黔產(chǎn)長裙竹蓀菌蓋部分化學(xué)成分分析

張靜，湯洪敏，2，*

（1.貴州民族大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽550025；2.貴州民族大學(xué)貴州民族醫(yī)藥研究院，貴州貴陽550025）

黔產(chǎn)長裙竹蓀菌蓋部分化學(xué)成分分析

張靜1，湯洪敏1，2，*

（1.貴州民族大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽550025；2.貴州民族大學(xué)貴州民族醫(yī)藥研究院，貴州貴陽550025）

為進(jìn)一步了解黔產(chǎn)長裙竹蓀菌蓋部分的化學(xué)成分，為其開發(fā)利用提供參考，采用大孔樹脂和硅膠柱色譜等方法對黔產(chǎn)長裙竹蓀菌帽部分的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，并用氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）鑒定其化合物。結(jié)果顯示：從竹蓀菌蓋部分分離得到6個化合物，分別鑒定為十六烷酸（16-Hexadecanoic acid）、2-呋喃甲酸（2-Furancarboxylic acid）、2-異丙基-5-甲基環(huán)己醇（5-methyl-2-（1-methyl）-）、5-氧代吡咯烷-2-甲酸甲酯（methyl 5-oxo-DL-prolinate）、鄰苯二甲酸丁基異丁酯（Butyl isobutyl phthalate，BIP）、鄰苯二甲酸二丁酯（Dibutyl phthalate，DBP）。其中化合物2-呋喃甲酸和5-氧代吡咯烷-2-甲酸甲酯是首次在竹蓀中被檢測到。

長裙竹蓀；菌蓋；化學(xué)成分；氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀

竹蓀（Dictyophora indusiata），又名竹參、竹菌，隸屬于鬼筆目，鬼筆科，竹蓀屬。我國野生竹蓀主要有長裙竹蓀、短裙竹蓀、黃裙竹蓀、朱紅竹蓀、紅托竹蓀、皺蓋竹蓀和棘托竹蓀7個種，主長在盛產(chǎn)竹林的地區(qū)［1］，其中貴州省織金縣2 000年被中國食用菌協(xié)會授予“中國竹蓀之鄉(xiāng)”的稱號［2］。竹蓀是一類美味珍稀的食用真菌，對降血脂［3］，抗腫瘤［4］，抗輻射［5］等有一定的療效，具有很高的開發(fā)價值。然而，在對竹蓀傳統(tǒng)的食用和加工中是將菌蓋部分丟棄，未加以利用，造成了勞動力和資源的極大浪費(fèi)。

目前，對竹蓀的研究重點(diǎn)由過去的生物學(xué)性狀描述和栽培技術(shù)研究［6-7］，轉(zhuǎn)向了對竹蓀的生物學(xué)特性及活性［8-14］，營養(yǎng)成分與藥效［15-17］，多糖的提取、分析［18-22］，化學(xué)成分分析［11-13，23-25］的研究。其中，對竹蓀化學(xué)成分的研究多為對竹蓀浸提液直接進(jìn)行GC-MS檢測，分析竹蓀中含有的化學(xué)成分。檀東飛［12］分別用水蒸汽蒸餾法和石油醚萃取法從竹蓀菌蓋中檢測到41種和30種化學(xué)成分；黎璐等［23］應(yīng)用石油醚對長裙竹蓀子實體鮮品中進(jìn)行萃取，運(yùn)用GC-MS共檢測出70種化學(xué)成分，其中菌蓋中檢測到36種。對竹蓀化學(xué)成分研究中，大多是對其所含化學(xué)成分進(jìn)行檢測，對竹蓀有效活性成分進(jìn)行分離獲得單一化合物，并對其進(jìn)行鑒定的報告較少。因此本試驗采用不同溶劑依次對黔產(chǎn)長裙竹蓀的菌蓋部分進(jìn)行浸提，經(jīng)反復(fù)的柱層析分離獲得單一化合物，通過GC-MS對其進(jìn)行鑒定，為下一步對黔產(chǎn)長裙竹蓀菌蓋部分的綜合利用提供科學(xué)參考。

