甲苯胺藍(lán)介導(dǎo)的光動力療法與羧甲基殼聚糖銀治療大鼠牙周炎效果對比分析

韓佳龍　畢良佳　莊德舒

[摘 要] 目的：對比甲苯胺藍(lán)介導(dǎo)的光動力療法與羧甲基殼聚糖銀治療大鼠牙周炎療效。方法：選擇20只實(shí)驗(yàn)室SD大鼠，于大鼠上頜右側(cè)建立實(shí)驗(yàn)性大鼠牙周炎模型，隨機(jī)將20只大鼠分為A、B兩組，每組10只。對A組大鼠實(shí)施甲苯胺藍(lán)介導(dǎo)的光動力療法治療，對B組大鼠實(shí)施羧甲基殼聚糖銀（CMCT-Ag+）治療。1周后觀察兩組大鼠治療前后滅菌效果以及牙齦出血指數(shù)（SBI）、牙菌斑指數(shù)（PLI）。結(jié)果：治療1周后，兩組中細(xì)菌總菌落數(shù)以及牙齦卟啉單胞菌菌數(shù)均顯著低于治療前（P<0.05），兩組間細(xì)菌總菌落數(shù)與牙齦卟啉單胞菌菌數(shù)變化無顯著差異（P>0.05）。兩組大鼠治療后牙菌斑指數(shù)（PLI）、牙齦出血指數(shù)（SBI）顯著低于治療前（P<0.05），其中A組治療后牙菌斑指數(shù)（PLI）、牙齦出血指數(shù)（SBI）減少程度明顯優(yōu)于B組（P<0.05）。結(jié)論：甲苯胺藍(lán)介導(dǎo)的光動力療法與羧甲基殼聚糖銀治療牙周病均有良好殺菌作用，然而光動力療法牙周病能夠更好控制牙菌斑生成，有效降低牙齦出血率發(fā)生，對牙周炎治療有良好促進(jìn)作用。

[關(guān)鍵詞] 光動力；牙周炎；羧甲基殼聚糖銀；牙菌斑

中圖分類號：R332 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： B 文章編號：2095-5200（2015）05-058-03

牙周炎是口腔中發(fā)生率較高的常見疾病，牙菌斑為牙周炎主要致病因素。牙周炎臨床治療方法以潔治、刮治等機(jī)械療法及應(yīng)用抗菌藥物控制細(xì)菌為主。機(jī)械療法往往難以完全清除牙周袋內(nèi)菌斑及預(yù)防病原菌再次感染，而治療中創(chuàng)傷也可能引起菌血癥。抗菌藥物應(yīng)用同樣存在著許多問題，例如影響味覺，口腔干燥，藥物過敏反應(yīng)以及細(xì)菌耐藥性等[1-2]。因此，探索一種能夠克服上述不足的新型抗菌療法至關(guān)重要。羧甲基殼聚糖銀屬于氯乙酸化經(jīng)羧基與Ag+結(jié)合而成殼聚糖重金屬螯合物，作為局部可吸收緩釋藥物CMCT Ag+對牙齦卟啉單胞菌有良好抑制作用[3]。光動力療法是利用特定波長激光與光敏劑結(jié)合治療牙周病的新型無創(chuàng)治療方法，能夠產(chǎn)生單態(tài)氧與諸多活性氧成分，破壞牙菌斑生物膜結(jié)構(gòu)，對口腔致病菌具有滅活作用[4]。本研究對比甲苯胺藍(lán)介導(dǎo)光動力療法與羧甲基殼聚糖銀治療大鼠牙周炎療效，具體報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物及藥品

SD大鼠（哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供），實(shí)驗(yàn)前均于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)3d。羧甲基殼聚糖銀（由東北師范大學(xué)生化教研室提供） ，2%堿性品紅溶液、1%戊巴比妥鈉均購于自北京化學(xué)試劑廠。

1.2 大鼠牙周炎模型建立

大鼠稱重后取1%戊巴比妥鈉行腹腔注射麻醉，劑量為40mg/kg。在麻醉狀態(tài)下用牙鉆對上頜第一磨牙鉆溝，并用0.3mm正畸鋼絲進(jìn)行結(jié)扎，結(jié)扎后將牙齦卟啉單胞菌均勻涂布至牙齦齦溝內(nèi)，1次/d。6周后隨機(jī)選擇一只大鼠取磨牙齦下菌斑一份進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，若培養(yǎng)皿中細(xì)菌菌落密集形成，肉眼可見磨牙牙齦紅腫，探診出血以及齦溝液溢增多與牙周袋形成，則牙周炎模型成功建立。

1.3 治療方法

將20只成功建立牙周炎模型大鼠隨機(jī)分為A、B兩組，每組10只。兩組大鼠均連續(xù)治療1周。A組大鼠采用光動力療法，甲苯胺藍(lán)粉末溶于0.9%無菌生理鹽水中，0.22μm微孔膜過濾，放置于避光環(huán)境中。采用最大輸出功率為260mW光動力治療儀，激光器中心波長為635nm。麻醉大鼠后取出結(jié)扎鋼絲，取50μL光敏劑浸潤上頜右側(cè)第一磨牙，于黑暗中留置9min后將光纖放在磨牙頜骨中央進(jìn)行照射，牙齦表面光強(qiáng)度212mW/cm2，光劑量48J/cm2，57s/次/d。B組大鼠采用羧甲基殼聚糖銀（CMCT-Ag+）對大鼠上頜右側(cè)第一磨牙進(jìn)行牙面以及牙周涂布給藥。2次/d，每次間隔12h。

