股份有限公司提供。

1.2儀器

數(shù)控超聲波清洗器（KQ-500DE）：昆山市超聲儀器有限公司；微波爐（MK-2485M）：青島海爾微波制品有限公司；恒溫水浴鍋（HH-4）：金壇市科興儀器廠；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（T6世紀(jì)）：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；分析天平（AUY220）：日本島津制作所。

2　方法

2.1樣品前期處理方法

棗果去核后切成薄片均勻鋪在洗凈的托盤(pán)上，于60℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中烘至恒重，然后用研缽粉碎成粉末狀，粉碎后的樣品置于試劑瓶中，在干燥器中儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

2.2分析方法

用紫外分光光度法［10］測(cè)定總黃酮含量。

2.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品9.3 mg，加入60%乙醇，用超聲分散溶解，定量轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，再用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即蘆丁儲(chǔ)備液。用吸量管吸取上述溶液0.0、0.3、0.5、0.8、1.0、1.3、1.5、1.8、2.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，加60%乙醇溶液至5 mL，準(zhǔn)確加入5%亞硝酸鈉0.3 mL，搖勻，放置6 min，再加入10%三氯化鋁溶液0.3 mL，搖勻，放置10 min，再加入4%氫氧化鈉溶液4 mL，最后加60%乙醇至刻度，搖勻，放置10 min。以未加標(biāo)準(zhǔn)品的溶液作空白，在510 nm處測(cè)量吸光度（A）。平行測(cè)定3次取平均值。測(cè)定回歸方程。

2.2.2樣品測(cè)定

取待測(cè)酸棗樣品2份，按照測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測(cè)定吸光度，其中有一份不加NaOH作為消除底色的對(duì)照液，用加NaOH的吸光值減去對(duì)照液的吸光值，根據(jù)回歸方程計(jì)算總黃酮的含量。平行實(shí)驗(yàn)3次取平均值。

2.3方法

2.3.1超聲波提取法

準(zhǔn)確稱(chēng)取酸棗粉3份，每份2 g。用90%甲醇、60%乙醇、去離子水各30 mL溶解，超聲提取3 h。提取后用60%乙醇定容至50 mL比色管中，過(guò)濾，保留濾液待用。超聲溫度分別為30℃和50℃。

2.3.2常溫浸泡法

準(zhǔn)確稱(chēng)取酸棗粉3份，每份2 g。用90%甲醇、60%乙醇、去離子水各30 mL溶解，常溫（28℃）浸泡3 h。提取后用60%乙醇定容至50 mL比色管中，過(guò)濾，保留濾液待用。

2.3.3水浴加熱法

準(zhǔn)確稱(chēng)取酸棗粉3份，每份2 g。用90%甲醇、60%乙醇、去離子水各30 mL溶解，水浴加熱3 h。水浴溫度為70℃。提取后用60%乙醇定容至50 mL比色管中，過(guò)濾，保留濾液待用。

2.3.4微波提取法

準(zhǔn)確稱(chēng)取酸棗粉3份，每份2 g。用90%甲醇、60%乙醇、去離子水各30 mL溶解，然后用微波爐提取。提取后用60%乙醇定容至50 mL比色管中，過(guò)濾，保留濾液待用。微波時(shí)間分別為90、120、150 s。

3　結(jié)果與分析

紫外分光光度法檢測(cè)總黃酮并測(cè)定其含量?？傸S酮含量分析方法，以活性成分蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，在其紫外最大吸收峰510 nm處測(cè)定總黃酮的含量。

3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線

由蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品配制標(biāo)準(zhǔn)系列，用紫外分光光度法在510 nm處測(cè)定蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度，測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1。

圖1　蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1The standard curve of rutin density

回歸方程為y=22.73x+0.018 73，R2=0.998 6。

3.2超聲波提取法

在不同溫度下，采用不同溶劑以超聲波輔助提取酸棗中的總黃酮，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2　溶劑和溫度對(duì)超聲波輔助提取總黃酮的影響Fig.2The effect form solvent and temperature to extract total flavonoids by by using microwave extraction method.