1　材料與方法

1.1材料

長裙竹蓀鮮品購于貴州省安順市某種植基地，菌種來源為當(dāng)?shù)匾吧N轉(zhuǎn)化的人工種植品種。

D101型大孔吸附樹脂：天津市優(yōu)譜化學(xué)試劑有限公司；ZCX-Ⅱ型柱層析硅膠（100目～200目）：青島海洋化工廠分廠；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠（50目～100目）：青島海洋化工廠分廠；GF254薄層硅膠板：青島海洋化工廠；石油醚、氯仿、乙酸乙酯均為分析純，甲醇、乙醇為工業(yè)重蒸。

1.2儀器設(shè)備

HP6890A/5975C GC/MS聯(lián)用儀：美國安捷倫公司；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；BS-160A型自動部分收集器：上海青浦滬西儀器廠；ZF-2型三用紫外儀：上海市安亭電子儀器廠。

1.3方法

1.3.1提取分離

長裙竹蓀菌蓋部分3.5 kg用攪拌器粉碎后，乙醇常溫下萃取3次（3×10 L），每次10 d，減壓濃縮至無醇味后，用水分散，依次用石油醚，乙酸乙酯和氯仿萃取，分別得到萃取物9.4、8.6、11.32 g。

石油醚和乙酸乙酯萃取物經(jīng)大孔樹脂層析，以水-無水乙醇（20：0-0：20，體積比）梯度洗脫，每20 mL收集一管。點(diǎn)薄層層析板，以氯仿-丙酮（10∶1，體積比）做展開劑，用紫外燈及碘蒸氣檢查展開情況，將展開Rf值相似的組分合并，減壓回收溶劑。

氯仿萃取物經(jīng)100目～200目硅膠層析，以氯仿-甲醇（100：0-0：100，體積比）梯度洗脫，每20 mL收集一管。點(diǎn)薄層層析板，以氯仿-丙酮（10∶1，體積比）做展開劑，用紫外燈及碘蒸氣檢查展開情況，將展開Rf值相似的組分合并，減壓回收溶劑。

細(xì)分氯仿提取液，將經(jīng)硅膠層析后根據(jù)展開Rf值合并的各組分，上Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱，以氯仿-甲醇（100：0-0：100，體積比）梯度洗脫，每20 mL收集一管。點(diǎn)薄層層析板，用紫外燈及碘蒸氣檢查展開情況，將展開Rf值相似的組分合并，減壓回收溶劑。

1.3.2質(zhì)譜條件

離子源為70eV的EI源，質(zhì)量掃描范圍mlz30～500。

1.3.3色譜條件

分流比5∶1，柱流量1 mL/min，進(jìn)樣量1 μL。（其余條件見表1）。

2　結(jié)果與分析

石油醚萃取液經(jīng)大孔樹脂分離，點(diǎn)薄層板合并相似組分，得到8個組分，靜置數(shù)天，其中第6組分有白色斜長晶體析出（即化合物A），重95 mg，經(jīng)GC-MS鑒定，在32.754 min時有單一峰（見圖1）出現(xiàn)，與NIST08質(zhì)譜圖庫中的標(biāo)準(zhǔn)圖對照，按峰面積歸一化法進(jìn)行定量分析，為十六烷酸。

表1　不同化合物的色譜條件Table 1The chromatography condition of different compounds

圖1　竹蓀分離物十六烷酸的氣相色譜圖Fig.1GC chromatogram of 16-Hexadecanoic acid which were isolated from Dictyophora indusiata

乙酸乙酯萃取液經(jīng)大孔樹脂分離，點(diǎn)薄層板合并相似組分，得到9個組分，靜置數(shù)天，其中第3組分析出白色細(xì)長晶體（即化合物B），重為23 mg，經(jīng)GC-MS鑒定，在35.236 min時有單一峰出現(xiàn)（見圖2），與NIST08質(zhì)譜圖庫中的標(biāo)準(zhǔn)圖對照，按峰面積歸一化法進(jìn)行定量分析，為2-呋喃甲酸。

圖2　竹蓀分離物2-呋喃甲酸的氣相色譜圖Fig.2GC chromatogram of 2-Furancarboxylic acid which were isolated from Dictyophora indusiata

