多種飼料添加劑類抗生素對豬源產氣莢膜梭菌的抑菌效果研究

李昆 樊云燕 閆學艷 周姣 張錦華

摘 要：本試驗目的在于研究多種不同飼料添加劑類抗生素對產氣莢膜梭菌的抑菌試驗，篩選出對產氣莢膜梭菌抑菌效果強的藥物，為飼料、養(yǎng)殖業(yè)臨床上控制產氣莢膜梭菌提供理論依據。試驗選用喹乙醇、4 %恩拉霉素、鹽霉素、硫酸黏霉素、15 %桿菌肽鋅、黃霉素、吉他霉素和鹽酸金霉素八種飼料常用抗生素添加劑，采用試管稀釋法對豬源產氣莢膜梭菌野毒株進行抑菌試驗。

試驗結果表明：（1）恩拉霉素抑菌作用最強，其MIC為1.6 μg/mL；（2）喹乙醇和15 %桿菌肽鋅抑菌作用較強，它們的MIC分別為4 μg/mL和6 μg/mL；（3）黃霉素、硫酸黏霉素、吉他霉素抑菌作用較弱，它們的MIC分別為40 μg/mL、200 μg/mL、300 μg/mL；（4）鹽霉素及鹽酸金霉素對該產氣莢膜梭菌野毒株幾乎沒有抑菌作用。由以上八種抗生素對產氣莢膜梭菌的抑菌試驗結果得出，八種抗生素對該產氣莢膜梭菌野毒株均有不同程度的抑菌作用，而恩拉霉素對產氣莢膜梭菌抑菌效果最強。

關鍵詞：飼料添加劑類抗生素；豬源產氣莢膜梭菌野毒株；抑菌試驗；最低抑菌濃度（MIC）

中圖分類號：S852.61+6.3 文獻標識碼：A 文章編號：1001-0769（2015）11-0046-02

產氣莢膜梭菌（Clostridium Perfringens）是一種革蘭氏陽性的專性厭氧桿菌，因其能形成芽孢的特性，故能夠存在于豬的生態(tài)系統中[1]。在自然界也分布極廣，可見于土壤、污水、飼料、食物、糞便以及動物腸道等中，也是動物腸道的正常菌群之一[2]。

產氣莢膜梭菌致病作用主要在于它所產生的毒素，目前依據該菌能產生四種不同的主要毒素，將其分為A、B、C、D和E五個型[3]。而引起豬氣性壞疽、腸毒血癥和壞死性腸炎，主要是A型或C型產氣莢膜梭菌[2]。A型產氣莢膜梭菌感染率非常高，Gloria等在2011年調查48個豬場中產氣莢膜梭菌流行情況中得出，87.5 %（42/48）的豬場存在A型產氣莢膜梭菌感染[4]。Abdolvahab等在研究46頭仔豬產氣莢膜梭菌后得出，A型產氣莢膜梭菌感染率100 %[5]。由于產氣莢膜梭菌是一種條件性致病菌，一般情況下不發(fā)病，但在飼養(yǎng)管理不良、衛(wèi)生條件差等不利條件下，動物腸道內環(huán)境菌群紊亂，很容易引起產氣莢膜梭菌的大量繁殖產生毒素，進而導致產氣莢膜梭菌性疾病發(fā)生[6，7]。該菌導致的豬猝死癥發(fā)病急、病程短、死亡率高，為了減少產氣莢膜梭菌給養(yǎng)殖業(yè)帶來的損失，應加強疾病預防。本實驗從江西萬年縣分離出一株產氣莢膜梭菌，針對性地對江西地區(qū)的產氣莢膜梭菌進行飼料添加劑的抑菌實驗，故選用了多種飼料添加劑類抗生素對產氣莢膜梭菌進行抑菌效果比較，研究出抑菌效果比較好的抗生素飼料添加劑，為飼料、養(yǎng)殖業(yè)臨床應用提供一些理論依據。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗菌株

由本實驗室在江西萬年縣于2015年，從1～7日齡腹瀉仔豬分離、鑒定和保存的A型產氣莢膜梭菌。

1.1.2 培養(yǎng)基

液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（FTG）、胰胨-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸（TSC）瓊脂，均購置南昌萬特科技有限公司。

1.1.3 試驗藥物（表1）

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗藥物的處理

根據獸藥質量標準，對上述4 %恩拉霉素等八種藥物進行處理，對藥物進行溶解后于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 產氣莢膜梭菌的準備

將保存的菌于TSC瓊脂劃線復蘇，挑單個黑色菌落至10 mL FTG液體培養(yǎng)基中，37 ℃厭氧培養(yǎng)10 h后，用滅菌FTG培養(yǎng)基稀釋到0.5麥氏比濁管（1×106 CFU/mL）濃度，待用。

1.2.3 采用試管稀釋法測定八種藥物的最低抑菌濃度

預實驗確定各種藥物最低抑菌濃度（MIC）范圍，將處理好的藥物用滅菌水進行倍比稀釋，與A型產氣莢膜梭菌分別加入FTG液體培養(yǎng)基中，使各種藥物在試管中的終濃度如表2，將試驗試管于37 ℃中培養(yǎng)24 h，通過肉眼觀察細菌生長情況。試驗結束后，如試管中的溶液澄清透明，說明沒有細菌生長；如試管中有絮狀細菌或混濁，說明有細菌生長。通過細菌是否生長來判定藥物的MIC。

2 結果

（1） 4 %恩拉霉素對A型產氣夾膜梭菌的抑菌試驗結果如圖1。

從圖1可以看出1～3號試管中的溶液澄清透明，說明沒有細菌生長；5號試管中的溶液有絮狀物，6～7號試管渾濁，說明有細菌生長。因此，本試驗中恩拉霉素對產氣莢膜梭菌最小抑菌濃度（MIC）為1.6 μg/mL。

（2） 八種藥物對A型產氣莢膜梭菌野毒株的抑菌結果見表3。

3 結論

豬產氣莢膜梭菌病主要是由A或C型產氣莢膜梭菌引起的一種傳染病，該病主要發(fā)生在1～7日齡新生仔豬，引起仔豬腹瀉，發(fā)病急、病程短、死亡率高[8]。產氣莢膜梭菌是一種條件性致病菌，鑒于產氣莢膜梭菌的高感染率，實驗選取八種常用飼料添加劑類抗生素，對其進行抑菌試驗得出MIC，為預防產氣莢膜梭菌性疾病提供參考依據，并減少養(yǎng)殖業(yè)損失。

由本試驗結果得出，八種抗生素對A型產氣莢膜梭菌野毒株均有不同程度的抑菌作用，其中以恩拉霉素抑菌作用最強，其MIC為1.6 μg/mL；其次為喹乙醇和15 %桿菌肽鋅，他們的 MIC分別為4 μg/mL和6 μg/mL；最后黃霉素、硫酸黏霉素、吉他霉素抑菌作用較弱，他們的MIC分別為40 μg/mL、200 μg/mL、300 μg/mL；而鹽霉素和鹽酸金霉素對該A型產氣莢膜梭菌野毒株幾乎沒有抑制作用。鄒君彪[9]曾做過不同抗生素對產氣莢膜梭菌抑菌試驗研究，其結果也表明恩拉霉素對產氣莢膜梭菌抑菌效果最強。

恩拉霉素在腸道內不被降解，能夠保持原有的抗菌活性，且具有毒性低和優(yōu)良的促生長及改善飼料利用率的作用[10]，在臨床上預防產氣莢膜梭菌病性疾病中具有參考意義。

參考文獻：（10篇，略）