農(nóng)藥殘留的色譜分析法應(yīng)用

黃金洲　王利榮　譚晶

【摘要】：近年來(lái)，由于食品安全問(wèn)題頻頻發(fā)生，所以人們更加關(guān)注農(nóng)藥殘留對(duì)于人體的身心健康和環(huán)境的危害。本文綜述了目前國(guó)內(nèi)的測(cè)試農(nóng)藥殘留色譜分析方法，如氣相色譜法（GC）、液相色譜法（LC）、氣相色譜-質(zhì)譜連用（GC-MS）以及部分新興的色譜分析方法，如毛細(xì)血管電色譜法凝、膠滲透色譜法、免疫親和色譜法等等，對(duì)其進(jìn)行研究和展開(kāi)介紹。

【關(guān)鍵詞】：農(nóng)藥殘留；色譜分析方法；新興色譜分析法

1 引言

農(nóng)藥殘留是指某一種農(nóng)藥由于具有強(qiáng)烈的化學(xué)穩(wěn)定性，當(dāng)使用一段時(shí)間以后很難自我分解，仍有部分殘余摻雜在土壤、作物及環(huán)境中。這些殘留在農(nóng)作物中的農(nóng)藥在食物鏈中具有極為強(qiáng)烈的富集作用，可以在人類(lèi)和動(dòng)物機(jī)體內(nèi)積存下來(lái)從而致使他們慢性中毒，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的食品安全，這個(gè)問(wèn)題已成為全世界關(guān)注的核心。為了打擊和限制農(nóng)藥的大量使用，維護(hù)人民的財(cái)產(chǎn)，全世界的政府制定了許多相關(guān)規(guī)定。因此，研究農(nóng)藥殘留分析檢測(cè)，對(duì)于保障人民生活利益具有很大的幫助。

目前，農(nóng)藥殘留測(cè)試方法有很多種，色譜技術(shù)尤為的重要。因?yàn)樯V技術(shù)擁有相當(dāng)高的分離效率、應(yīng)用范圍較為廣泛、分析農(nóng)殘速度較快、使用添加樣品用量較少，這個(gè)優(yōu)點(diǎn)使其在多種基體中的樣品獲得了較為廣泛的應(yīng)用。

2 氣相色譜法（GC）

在2O世紀(jì)中氣相色譜被用來(lái)做分析，60年代開(kāi)始，此方法被用來(lái)測(cè)試農(nóng)藥的殘留量。因?yàn)樯V技術(shù)擁有相當(dāng)高的分離效率、應(yīng)用范圍廣、分析農(nóng)殘速度較快、使用樣品用量少。因此其在檢測(cè)分離氣體與易揮發(fā)或易轉(zhuǎn)化為易揮發(fā)的液體及固體樣品起到了很大的作用。目前該方法現(xiàn)在已經(jīng)成了農(nóng)藥殘留分析中最普遍也是最重要的方法。與此同時(shí)，目前用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)的檢測(cè)器有捕獲電子的檢測(cè)器、捕獲檢微池電子的檢測(cè)器、通過(guò)檢驗(yàn)火焰光度的檢測(cè)器（FPD）、檢測(cè)脈沖火焰的光度檢測(cè)器、檢測(cè)氮磷元素的檢測(cè)器等等。

謝文（2005）在測(cè)定茶葉中的有機(jī)磷酸的實(shí)驗(yàn)中，分別對(duì)樣品的凈化方法進(jìn)行相應(yīng)的研究，將農(nóng)藥的殘留利用乙氰提純，將活性炭與硅膠混合成小柱進(jìn)行凈化，利用擁有火焰光度檢測(cè)器的氣相色譜儀將樣品進(jìn)行測(cè)定，分析結(jié)果的特性，發(fā)現(xiàn)具有重現(xiàn)性、良好的精密度，較少的干擾雜質(zhì)。蒜苗、大蒜、姜等含硫蔬菜在進(jìn)行切碎的同時(shí)其內(nèi)的活性酶會(huì)釋放出硫化物，這些所釋放出來(lái)的硫化物不容易分解，與此同時(shí)在氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器（GC-ECD）上能夠產(chǎn)生很強(qiáng)烈的反應(yīng)，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，造成誤判。