氯仿部分經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜的分離純化，點(diǎn)薄層板合并相似組分，通過紫外燈及碘蒸氣分析，獲得C、D、E、F 4個化合物。其中化合物C有22 mg，為淺黃色膏體，以氯仿/甲醇15∶1（體積比）的洗脫液獲得，經(jīng)GC-MS檢測，在11.646 min有單一峰出現(xiàn)（見圖3），為2-異丙基-5-甲基環(huán)己醇；化合物D有15 mg，棕色粉末，以氯仿/甲醇1∶1（體積比）的混合液洗脫獲得，經(jīng)GC-MS鑒定，在25.922 min有單一峰出現(xiàn)（見圖4），為5-氧代吡咯烷-2-甲酸甲酯；化合物E有21mg，略顯黃色油狀，是氯仿/甲醇1∶1（體積比）的混合液洗脫獲得，經(jīng)GC-MS鑒定，在18.864 min有單一峰出現(xiàn)（見圖5），為鄰苯二甲酸丁基異丁酯；化合物F有28 mg，略顯黃色油狀，以甲醇作洗脫劑獲得，經(jīng)GC-MS鑒定，在30.491 min有單一出現(xiàn)（見圖6），為鄰苯二甲酸二丁酯。

圖3　竹蓀分離物2-異丙基-5-甲基環(huán)己醇的氣相色譜圖Fig.3GC chromatogram of 5-methyl-2-（1-methyl）-which were isolated from Dictyophora indusiata

圖4　竹蓀分離物5-氧代吡咯烷-2-甲酸甲酯的氣相色譜圖Fig.4GC chromatogram of methyl 5-oxo-DL-prolinate which were isolated from Dictyophora indusiata

圖5　竹蓀分離物鄰苯二甲酸丁基異丁酯的氣相色譜圖Fig.5GC chromatogram of Butyl isobutyl phthalate which were isolated from Dictyophora indusiata

圖6　竹蓀分離物鄰苯二甲酸二丁酯的氣相色譜圖Fig.6GC chromatogram of methyl Dibutyl phthalate which were isolated from Dictyophora indusiata

鄰苯二甲酸二丁酯，常作為一種增塑劑（簡稱DBP）用于塑料加工業(yè)，在日常生活、生產(chǎn)中廣泛存在［26］。為驗證試驗中鑒定的鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）是竹蓀菌蓋部分分離所得，而非操作過程中使用一次性塑料滴管等的無意帶入，本試驗增加了對照組實驗，即將實驗常用的一次性塑料滴管浸泡在甲醇中2 min，并將該浸泡液進(jìn)行GC-MS檢測（其GC-MS條件與竹蓀菌蓋部分被鑒定出DBP的條件相同）。結(jié)果顯示，對照浸泡液的GC-MS圖在30.40 min～30.50 min時間段無峰出現(xiàn)（如圖7），與圖6在此時間段上有單一峰形成對比，說明鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）為黔產(chǎn)長裙竹蓀菌蓋部分分離所得。

圖7　塑料滴管浸泡液的氣相色譜圖Fig.7GC chromatogram of Wilkins-chalgren soaking solution

本試驗對竹蓀菌蓋部分進(jìn)行反復(fù)的柱層析分離純化，獲得單一化合物，通過GC-MS鑒定，確定出其中6個化合物，即十六烷酸（別名棕櫚酸）、2-呋喃甲酸（別名糠酸）、2-異丙基-5-甲基環(huán)己醇（別名薄荷醇）、5-氧代吡咯烷-2-甲酸甲酯（別名焦谷氨酸甲酯）、鄰苯二甲酸丁基異丁酯（別名BIP）、鄰苯二甲酸二丁酯（別名DBP）。其中，化合物2-呋喃甲酸和5-氧代吡咯烷-2-甲酸甲酯是首次從竹蓀中分離鑒定出來。在所分離獲得的6個化合物中，十六烷酸（棕櫚酸），2-異丙基-5-甲基環(huán)己醇（薄荷醇）以及鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)廣泛存在于植物中，是具有趨避作用和誘捕作用的植物源昆蟲信息素?；衔?-呋喃甲酸，是一種抑菌活性物質(zhì)［27］，在食品工業(yè)中可用作防霉劑、防腐劑［28］?；衔?-氧代吡咯烷-2-甲酸甲酯，作為一種焦谷氨酸酯類物質(zhì)，是合成具有生理活性化合物的理想手性原料，如昆蟲信息素-吉尼斯蟻警戒素［29］。

