三種酸化劑最小殺菌濃度（MBC）的測(cè)定

關(guān)飛　尤永君　安俊峰

摘 要：酸化劑具有調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道的pH值，激活消化酶，改善營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收，以及增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用。本文就三種酸化劑產(chǎn)品對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和黃曲霉菌的最小殺菌濃度進(jìn)行了試驗(yàn)觀察，試驗(yàn)結(jié)果表明：三種酸化劑產(chǎn)品在一定濃度內(nèi)對(duì)三種病原微生物都具有殺滅作用，具有替代某些抗生素的潛能。

關(guān)鍵詞：酸化劑；細(xì)菌；霉菌；最小殺菌濃度

Abstract：Acidifier can regulate animal intestinal pH， activate digestive enzyme， improve digestion and absorption of nutrients and enhance the body immunity. In this paper， the author have observed experimentally the minimum bactericidal concentration of three acidifier products on escherichia coli， staphylococcus aureus and aspergillus flavus. The results showed that： three kinds of acidifier products have killed three kinds of pathogenic microorganisms within a certain concentration range， having some potential alternativ eantibiotics.

Keywords： acidifier； bacteria； mold； minimum bactericidal concentration.

隨著人們對(duì)食品安全日益重視，動(dòng)物性食品的抗生素藥物殘留問(wèn)題亟待解決，國(guó)內(nèi)外正尋求能夠替代抗生素的飼料添加劑。目前，在畜牧生產(chǎn)中應(yīng)用酸化劑已得到了迅速的發(fā)展，經(jīng)研究報(bào)道平[1-6]酸化劑對(duì)調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道pH值，提高動(dòng)物機(jī)體內(nèi)消化酶的活性，提高飼料利用率，改善腸道正常菌群，殺滅或抑制有害菌的生長(zhǎng)繁殖，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)等方面有重要作用。

本文就酸化劑的殺菌、抑菌作用做了相關(guān)實(shí)驗(yàn)，旨在說(shuō)明酸化劑對(duì)某些有害菌具有殺滅和抑制作用，為酸化劑在生產(chǎn)實(shí)際的應(yīng)用提供一定理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

A酸化劑：維樂(lè)欣（主要成分：乙酸、甲酸、丙酸、丁酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸及其鹽，批號(hào)：津飼預(yù)字[2010]009924號(hào)）；B酸化劑（主要成分：甲酸、乙酸、甲酸胺）、C酸化劑（主要成分：丙酸、蘋果酸、甲酸、富馬酸）為普通酸化劑，無(wú)批號(hào)；pH測(cè)定儀（TP210精密便攜式pH計(jì)，購(gòu)自北京時(shí)代新維測(cè)控設(shè)備有限公司），大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株、金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)（購(gòu)自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）、黃曲霉菌分離株；滅菌瓊脂培養(yǎng)基、普通自來(lái)水、滅菌蒸餾水、滅菌肉體培養(yǎng)基、滅菌孟加拉紅培養(yǎng)基。由于在臨床養(yǎng)殖過(guò)程中A酸化劑維樂(lè)欣建議使用濃度有0.05%、0.1%、0.2%三種，所以在做抑菌試驗(yàn)的時(shí)候?qū)⑷N酸化劑分別稀釋成0.05%、0.1%、0.2%三個(gè)濃度梯度，以便觀察其抑菌效果。

2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟

2.1 不同時(shí)間不同濃度的pH測(cè)定

1）將A，B，C號(hào)三種酸化劑產(chǎn)品分別以相應(yīng)量加入到自來(lái)水中分別配制成0.3%、0.2%和0.1%比例濃度。

2）配好后各種比例濃度在室溫下于0 h、6 h、24 h分別測(cè)定pH值。

2.2 三種酸化劑對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小殺菌濃度（MBC）的測(cè)定

1）將三種過(guò)濾后的酸化劑用滅菌后的培養(yǎng)基按梯度稀釋配成終濃度為0.05%、0.1%、0.2%的固體培養(yǎng)基，倒好平皿。

2）復(fù)蘇大腸桿菌，金黃色葡菌球液，使菌液濃度為105 CFU/mL。

3）分別將1 μL大腸桿菌，金黃色葡菌球菌液加入配制好的不同濃度的培養(yǎng)皿上。每一個(gè)樣品同時(shí)做一個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