3 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MC）

氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC—MS）不僅擁有氣相色譜和質(zhì)譜的各種優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)還完善了它們各自的缺點(diǎn)，因此擁有著很高的靈敏度、分析樣品速度快、鑒別樣品能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，他可以同步的進(jìn)行待測(cè)樣品的分離與鑒定，因此在當(dāng)前的農(nóng)藥檢測(cè)中運(yùn)用廣泛。鄭孝華（2004）利用微波輔助萃取和液液微萃取技術(shù)讓二者相結(jié)合，充分利用氣相色譜一質(zhì)譜分析技術(shù)，開(kāi)創(chuàng)了了一種便捷、應(yīng)用方便、回收率較高的蔬菜中多種擬除蟲(chóng)菊酯殘留的檢測(cè)技術(shù)。通過(guò)基體標(biāo)準(zhǔn)加入回收實(shí)驗(yàn)，并加入其他9種菊酯的l5ng/g的加樣能夠看出其回收率均在80% 以上，并且在國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)要求的最大殘留限量中可以看出良好的線性關(guān)系，這樣能夠使蔬菜、水果中的農(nóng)殘達(dá)到達(dá)標(biāo)水準(zhǔn)。陳長(zhǎng)弓等（2006）利用GCMS測(cè)定方法測(cè)定了麝香保心丸中的異龍腦、龍腦苯甲酸芐酯。將正己烷作為相應(yīng)的溶劑，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法選擇性離子檢測(cè)（SIM）方式對(duì)其中的麝香保心丸中異龍腦、龍腦、苯甲酸芐酯進(jìn)行含量的測(cè)定。DB5（0.1μm*0.25mm*30m）石英毛細(xì)管柱；85-265℃的程序升溫；同時(shí)選擇m/z95為龍腦、異龍腦作為相應(yīng)的檢測(cè)離子，m/z212為苯甲酸芐酯作為相應(yīng)的檢測(cè)離子。結(jié)果顯示龍腦、異龍腦、苯甲酸芐酯的線性范圍分別為0.02-20.00μm/ml（r=0.99993）、0.024-24.00μm/ml（r=0.9990）、0.050-50.00μm/ml（r=0.9992）。平均回收率為97.00；異龍腦96.30；苯甲酸芐酯98.20。說(shuō)明該方法快速、準(zhǔn)確、有效，可用于麝香保心丸的質(zhì)量控制。

4 高效液相色譜法（HPLC）及液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法（LC—MS）

當(dāng)前，在農(nóng)藥殘留的檢測(cè)與分析中，高效液相色譜法已經(jīng)慢慢成為一種主要的分析手段，它擁有較高的分離效率、分析速度快、測(cè)試的靈敏度高與應(yīng)用范圍廣的優(yōu)點(diǎn)，尤其適合于非揮發(fā)性、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的農(nóng)藥的分離分析。楊容（2004）等為了測(cè)定食物中的異丙威和溴氰菊酯其利用基質(zhì)固相分散技術(shù)和高效液相色譜法進(jìn)行分析表征，測(cè)得異丙威檢測(cè)限為1.2ng/g，回收率大約為89.11% ，溴氰菊酯檢測(cè)限約為2.5ng/g，回收率大約為83.92% 。陳珠靈（2005）等為了對(duì)水果中甲基對(duì)硫磷、乙基對(duì)硫磷、甲拌磷的有效測(cè)定其采用了高效液相色譜法，利用shim—pack和VP—ODS作為分離柱，流動(dòng)相為甲醇：V水，=85：15，其紫外檢測(cè)波長(zhǎng)通常為250nm，利用此方法所測(cè)得的多種有機(jī)磷在0.02～2.Oμg/L范圍內(nèi)具有著很好的線性關(guān)系，并且檢出限達(dá)（1.0—5.0）μg/L，回收率在97.44%～ 101.22% 。利用SPE與HPLC來(lái)分析農(nóng)藥殘留在當(dāng)前的形勢(shì)下已經(jīng)成為了一中趨勢(shì)，SPE具有著單一萃取方法所不能替代的優(yōu)點(diǎn)。