3　結(jié)論與討論

氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）適用于分離、分析、鑒定揮發(fā)性較高的復(fù)雜組分，是一種快速、高效的鑒定方法［30］，但對于利用氣相色譜-質(zhì)譜法直接對萃取液進(jìn)行化學(xué)成分分析時，可能受到色譜柱、色譜條件以及樣品的影響，會使某些組分不能較好分離，影響離子碎片的分析，降低譜庫比對的匹配度，從而不能確定待分析物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。本試驗對竹蓀菌蓋部分進(jìn)行反復(fù)的柱層析分離純化，獲得單一化合物，可特異性地探索最佳的色譜條件，對其進(jìn)行鑒定。本試驗對竹蓀菌蓋部分不同溶劑的浸提物進(jìn)行反復(fù)的分離純化，并通過GC-MS鑒定，與NIST08質(zhì)譜圖庫中的標(biāo)準(zhǔn)圖對照，按峰面積歸一化法進(jìn)行定量分析，對其中6種分離的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)確定，分別是十六烷酸、2-呋喃甲酸、2-異丙基-5-甲基環(huán)己醇、5-氧代吡咯烷-2-甲酸甲酯、鄰苯二甲酸丁基異丁酯、鄰苯二甲酸二丁酯。其中，化合物5-氧代吡咯烷-2-甲酸甲酯和2-呋喃甲酸是首次從竹蓀中分離鑒定出來。

同時，在分離獲得的6個化合物中，5-氧代吡咯烷-2-甲酸甲酯是合成吉尼斯蟻警戒素的原料，十六烷酸（棕櫚酸）、2-異丙基-5-甲基環(huán)己醇（薄荷醇）和鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)是對昆蟲具有趨避或誘捕作用的昆蟲信息素，2-呋喃甲酸則是一種有效的抑菌化合物，這些功能化合物在黔產(chǎn)長裙竹蓀的菌蓋部分被分離出來，說明了黔產(chǎn)長裙竹蓀的菌蓋部分具有潛在的研究、利用和開發(fā)價值，為以后對黔產(chǎn)長裙竹蓀菌蓋部分的誘捕、趨避功能以及抑菌功能的研究、開發(fā)利用提供一個新的參考思路。

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Analysis on Chemical Constituents from Pileus of Dictyophora Indusiata Produced in Guizhou

ZHANG Jing1，TANG Hong-min1，2，*
（1.College of Chemistry and Environmental Science，Guizhou Minzu University，Guiyang 550025，Guizhou，China；2.Guizhou Institute of Ethnic Medicine，Guizhou Minzu University，Guiyang 550025，Guizhou，China）

To study the chemical constituents from the pileus of D.indusiata in further，and to provided reference for its utilization.the compounds were isolated and purified by macroporous resin，column chromatography from the pileus of D.indusiata，and were identified by Gas Chromatography-Mass Spectrometry（GC-MS）.The results showed that six compounds were isolated and identified as 16-Hexadecanoic acid，2-Furancarboxylic acid，2-isopropyl-5-methyl-cyclohexanol，5-oxo-pyrrolidine-2-carboxylic acid methyl ester，Butyl isobutyl phthalate（BIP），Dibutyl phthalate（DBP）.Compounds 2-Furancarboxylic acid and 5-oxo-pyrrolidine-2-carboxylic acid methyl ester were obtained from the pileus of D.indusiata for the first time.

Dictyophora indusiata；pileus；chemical constituents；GC-MS

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.13.008

2014-12-27

國家自然基金項目地方基金項目（31160013）；貴州民族大學(xué)研究生科研項目（201447）

張靜（1988—），女（漢），在讀碩士，研究方向：民族醫(yī)藥。

湯洪敏（1969—），女（漢），教授，博士，研究方向：種質(zhì)資源保護(hù)。