4）37 ℃，過(guò)夜培養(yǎng)。觀察，拍照并記錄結(jié)果。

2.3三種酸化劑對(duì)黃曲霉菌的最小殺菌濃度值得測(cè)定

1）用滅菌肉湯培養(yǎng)基將三種酸化劑按梯度稀釋配成終濃度為0.05%、0.1%、0.2%的溶液，并分裝入試管，9.5 mL/管。

2）同時(shí)用滅菌蒸餾水將三種酸化劑按梯度稀釋配成終濃度為0.05%、0.1%、0.2%的溶液，并分裝入試管，9.5 mL/管。

3）復(fù)蘇霉菌，使菌液濃度為107 CFU/mL。

4）分別將500 μL菌液加入配制好的不同濃度的試管中。每一個(gè)樣品同時(shí)做一個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

5）37℃，130 r/min搖菌，培養(yǎng)48 h。

6）從每一個(gè)實(shí)驗(yàn)管里取100 μL均勻地涂在孟加拉紅培養(yǎng)基上。每一個(gè)樣品做一個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

7）37℃，培養(yǎng)48～72 h，每隔24 h觀察菌落生長(zhǎng)狀況。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1不同時(shí)間不同濃度酸化劑的pH測(cè)定值

本文分別對(duì)三種酸化劑產(chǎn)品原液及0.3%、0.2%、0.1%四個(gè)濃度在不同時(shí)間的pH值進(jìn)行測(cè)定，并分析各種酸化劑在不同濃度不同時(shí)間點(diǎn)的pH穩(wěn)定性，具體數(shù)據(jù)見(jiàn)下表1：

A酸化劑原液pH 3.23；B酸化劑原液pH 2.99；C酸化劑原液pH 3.35；實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出各種酸化劑在不同濃度不同時(shí)間點(diǎn)的pH穩(wěn)定性較好，說(shuō)明酸化劑的緩沖體系良好。

3.2三種酸化劑對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小殺菌濃度（MBC）的測(cè)定

3.2.1 大腸桿菌組

從大腸桿菌抑菌試驗(yàn)結(jié)果（表2）可以得出：三種酸化劑對(duì)大腸桿菌均具有抑制殺滅作用，A酸化劑（維樂(lè)欣）和B酸化劑對(duì)大腸桿菌的MBC值為0.1%，C酸化劑對(duì)大腸桿菌的MBC值為0.2%。

3.2.2 金黃色葡萄球菌組

從金黃色葡萄球菌抑菌試驗(yàn)結(jié)果（表3）可以得出：三種酸化劑對(duì)葡萄球菌均具有抑制殺滅作用，A酸化劑（維樂(lè)欣）和B酸化劑對(duì)金黃色葡萄球菌的MBC值為0.1%；C酸化劑對(duì)金黃色葡萄球菌的MBC值為0.2%。

3.3 三種酸化劑對(duì)黃曲霉菌的最小殺菌濃度（MBC）的測(cè)定

3.3.1 用肉湯培養(yǎng)基作為稀釋液

用營(yíng)養(yǎng)肉湯做稀釋液的實(shí)驗(yàn)中（表4），A、C酸化劑對(duì)霉菌的抑菌濃度為0.2%；B酸化劑對(duì)霉菌的抑菌濃度>0.2%。

3.3.2 用水為稀釋液

用蒸餾水做稀釋液的實(shí)驗(yàn)中（表5），A酸化劑對(duì)霉菌的抑菌濃度為0.1%；B、C酸化劑對(duì)霉菌的抑菌濃度為0.2%。

用營(yíng)養(yǎng)肉湯做稀釋液比用蒸餾水做稀釋液，能給霉菌的生長(zhǎng)提供更多的營(yíng)養(yǎng)，但不論是用營(yíng)養(yǎng)肉湯或是水為稀釋液時(shí)，對(duì)霉菌的抑制效果方面A酸化劑優(yōu)于其它兩種酸化劑。

通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明復(fù)合酸化劑對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、黃曲霉菌在一定濃度下是有殺滅和抑制作用的，這也和之前報(bào)道[7-9]過(guò)的酸化劑具有殺滅有害菌或抑制有害菌生長(zhǎng)繁殖的作用是相符的。A酸化劑（維樂(lè)欣）抑菌殺菌作用優(yōu)于其它兩種酸化劑，可能是由于維樂(lè)欣中有機(jī)酸的配比更加合理，有機(jī)酸分子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮強(qiáng)大的抗菌作用。但酸化劑應(yīng)用到臨床養(yǎng)殖上到底對(duì)養(yǎng)殖水平起多大作用，能產(chǎn)生多大的效益還需進(jìn)一步地研究確認(rèn)。

（編輯：狄慧）

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