因?yàn)镠PLC具有一定的選擇性，液相色譜儀就會(huì)在測(cè)試樣品中有著一定的局限性?？紤]到HPLC高靈敏度的眾多優(yōu)點(diǎn)，當(dāng)前最熱門(mén)的檢測(cè)方法是使用液質(zhì)聯(lián)用方法，此方法中質(zhì)譜檢測(cè)器起到了關(guān)鍵作用。

5 新興起的色譜方法

近年，色譜技術(shù)的發(fā)展尤為迅猛，大量新起興的色譜技術(shù)在生物、醫(yī)藥、化工等領(lǐng)域中已有較多應(yīng)用變性高效液相色譜、高速逆流色譜、全二維氣相色譜質(zhì)譜等：國(guó)內(nèi)農(nóng)藥殘留的色譜分析法研究進(jìn)展把物相色譜和質(zhì)譜以及其串聯(lián)質(zhì)譜并用、超流體色譜等。

毛細(xì)管電色譜（CEC）是一種當(dāng)代新發(fā)展的微柱電分離技術(shù)，它是石英毛細(xì)管中填充高效的液相色譜，利用高壓電源。這種分離模式包含了毛細(xì)管電泳和HPLC的各自的優(yōu)點(diǎn)，使其擁有了良好的選擇性和分離柱效高等優(yōu)點(diǎn)，常用于手性化合物的拆分，近幾年開(kāi)始用于農(nóng)藥分離。

免疫親和色譜是指利用抗體或者與抗體相關(guān)的材料作為固定相的色譜?？贵w對(duì)抗原性物質(zhì)的選擇結(jié)合，使該技術(shù)越來(lái)越多地應(yīng)用于生物物質(zhì)以及非生物物質(zhì)的分離、純化和分析。與HPLC結(jié)合的免疫親和和色譜稱為高效免疫親和色譜。將待測(cè)樣品通過(guò)色譜柱，其中待測(cè)抗原以及類(lèi)似物與固定的抗體結(jié)合，其他樣品基質(zhì)由于不與固定相結(jié)合而被除去。這樣，結(jié)合的待測(cè)物質(zhì)被洗脫以后利用在線或非在線的方法直接測(cè)定。測(cè)定方法一般采用紫外-可見(jiàn)吸收光譜法和熒光光譜法等。與傳統(tǒng)的免疫分析相比，該技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單、分析快速、精密度高且可以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)分析等的優(yōu)點(diǎn)。但是，采用該方法時(shí)需要選擇合適的抗體固定方式，也就是說(shuō)在洗脫待測(cè)抗原時(shí)應(yīng)保證固定的抗體不被解離下來(lái)。一般來(lái)講，如果用蛋白A或蛋白G作為抗體支持擔(dān)體，由于抗體與它們之間是通過(guò)弱的吸附作用相結(jié)合，因此這種固定方式的抗體在待測(cè)物洗脫或柱子再生時(shí)容易流失。比較好的抗體固定方法是通過(guò)共價(jià)結(jié)合的方式將抗體與支持擔(dān)體連接，或首先將蛋白A或蛋白G固定化，然后通過(guò)交聯(lián)的方法將抗體共價(jià)結(jié)合到蛋白A或蛋白G上，另外一種常用方法是將生物素化的抗體與固定的親和素結(jié)合。

6 展望

近些年來(lái)，在農(nóng)藥的使用已經(jīng)變成了復(fù)合農(nóng)藥的利用，因此，在農(nóng)藥殘留的檢測(cè)當(dāng)中也變得更加嚴(yán)格。從而導(dǎo)致色譜技術(shù)與其他高效的技術(shù)進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用。這對(duì)我國(guó)的農(nóng)藥殘留檢測(cè)提出了更高的要求，所以我國(guó)色譜技術(shù)必將向著靈活、可靠、多用型、環(huán)保等許多性能上發(fā)展。

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