嘧肽·嗎啉胍對茄科作物PVY琋的防效研究

王潮鐘　黃翯　蘇燕妮等

摘要 [目的]明確嘧肽·嗎啉胍對馬鈴薯Y病毒壞死株系（PVYN）在不同茄科植物上的抑制作用。[方法]研究嘧肽·嗎啉胍對PVYN在不同茄科作物上的防效，并采用分光光度計法測定植株體內(nèi)PVYN病毒的濃度。[結(jié)果]嘧肽·嗎啉胍對不同茄科寄主上的PVYN引起的病毒病害均具有較好的防治效果，可明顯降低感病茄科作物體內(nèi)PVYN的濃度。[結(jié)論]試驗結(jié)果為嘧肽·嗎啉胍的推廣應(yīng)用及由PVYN引起的病害防治提供了理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞 嘧肽·嗎啉胍；PVYN；防效

中圖分類號 S436.41 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）20-152-02

Abstract [Objective] The aim was to make sure the inhibition of Cytosinpeptidemycin·Moroxydine hydrochloride （CyMH） on infectivity of PVYN in solanaceous plants. [Method] Control effect of CyMH on infectivity of PVYN in solanaceous plants was studied， and the concentration of PVYN virus was determined by spectrophotometer. [Result] CyMH had a better effect on the infectivity of PVYN in all tested plants， and the concentration of PVYN was decreased after CyMH treatment. [Conclusion] The results provide theoretical basis for popularization and application of CyMH as well as the control of disease caused by PVYN virus.

Key words Cytosinpeptidemycin·Moroxydine hydrochloride； PVYN； Control effect

馬鈴薯Y病毒屬病毒是世界上植物病毒種類最多、對農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)影響最嚴(yán)重的病毒之一[1-2]。近幾年，PVYN在我國南北煙區(qū)呈上升趨勢，每年都有一定程度的發(fā)生和危害，局部地區(qū)發(fā)病較重，對茄科作物產(chǎn)質(zhì)量影響很大，是生產(chǎn)上較難防治的病害之一[3-5]。嘧肽·嗎啉胍是沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草研究所針對煙草馬鈴薯Y病毒而研發(fā)的具有自主知識產(chǎn)權(quán)的新型、高效、低毒的復(fù)配型農(nóng)藥，對馬鈴薯Y病毒引起的脈壞死病有明顯的預(yù)防和治療效果。筆者研究了嘧肽·嗎啉胍對PVYN在不同茄科植物如煙草、番茄和辣椒上的抑制作用，旨在為嘧肽·嗎啉胍的藥效評價及由PVYN引起的茄科作物病毒病防治提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試植物。在防蟲溫室中培育系統(tǒng)寄主普通煙K326、辣椒和番茄，并按照植株托盤育苗方法進(jìn)行育苗操作和管理。

1.1.2 供試病毒。PVYN由沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草研究所分離提純并繁殖保存于煙草品種K326上。

1.2 方法

1.2.1 接種液的制備。取經(jīng)過復(fù)壯的攜帶PVYN的病葉與0.01 mol/L磷酸緩沖液（pH 7.4）充分研磨，研磨后用雙層紗布過濾，按照病葉質(zhì)量和緩沖液體積比為1∶10的比例配制接種液，短期使用。

1.2.2 嘧肽·嗎啉胍對PVYN在不同茄科作物上的防效。

取5～6葉期長勢一致的煙草高感品種K326、辣椒及番茄，采用常規(guī)的摩擦接種法接種PVYN，設(shè)置于接種前24 h與接種后24 h噴灑嘧肽·嗎啉胍700倍稀釋液、接種當(dāng)日用嘧肽·嗎啉胍700倍稀釋液與病毒等體積混合1 h和正常接種PVYN并噴灑清水對照4個處理，每個處理9株，3次重復(fù)。并設(shè)健康植株作為陰性對照，發(fā)病后調(diào)查病情指數(shù)，取平均值計算防效。

1.2.3 分光光度計法測定植株體內(nèi)病毒濃度。

取5～6葉期的煙草高感品種K326、辣椒及番茄，處理同“1.2.2”，以噴清水為陽性對照，待陽性對照全部顯癥時，采取不同對照組發(fā)病煙草的上部葉片保存于裝有液氮的保溫瓶中，提純PVYN病毒[6]，病毒濃度采用紫外分光光度計（NanodropND1000紫外可見分光光度計）測定[7]，比較PVYN病毒在260及280 nm波長處光吸收值之比和標(biāo)準(zhǔn)病毒蛋白與核酸含量的固定比值，用A260值來計算PVYN病毒的濃度。

