高效液相色譜法測定枸櫞酸莫沙必利膠囊的含量

李含春　萬 霞

（1 雅安市食品藥品檢驗(yàn)所，四川 雅安 625000；2 雅安三九藥業(yè)有限公司，四川 雅安 625000）

高效液相色譜法測定枸櫞酸莫沙必利膠囊的含量

李含春1萬 霞2

（1 雅安市食品藥品檢驗(yàn)所，四川 雅安 625000；2 雅安三九藥業(yè)有限公司，四川 雅安 625000）

目的 對(duì)枸櫞酸莫沙必利膠囊中枸櫞酸莫沙必利的含量測定方法進(jìn)行研究。方法利用高效液相色譜儀，采用外標(biāo)法測定供試品中枸櫞酸莫沙必利含量與采用紫外-分光光度法測定枸櫞酸莫沙必利含量相比較。結(jié)果高效液相色譜含量結(jié)果為96.64%，紫外-分光光度法測定含量結(jié)果為96.82%。結(jié)論高效液相色譜方法操作簡便、準(zhǔn)確、靈敏，專屬性強(qiáng)，可用于枸櫞酸莫沙必利膠囊中枸櫞酸莫沙必利的含量測定。

枸櫞酸莫沙必利膠囊；高效液相色譜法；含量測定

枸櫞酸莫沙必利膠囊為膠囊劑，內(nèi)容物為白色或類白色粉末，含量測定是采用紫外可見分光光度法測定，其標(biāo)準(zhǔn)是國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)：YBH23852005。本法采用高效液相色譜，用外標(biāo)法測定供試品中枸櫞酸莫沙必利的含量［2］。

1　儀器與試藥

1.1儀器XS205DU電子天平（瑞士METTLER TOLEDO），Waters e2695-2489型高效液相色譜儀［沃特世科技（上海）有限公司（Waters）］，SevenMulti型pH/電導(dǎo)率/離子綜合測試儀（瑞士METTLER TOLEDO）TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

1.2試藥：枸櫞酸莫沙必利膠囊（上海信誼藥廠有限公司，批號(hào)：130512，規(guī)格5 mg），枸櫞酸莫沙必利對(duì)照品（批號(hào)：100656-201302，含量：94.2%）由中國食品藥品檢定研究院提供，甲醇（色譜純，Merck），磷酸二氫鉀，磷酸，乙醇均為國產(chǎn)分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1高效液相色譜法（溫度為19 ℃，相對(duì)濕度為65%）。色譜條件：色譜柱為Sepax GP-C18 4.6 mm×150 mm，柱溫為30 ℃，紫外檢測器，流速為1 mL/min，甲醇-0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)pH值至4.0）（75∶25）為流動(dòng)相，檢測波長為274 nm［1］。

2.1.1對(duì)照品配制：取枸櫞酸莫沙必利對(duì)照品0.01100 g至100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相10 mL，超聲振搖使枸櫞酸莫沙必利溶解后，加上述流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，濃度為103.62 μg/mL。

2.1.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：精密量取5 mL對(duì)照品儲(chǔ)備液至25 mL容量瓶用上述流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。理論塔板數(shù)按枸櫞酸莫沙必利峰計(jì)算為5144；枸櫞酸莫沙必利峰與相鄰峰的分離度＞1.5。見圖1、表1。

圖1　系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

圖2　-1線性關(guān)系

圖2　-2線性關(guān)系

圖3　精密度試驗(yàn)

圖4　穩(wěn)定性試驗(yàn)

圖5　樣品測定

表1　系統(tǒng)適用性試驗(yàn)表

表2　加樣回收率試驗(yàn)

2.1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與線性關(guān)系考察：分別精密量取1、2、5、8、10 mL對(duì)照品儲(chǔ)備液至25 mL容量瓶用上述流動(dòng)相釋至刻度，搖勻，分別精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。進(jìn)樣濃度分別為4.1、8.3、20.7、33.2、41.4 μg/mL。圖2-1峰面積分別為121014、254253、648132、1040000、1301687。以對(duì)照品濃度X（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)過線性回歸，枸櫞酸莫沙必利回歸方程為：Y<32775x-8696，r為0.999998，枸櫞酸莫沙必利在進(jìn)樣濃度為4.1～41.4 μg/mL內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系。見圖2-2。

2.1.4精密度試驗(yàn)：精密吸取同一混合對(duì)照溶液（精密量取5 mL對(duì)照品儲(chǔ)備液至25 mL容量瓶用上述流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，備用）20 μL，連續(xù)注入液相色譜儀6次，分別測定峰面積分別為640377、640230、639567、638647、638098、640403，平均值為639554，說明該方法精密度良好，RSD<0.2%。見圖3。

