新城疫活疫苗（lasota株）溶解在不同溫度水中病毒含量變化情況

龔美光 郎應(yīng)仁

摘 要：通過試驗(yàn)檢測雞場常用的高端和低端兩種新城疫（lasota株）活疫苗初始病毒含量（EID50/羽份），并模擬飲水免疫，將兩種疫苗稀釋后分別放在10 ℃、20 ℃和30 ℃溫度中水浴中1 h、2 h和3 h，檢測在不同溫度、不同水浴時(shí)間下疫苗病毒含量（EID50/羽份）的變化，為生產(chǎn)中飲水免疫提供理論依據(jù)。結(jié)果表明：高端和低端新城疫活疫苗初始病毒含量分別為106.5 EID50/羽份和106.0 EID50/羽份，高端疫苗病毒含量高于國家標(biāo)準(zhǔn)（106.0 EID50/羽份）3.2倍，低端疫苗和國家標(biāo)準(zhǔn)一致；放置在水浴中的疫苗病毒含量隨著時(shí)間增加呈下降趨勢，水溫越高下降越快；高端疫苗在10 ℃ 3 h、20 ℃ 2 h和30 ℃ 1 h條件下可以保證病毒含量（EID50/羽份）不低于國家標(biāo)準(zhǔn)，而低端疫苗無論溶解在哪個(gè)溫度的水中后，進(jìn)行免疫的病毒含量（EID50/羽份）都低于國家標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：新城疫；病毒含量；飲水免疫

中圖分類號：S852.4+3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1001-0769（2015）11-0048-02

新城疫（Newcastle Disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的家禽重要傳染病，可導(dǎo)致多種禽類發(fā)生高死亡率[1]。該病嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，常給養(yǎng)雞業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失，被國際獸疫局（OIE）列為必須通報(bào)的重要疫病之一。疫苗在ND的控制上起到了重要的作用，當(dāng)前疫苗免疫效力的評價(jià)指標(biāo)主要為臨床死亡率，由于ND疫苗的廣泛使用，ND的死亡率得到了較好的控制，但免疫雞群中非典型ND的發(fā)生現(xiàn)象卻比較普遍[2]，飲水免疫新城疫活疫苗是防控新城疫過程中重要的免疫方式。然而，很多養(yǎng)殖戶對飲水免疫時(shí)的時(shí)間和飲水溫度對疫苗效價(jià)的影響沒有明確的認(rèn)識。免疫操作時(shí)，常出現(xiàn)水溫太高或飲水時(shí)間太長，結(jié)果導(dǎo)致疫苗病毒效價(jià)損失，從而影響免疫效果，引發(fā)非典型新城疫的發(fā)生。本試驗(yàn)通過檢測新城疫疫苗溶解在不同溫度的水中和不同的飲水時(shí)間下效價(jià)損失情況，來指導(dǎo)現(xiàn)場飲水免疫時(shí)根據(jù)水溫確定飲水免疫的時(shí)間。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 疫苗

雞新城疫（lasota株）活疫苗（高端和低端各一瓶），購自于濟(jì)南有疫苗經(jīng)營許可證的經(jīng)銷商處，生產(chǎn)批號分別為：20150508、20150519，都是最新批次疫苗。

1.2 2SPF雞胚

11日齡SPF雞胚，購自山東農(nóng)科院濟(jì)南家禽研究所。

1.3 試驗(yàn)方法

新城疫疫苗置于不同溫度的水中和不同飲水時(shí)間下病毒含量（EID50/羽份）測定：將一瓶新城疫活疫苗（1 000羽份）用生理鹽水稀釋成1羽份/0.1 mL，平均分成3份，分別置于在10 ℃、20 ℃和30 ℃水浴中，每組在0 h、1 h、2 h和3 h時(shí)吸取0.1 mL，進(jìn)行10倍稀釋，每個(gè)稀釋度尿囊腔接種10日齡SPF雞胚5枚，每枚雞胚接種0.1 mL，置37 ℃繼續(xù)孵育120 h，48 h內(nèi)死亡的雞胚棄去不計(jì)；在48 h～120 h內(nèi)死亡的雞胚，隨時(shí)取出，收獲雞胚尿囊液，將同一稀釋度的雞胚尿囊液等量混合，分別測定紅細(xì)胞凝集價(jià)。至120 h，取出所有活胚，逐個(gè)收獲雞胚尿囊液，分別測定紅細(xì)胞凝集價(jià)，凝集價(jià)不低于1∶160（微量法1∶128）者判定感染，計(jì)算EID50。每羽份病毒含量應(yīng)該不低于106.0EID50[3]。