1.2.4 病情分級標(biāo)準(zhǔn)與計算方法。PVYN在普通煙上的病情分級標(biāo)準(zhǔn)：

0級，全株無病或極輕微花葉；

1級，1/10～1/3的葉片表現(xiàn)輕微小葉脈壞死或出現(xiàn)點刻狀條斑癥狀以及輕微變形，整株其他葉片無癥狀，植株無明顯矮化；

2級，1/3～1/2的葉片表現(xiàn)點刻狀條斑或脈壞死，病葉大部分小葉脈壞死，造成葉片較大面積的黃化枯死，植株矮化為正常株高的2/3以上；

3級，1/2～2/3的葉片表現(xiàn)較嚴(yán)重的脈壞死或2/3以上的葉片出現(xiàn)點刻狀條斑壞死，造成葉片較大面積的枯死，少部分葉片脫落，或整株葉片開始變黃，或植株矮化為正常株的1/2～2/3；4級，全株葉片表現(xiàn)嚴(yán)重的脈壞死或葉片變形、萎縮，2/3左右的葉片萎蔫脫落。病株矮化為正常煙株的1/3～1/2，或整株凋萎。

PVYN在辣椒上的病情分級標(biāo)準(zhǔn)：

0級，無任何癥狀；

1級，心葉明脈，或接種葉枯斑；3級，少數(shù)葉片呈現(xiàn)花葉或莖部產(chǎn)生壞死點；5級，多數(shù)葉片花葉，少數(shù)葉片畸形、皺縮或莖部產(chǎn)生壞死條斑；

7級，多數(shù)葉片畸形，植株矮化或莖條斑，葉脈產(chǎn)生系統(tǒng)壞死；

9級，植株嚴(yán)重矮化，停止生長或植株嚴(yán)重系統(tǒng)壞死，甚至死亡。

PVYN在番茄上的病情分級標(biāo)準(zhǔn)：

0級，無任何癥狀；

1級，心葉明脈，輕微花葉；

3級，心葉及中部葉片花葉；

5級，心葉及中部葉片花葉，少數(shù)病葉畸形皺縮或植株輕度矮化；

7級，重花葉，多數(shù)病葉畸形皺縮矮化或植株矮化；

9級，嚴(yán)重花葉，畸形或植株明顯矮化，果實花斑。

病情指數(shù)=∑（相應(yīng)的每級級數(shù)×該級病株數(shù)）/（最高級數(shù)×調(diào)查總株數(shù)）×100

防治效果=（對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù)）/對照病情指數(shù)×100%

病毒濃度（mg/ml）=A260×稀釋倍數(shù)/E0.1%1 cm260 cm

式中，E0.1%1 cm260 cm為消光系數(shù)，即在波長為260 nm時，濃度為0.1%（1 mg/ml）的懸浮液，光程為1 cm時的光（光密度）吸收值。

標(biāo)準(zhǔn)PVYN的E0.1%1 cm260 cm=2.8，A260/A280=1.28。

2 結(jié)果與分析

2.1 嘧肽·嗎啉胍對PVYN在普通煙上的防治效果

結(jié)果表明，嘧肽·嗎啉胍對PVYN在高感品種K326上引起的病毒病害有較好的防治效果（表1）。接種PVYN前24 h和接種后24 h噴藥，防治效果分別為60.39%和42.96%，對寄主有一定的保護(hù)和治療作用，嘧肽·嗎啉胍和PVYN混合接種的抑制率為67.78%。

2.2 嘧肽·嗎啉胍對PVYN在辣椒上的防治效果

在PVYN侵染辣椒的試驗中，嘧肽·嗎啉胍對辣椒花葉病毒病害具有較好的防治效果（表2）。接種PVYN前24 h噴灑嘧肽·嗎啉胍，其抑制率為64.09%；接種PVYN后24 h噴灑嘧肽·嗎啉胍，其抑制率為42.72%；而嘧肽·嗎啉胍和PVYN混合接種的抑制率為66.25%，表明該藥劑對辣椒花葉病毒具有較強(qiáng)抑制作用的同時對辣椒還具有較好的保護(hù)作用。