1.4 觀察指標(biāo)

兩組大鼠治療前后接受標(biāo)本采集，通過ImagePro-pus5.0對總菌落以及pg菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，比較兩組治療前后細(xì)菌菌落數(shù)，牙菌斑指數(shù)（PLI）以及齦溝出血指數(shù)（SBI）變化。

標(biāo)本采集及厭氧培養(yǎng)：0.9%無菌生理鹽水對患牙齒沖洗30s，用棉卷隔濕后，用無菌刮治器將齦上菌斑刮除，氣槍吹干牙面，確立三個(gè)標(biāo)本采集位點(diǎn)。用40號無菌紙尖插入齦溝底20s后取出，將標(biāo)本置于裝有1ML轉(zhuǎn)送液離心管中，-20℃保存，2h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室，厭氧環(huán)境下培養(yǎng)6d。取黑色菌落，通過ImagePro-pus5.0對患牙細(xì)菌總菌落數(shù)及pg菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)。

牙菌斑指數(shù)（PLI）檢測：大鼠第一磨牙牙面均勻涂抹2%堿性品紅溶液，反復(fù)用清水沖洗三次，觀察牙齦表面紫紅色處數(shù)量（牙菌斑位置），以Silness菌斑判斷標(biāo)準(zhǔn)[5]為依據(jù)：0為無牙菌斑存在；1為有薄牙菌斑存在；2為有中等量牙菌斑存在；3為牙菌斑大量存在。觀察記錄后所得平均值即為大鼠（PLI）。

齦溝出血指數(shù)（SBI）檢測：固定大鼠頭部使其牙齦露出，將探針探入大鼠齦溝10s測定齦溝出血情況，以齦溝出血指數(shù)標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)：牙齦出血為陽性（5分）、牙齦未出血為陰性（0分）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將研究所得數(shù)據(jù)錄入SPSS19.0軟件中進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，并以（x±s）表示，若（P<0.05），則差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組大鼠菌斑總菌落數(shù)以及pg菌落數(shù)對比

兩組大鼠治療前菌斑總菌落與pg菌落數(shù)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），治療1周后菌斑總菌落數(shù)以及pg菌落數(shù)均顯著低于治療前（P<0.05）。兩組大鼠治療后菌斑總菌落數(shù)與pg菌落數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），詳見下表1。

2.2 兩組大鼠治療前后PLI、SBI比較

治療前兩組大鼠PLI、BI相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），治療后PLI顯著低于治療前（P<0.05）。其中，A組治療后PLI、SBI下降程度明顯優(yōu)于B組（P<0.05），詳見下表2。

3 討論

用羧甲基殼聚糖銀進(jìn)行抗菌治療是臨床上治療牙周炎常用方法，羧甲基殼聚糖是一種含有活性羧基以及活性氨基殼聚糖衍生物，具有較強(qiáng)重金屬螯合作用以及緩釋成膜性[6-7]。能夠與菌體表面N、O發(fā)生作用，并且在菌體周圍產(chǎn)生活性氧破壞菌，將菌體表面活性結(jié)構(gòu)破壞，從而產(chǎn)生殺菌效果。但是近年來有研究表明其治療效果并不理想[8-9]。有報(bào)道采用甲苯胺藍(lán)介導(dǎo)光動力療法[10]，本研究以大鼠作為研究對象，比較光動力學(xué)療法與羧甲基殼聚糖療法效果。兩組大鼠均治療1周后，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用甲苯胺藍(lán)介導(dǎo)光動力學(xué)療法治療的A組，牙菌斑指數(shù)和牙齦出血指數(shù)減少程度均明顯優(yōu)于使用羧甲基殼聚糖法進(jìn)行治療的B組，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[11-12]。研究表明，光動力學(xué)療法能夠有效殺滅多種口腔細(xì)菌，如放線桿菌、聚合酸桿菌、牙齦卟啉單胞菌以及中間普氏菌等。光動力學(xué)療法可以在抑制菌斑生物膜形成，同時(shí)有效清除口腔中細(xì)菌菌群。在牙周袋深處，一些粗糙牙骨質(zhì)表面和牙間隙等深在部位牙菌斑，用羧甲基殼聚糖進(jìn)行治療難以將菌斑完全清除，無法取得滿意治療效果。光動力學(xué)療法應(yīng)用激光照射原理能夠輕易達(dá)到這些部位，破壞牙菌斑生物膜結(jié)構(gòu)，殺滅口腔致病菌，從而取到良好治療效果[13-14]。另一方面，甄靜敏等[15]指出長期使用羧甲基殼聚糖治療牙周炎，細(xì)菌雖然能夠被部分清除，但部分細(xì)菌可能會產(chǎn)生耐藥性，影響治療效果。光動力學(xué)療法是通過光敏反應(yīng)產(chǎn)生單態(tài)氧對細(xì)菌進(jìn)行清除，無創(chuàng)且不會引起細(xì)菌耐藥性，能夠在實(shí)際治療過程中保持長時(shí)間治療效果。

綜上所述，甲苯胺藍(lán)介導(dǎo)光動力療法與羧甲基殼聚糖銀治療牙周病均有良好殺菌作用，然而光動力療法牙周病能夠更好控制牙菌斑生成，有效降低牙齦出血率發(fā)生，對牙周炎治療有良好促進(jìn)作用。

參 考 文 獻(xiàn)

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