2 結(jié)果與分析

2.1 高端新城疫活疫苗檢測結(jié)果

從表1可以看出高端新城疫活疫苗初始病毒含量為106.5 EID50/羽份，在10 ℃水溫下3 h時(shí)病毒含量還可以達(dá)到106.17 EID50，仍高于國家標(biāo)準(zhǔn)106.0 EID50/羽份； 20 ℃水溫下2 h病毒含量就已經(jīng)下降到國家的標(biāo)準(zhǔn)線106.0 EID50/羽份；在30 ℃水溫下1 h疫苗病毒含量就下降到國家標(biāo)準(zhǔn)線106.0 EID50/羽份。

2.2 低端新城疫活疫苗檢測結(jié)果

從表2可以看出低端疫苗初始病毒含量為106.0 EID50/羽份，符合國家標(biāo)準(zhǔn)，但是放在10 ℃、20 ℃和30 ℃三個(gè)不同溫度的水浴鍋內(nèi)各1 h內(nèi)抗原含量都降到國家標(biāo)準(zhǔn)以下，水溫越高效價(jià)損失越嚴(yán)重。

3 討論

從表1可以看出高端新城疫活疫苗初始病毒含量為106.5 EID50/羽份，是國家標(biāo)準(zhǔn)要求106.0的3.2倍（通過計(jì)算得知），在10 ℃水溫下3 h時(shí)病毒含量還可以達(dá)到106.17 EID50，如果按照正常計(jì)量免疫，10 ℃水溫中飲水免疫時(shí)間達(dá)到3 h也可以達(dá)到正常的免疫效果；20 ℃水溫下2 h病毒含量就已經(jīng)下降到國家的標(biāo)準(zhǔn)線106.0 EID50/羽份，說明在20 ℃水溫中飲水免疫時(shí)間不能超過2 h；在30 ℃水溫下1 h疫苗病毒含量就下降到國家標(biāo)準(zhǔn)線，說明在30 ℃水溫中飲水免疫時(shí)間不能超過1 h。在養(yǎng)殖生產(chǎn)中，絕大多數(shù)飲水免疫用水的溫度都超過20 ℃以上，甚至在炎熱的夏季飲水免疫用水的溫度要超過30 ℃，如果飲水免疫的時(shí)間沒有嚴(yán)格的限制就會導(dǎo)致免疫效果差，甚至引起免疫失敗。除了水溫和飲水的時(shí)間對抗原含量的影響，還受其他多方面的因素影響，比如：水中的重金屬含量、是否含有消毒劑、水線的清潔程度等[4]，所以要想使飲水免疫能達(dá)到我們預(yù)期的效果首先要保證免疫用水的溫度和免疫時(shí)間，水溫達(dá)到20 ℃時(shí)保證2 h內(nèi)飲完，水溫達(dá)到30 ℃以上時(shí)要保證1 h內(nèi)飲完疫苗。根據(jù)作者的臨床經(jīng)驗(yàn)，最好采用2次飲水免疫法，即每次所使用的疫苗分成兩次免疫，每次免疫的時(shí)間不超過1 h，這樣既能避免水溫對疫苗效價(jià)的影響，又能使雞群飲水免疫更均勻。

本試驗(yàn)選擇的低端新城疫活疫苗出廠時(shí)，新城疫病毒效價(jià)符合國家標(biāo)準(zhǔn)（106.0 EID50/羽份），但無論溶解在哪個(gè)溫度水中，在進(jìn)行免疫時(shí)疫苗的病毒效價(jià)都低于國家標(biāo)準(zhǔn)，如在20 ℃水溫中1 h效價(jià)變?yōu)?05.6=4×105=0.4×106 ，所以，免疫時(shí)至少加2.5倍量才能使1 h內(nèi)達(dá)到應(yīng)有的免疫效果。但有些低端疫苗經(jīng)過多次運(yùn)輸、長時(shí)間保存或儲存不當(dāng)，在使用前疫苗病毒效價(jià)已經(jīng)低于國家標(biāo)準(zhǔn)。如果養(yǎng)殖戶還按要求計(jì)量免疫，就可能達(dá)不到正常的免疫效果，所以就需要加大計(jì)量去免疫。但是，具體加多少倍量才能達(dá)到有效計(jì)量，很難去估量，也就出現(xiàn)了部分養(yǎng)殖戶在使用低端疫苗時(shí)盲目加大計(jì)量的現(xiàn)象。相反，一些高端優(yōu)質(zhì)疫苗在生產(chǎn)時(shí)，廠家考慮到各種因素導(dǎo)致的疫苗效價(jià)損失[5]，疫苗出廠時(shí)抗原含量超出國家標(biāo)準(zhǔn)幾倍（本試驗(yàn)測得的數(shù)值為3.2倍），只要雞群健康、疫苗儲存和免疫操作得當(dāng)，就會達(dá)到良好的免疫效果。建議各位養(yǎng)殖朋友盡量選擇優(yōu)質(zhì)的新城疫活疫苗，利用科學(xué)的免疫操作方式，保證雞群新城疫的防控效果。

參考文獻(xiàn)：（5篇，略）