2.3 嘧肽·嗎啉胍對PVYN在番茄上的防治效果

番茄是田間 比較容易感染病毒的品種，在PVYN侵染番茄的試驗中，嘧肽·嗎啉胍對番茄花葉病毒病害具有較好的防治效果（表3）。嘧肽·嗎啉胍對番茄的保護(hù)作用達(dá)50.84%，抑制作用達(dá)61.69%，治療作用達(dá)41.93%。

2.4 分光光度計法測定嘧肽·嗎啉胍對植株體內(nèi)PVYN濃度的影響

使用分光光度計測定嘧肽·嗎啉胍處理后的PVYN病毒濃度，其結(jié)果與上述癥狀結(jié)果表現(xiàn)一致（表4），說明嘧肽·嗎啉胍可有效減輕PVYN感染煙草后的發(fā)病癥狀，同時使植株體內(nèi)PVYN的濃度降低。接種前24 h噴施嘧肽·嗎啉胍，抑制率為47.93%～54.90%；接種后24 h噴施嘧肽·嗎啉胍，抑制率為32.50%～35.93%；與病毒混合1 h后再接種，抑制率高達(dá)62.61%～68.73%，效果最好。試驗結(jié)果證實了嘧肽·嗎啉胍能降低茄科植株體內(nèi)病毒濃度，對病毒的復(fù)制和增殖有一定的抑制作用，從而控制PVYN對茄科作物的危害。

3 結(jié)論與討論

采用3種不同處理方法研究嘧肽·嗎啉胍對PVYN在茄科作物上的作用，結(jié)果表明，嘧肽·嗎啉胍對PVYN侵染不同寄主植物有不同程度的抑制作用，其中藥劑與病毒混合后再接種的防效最好，對煙草、辣椒、番茄的防效分別為67.78%、66.25%、61.69%。并采用紫外分光光度法對施用嘧肽·嗎啉胍后植株體內(nèi)PVYN病毒濃度變化進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，施藥后植株體內(nèi)病毒濃度均明顯低于清水對照，證明嘧肽·嗎啉胍對植物體內(nèi)PVYN的復(fù)制和增殖具有一定的抑制作用，降低了寄主植株體內(nèi)病毒的濃度從而達(dá)到防治效果。

通過施用嘧肽·嗎啉胍，可有效延緩PVYN病毒病害癥狀的出現(xiàn)，減輕病害發(fā)病程度，還可以通過體外鈍化病毒粒子使其喪失侵染能力從而抑制PVYN的侵染，同時對寄主植物有一定的保護(hù)和治療作用。由于藥劑的處理方式不同，其防效也存在不同，說明嘧肽·嗎啉胍抑制病毒的作用方式應(yīng)該是多方面的，它既可以保護(hù)寄主植株，防止病毒的進(jìn)入，又可以對寄主起到治療作用，還可以在體外使病毒失去侵染能力，但是其作用方式和作用位點尚不清楚，還有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 胡新喜，何長征，熊興耀，等.馬鈴薯Y病毒研究進(jìn)展[J].中國馬鈴薯，2009，23（5）：293-300.

[2] 孫劍萍，孫宏偉，虞艷芳.煙草馬鈴薯Y病毒發(fā)病的相關(guān)因素研究[J].中國煙草科學(xué)，2011，32（6）：80-84.

[3] 朱春玉，吳元華，趙秀香，等.嘧肽霉素對煙草花葉病毒在不同寄主上的防效研究[J].遼寧大學(xué)學(xué)報，2007，34（1）：50-53.

[4] 崔曉艷，魏太云，陳新，等.馬鈴薯Y病毒屬病毒的細(xì)胞生物學(xué)研究進(jìn)展[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，45（7）：1293-1302.

[5] 趙秀香，吳元華，杜春梅，等.新型農(nóng)藥嘧肽霉素防治番茄病毒病藥效[J].農(nóng)藥，2004（12）：534-536.

[6] MATEVZ R，MAJA R，MAGDA T Z，et al.Fast purification of the filamentous potato virus Y using monolithic chromatographic supports[J].Journal of Chromatography A，2013，1272：33-40.

[7] 董丹，王春梅，吳元華.嘧肽霉素復(fù)配制劑06抗病毒機(jī)理初探[J].沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2006，37（4）：593-596.