2.1.5供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液（精密稱定供試品20粒內(nèi)容物為2.4014 g，研細(xì)，精密稱出1份，供試品為0.1179 g，至50 mL容量瓶用上述流動(dòng)相釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取5 mL至25 mL容量瓶，用上述流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻備用）20 μL，分別于0、2、4、8、12、24 h，注入液相色譜儀，測定色譜圖面積。結(jié)果枸櫞酸莫沙必利的峰面積分別為587568、587090、587355、587677、587691、587274，平均峰面積為587443，RSD%為0.1%，結(jié)果表明供試品溶液在室溫條件下24 h內(nèi)穩(wěn)定，能滿足含量測定的要求，見圖4。

2.1.6加樣回收率試驗(yàn)：取已測知含量的樣品（批號(hào)130512，枸櫞酸莫沙必利含量為40.25 mg/g），研細(xì)，取9份，各約0.11 g，精密稱定，至50 mL容量瓶用上述流動(dòng)相釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取5 mL至25 mL容量瓶，再分別精密加入枸櫞酸莫沙必利對(duì)照品儲(chǔ)備液5 mL用上述流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖（表2）。計(jì)算，準(zhǔn)確度符合要求。

2.1.7含量測定供試品溶液：取本品20粒，精密稱定總重，傾出內(nèi)容物，混合均勻，膠囊殼用小刷試凈后，稱量膠囊殼總重，得到20粒內(nèi)容物總重為2.4014 g，研細(xì)，精密稱出內(nèi)容物2份，供試品1為0.1154 g，供試品2為0.1168 g，至50 mL容量瓶加上述流動(dòng)相10 mL，超聲溶解后，用上述流動(dòng)相釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取5 mL至25 mL容量瓶，用上述流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。用外標(biāo)法以精密度試驗(yàn)對(duì)照品平均值為639554計(jì)算測得2份供試品1峰面積分別為573632、575818，平均值為574725，供試品1標(biāo)示量為96.91%，測得2份供試品2峰面積分別為577213、579865，平均值為578539，供試品2標(biāo)示量為96.38%，平均標(biāo)示量為96.64%。見圖5。

2.2紫外可見分光光度法（溫度為19 ℃，相對(duì)濕度為65%）

2.2.1對(duì)照品配制：取枸櫞酸莫沙必利對(duì)照品0.01160 g至50 mL容量瓶中，加乙醇10 mL，振搖使枸櫞酸莫沙必利溶解，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL至10 mL容量瓶，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。作為對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品配制：取本品20粒，精密稱定總重，傾出內(nèi)容物，混合均勻，膠囊殼用小刷試凈后，稱量膠囊殼總重，得到20粒內(nèi)容物總重為2.3920 g，研細(xì)，精密稱出內(nèi)容物2份，供試品1為0.1124 g，供試品2為0.1145 g，至25 mL容量瓶中，加乙醇10 mL，超聲振搖使枸櫞酸莫沙必利溶解，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL至10 mL容量瓶，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3測定計(jì)算：照紫外-可見分光光度法［1］，在274 nm的波長處分別測定吸光度，測得吸光度A供試品1<0.541，A供試品2<0.550，A對(duì)<0.649，計(jì)算得供試品1標(biāo)示量為96.92%，供試品2標(biāo)示量為96.72%，平均標(biāo)示量為96.82%。

3　討　論

高效液相色譜法與紫外-可見分光光度法測定枸櫞酸莫沙必利膠囊含量，其結(jié)果無顯著性差異，但高效液相色譜法具有分離的功能，是先進(jìn)行分離然后進(jìn)行檢測，對(duì)物質(zhì)定性和定量更準(zhǔn)確；紫外-可見分光光度法，是在某一特定波長下對(duì)物質(zhì)進(jìn)行檢測，更容易產(chǎn)生干擾。高效液相色譜法中某一波長下可能出許多峰，但不是同一物質(zhì)，還需要用時(shí)間等來進(jìn)行定性，而在紫外-可見分光光度法中，有可能會(huì)被誤認(rèn)為同一物質(zhì)。所以高效液相色譜法分離效率高，選擇性好，速度快，檢測靈敏度高，減少了輔料，賦形劑等對(duì)藥品含量的干擾，并能定性藥品中這種成分是否是其他成分假冒的，對(duì)控制藥品質(zhì)量，保障用藥安全，具有非常重要的作用。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典二部（2010年版）［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBH23852005［S］.2012.

R927.2

B

1671-8194（2015）19-0059-02