圖2表明在超聲溫度為30℃時(shí)，用水提取的總黃酮的提取量最高，為2.330 mg/g。

3.3常溫浸泡法

在酸棗粉末樣品中加入不同溶劑，于室溫下浸泡提取，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3　常溫浸泡和水浴加熱法提取總黃酮的對(duì)比Fig.3Compare the room temperature immersion method and water bath heating method

由圖3可見(jiàn)，在常溫浸泡的條件下，用水浸泡從酸棗中提取的總黃酮含量最高，為2.492 mg/g。

3.4水浴加熱法

酸棗粉末樣品，溶解在不同溶劑中，水浴加熱3 h。水浴溫度為70℃。由圖3表明在水浴加熱的條件下，水浴溫度為70℃時(shí)，用60%的乙醇為溶劑提取從酸棗中提取的總黃酮的含量最高，為2.165 mg/g，但是低于以水為溶的常溫浸泡法（2.492 mg/g）。

3.5微波提取法

酸棗粉末樣品，溶解在不同溶劑中，在微波爐中加熱不同時(shí)間提取總黃酮。結(jié)果如圖4所示。

圖4　溶劑和微波時(shí)間對(duì)微波輔助提取總黃酮的影響Fig.4Comapre the effect of microwave extraction method between solvent and microwave time

微波時(shí)間為150 s時(shí)，用水提取酸棗中的總黃酮的含量最高，為2.509 mg/g，且是試驗(yàn)方法中提取率最高的。

4　結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用了超聲波提取法、常溫浸泡法、水浴加熱法、微波提取法4種方法提取大棗中的總黃酮，在超聲波提取法中溫度為變量，在微波提取法中時(shí)間為變量。在微波提取的條件下，時(shí)間為150s時(shí)，用水作溶劑，從酸棗中提取的總黃酮的含量最高，為2.509 mg/g。由此可知：從酸棗中提取總黃酮的最佳方法是采用微波輔助的水提取方法。該方法綠色環(huán)保無(wú)污染，且方法簡(jiǎn)便，條件溫和，易于推廣。

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［4］韓志萍.陜北紅棗中總黃酮的提取及含量比較［J］.食品科學(xué)，2006，27（12）：560-562

［5］張志國(guó).冬棗核類(lèi)黃酮的提取工藝研究及其生物功能初探［D］.陜西：陜西師范大學(xué)，2006

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［10］苗利軍.棗果中三萜酸等功能性成分分析［D］.河北：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006

Study on the Extraction Technology of Total Flavonoids of Hebei Wild Jujube

TIAN Xiu-hong1，LI Mei2，*，ZHANG Hui-jiao2，GAO Wen-ling2，TIAN Wen-xuan2
（1.The Tourism College of Hebei Normal University，Shijiazhuang 050024，Hebei，China；2.College of Chemistry and Materials Science，Hebei Normal University，Shijiazhuang 050024，Hebei，China；3.Shijiazhuang Yiling Pharaceutical Co.Ltd.，Shijiazhuang 050035，Hebei，China）

To study the best extraction technology of total flavonoids from wild jujube.Using ultrasonic extraction method，room temperature immersion method，water bath heating method and microwave extraction method of four kinds of methods of Extracting Total Flavonoids from jujube.Quantitative determination of total flavonoids from wild jujube by UV spectrophotometry.The highest total flavonoids content was 2.509 mg/g by using microwave extraction in 150 s，water as solvent.The result showed that microwave extraction method was the efficient way to extracting total flavonoids from jujube.

Wild jujube；total flavonoids；ultrasonic extraction method；room temperature immersion method；water bath heating method；microwave extraction method

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.13.021

2014-01-08

河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（10221003D）

田秀紅（1963—），女（漢），副教授，學(xué)士，研究方向：食品化學(xué)與飲食保健。

黎梅（1962—），女（漢），副教授，博士，研究方向：化學(xué)分析。