混合菌種發(fā)酵酸馬乳的降血脂功能研究

武　運(yùn)，王　璐，閻曉菲，郭佳佳，劉淑亞，王小標(biāo)，苗　森，包曉瑋，劉武軍，古麗娜孜（.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊8005；.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)技術(shù)學(xué)院，新疆烏魯木齊8005；.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊8005）

混合菌種發(fā)酵酸馬乳的降血脂功能研究

武運(yùn)1，王璐2，閻曉菲2，郭佳佳1，劉淑亞1，王小標(biāo)1，苗森1，包曉瑋1，劉武軍3，古麗娜孜1
（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊830052；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)科學(xué)技術(shù)學(xué)院，新疆烏魯木齊830052；3.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊830052）

為研究混合菌種發(fā)酵酸馬乳的降血脂作用，采用混合菌種發(fā)酵酸馬乳對(duì)小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，研究其對(duì)高脂模型小鼠體重、血脂水平、臟器指數(shù)和動(dòng)脈硬化（AI）指數(shù)的影響。結(jié)果表明，混合菌種發(fā)酵酸馬乳中、高劑量能夠顯著降低高血脂癥小鼠TC、TG、LDL-C、AI水平（p＜0.05），顯著升高HLD-C水平（p＜0.05），并且能降低小鼠體重和肝臟指數(shù)，說明混合菌種發(fā)酵酸馬乳對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥小鼠具有降低血脂的作用，對(duì)高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化具有一定的預(yù)防作用。

馬乳，發(fā)酵，小鼠，降血脂

近年來，隨著人們生活水平提高，高血脂癥發(fā)病率大幅度增高，其嚴(yán)重性不容忽視［1］。據(jù)報(bào)道，我國成人高血脂癥的患病率為20%～40%，估計(jì)有1.6億患病者，而且以每天萬人的速度遞增［2］。高血脂不僅是現(xiàn)代人類健康的隱形殺手，還是冠心病、動(dòng)脈硬化等心腦血管疾病的主要誘因。積極有效的降脂、調(diào)脂是預(yù)防和治療高血脂癥的重要手段，因此，早期控制并及時(shí)治療高血脂癥迫在眉睫。研究發(fā)現(xiàn)，一些天然生物活性物質(zhì)在治療高血脂癥等疾病方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢，那么研制具有調(diào)節(jié)血脂作用的保健食品對(duì)人類健康有重要義［3-5］。

酸馬乳（Koumiss）是以新鮮馬乳為原料，加入乳酸菌和酵母菌等微生物發(fā)酵形成的一種酸性低醇含量的乳飲品［6］。臨床研究表明，長期飲用酸馬乳，具有顯著的降血脂作用，是預(yù)防及治療高血脂、冠心病、冠狀動(dòng)脈硬化等疾病的天然藥物［7-8］，其有效成分主要是乳酸菌、乳清酸、鈣、不飽和脂肪酸等物質(zhì)［9］。紅曲霉被廣泛應(yīng)用于釀酒、發(fā)酵、食品著色等方面。大量研究結(jié)果表明，紅曲霉中含有降血脂活性成分洛伐他?。∕onacolin K）類物質(zhì)，對(duì)血清中脂類水平具有顯著的調(diào)節(jié)作用［10-12］，是目前在保健食品中唯一應(yīng)用的他汀類物質(zhì)［13-14］。因此，本文以乳酸菌、酵母菌、紅曲霉發(fā)酵的馬乳為研究對(duì)象，研究其對(duì)實(shí)驗(yàn)性高血脂模型小鼠血脂的影響，以探究混合菌種發(fā)酵酸馬乳應(yīng)用于高血脂癥預(yù)防的可行性，為研制降血脂功能食品提供一定的理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

成年健康昆明種小鼠雌雄各半，體重為（20±2）g，購自新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；陽性對(duì)照藥品血脂康膠囊北京北大維信生物科技有限公司；膽固醇、豬膽鹽北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）及低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

Infinite M200酶標(biāo)儀瑞士帝肯公司；Mini Spin個(gè)人型高速離心機(jī)德國Eppendorf公司；DZKW-172型電熱恒溫水浴鍋北京市光明醫(yī)療儀器廠；DHP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱上海一恒科技有限公司；MST-401 JM10002型電子天平上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1混合菌種發(fā)酵酸馬乳的制備新鮮馬乳經(jīng)過濾、巴氏殺菌后，等比例分裝于2個(gè)發(fā)酵罐中，一部分接種活化好的乳酸菌和酵母菌發(fā)酵液（體積比為3%和5%），33℃發(fā)酵42h，得到發(fā)酵液Ⅰ；另一部分接種活化好的紅曲霉母發(fā)酵液（體積比為7%），29℃發(fā)酵7d，得到發(fā)酵液Ⅱ；再將發(fā)酵液Ⅰ和發(fā)酵液Ⅱ等比例混合，巴氏殺菌后得到混合菌種發(fā)酵酸馬乳，產(chǎn)品4℃冷藏保存。

1.2.2動(dòng)物分組及處理動(dòng)物購入飼養(yǎng)觀察1周，使其適應(yīng)環(huán)境后，按體重隨機(jī)分為：正常對(duì)照組、高脂模型組、藥物對(duì)照組、混合菌種發(fā)酵酸馬乳低劑量組、中劑量組和高劑量組共6組，每組共10只（雌雄各5只），分籠喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)過程中，正常對(duì)照組喂基礎(chǔ)飼料并灌胃蒸餾水，其余各組給予高脂飼料（高脂飼料配方：基礎(chǔ)飼料78.8%、膽固醇1%、膽鹽0.2%、蛋黃粉10%、豬油10%），高脂模型組灌胃蒸餾水，藥物對(duì)照組灌胃給予血脂康膠囊（240mg/kg），低、中、高劑量組灌胃相應(yīng)劑量的混合菌種發(fā)酵酸馬乳（2、6、10mL/kg）。每日1次，連續(xù)給藥4周。

1.3指標(biāo)測定

1.3.1稱重每隔7d使用天平稱重。

1.3.2血脂測定小鼠禁食24h后，摘除眼球取血，37℃放置30min后，3000r/min，離心15min，取血清，使用試劑盒測血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）4個(gè)指標(biāo)，以mmol/L表示。

1.3.3臟器指數(shù)的測定小鼠取血后處死，解剖剝離其心臟、肝臟、脾臟、腎臟，用生理鹽水清洗干凈，吸干表面水分后，稱取其質(zhì)量，以%表示，按照式（1）計(jì)算［15］：

臟器系數(shù)（%）=（臟器質(zhì)量/小鼠質(zhì)量）×100式（1）

1.3.4動(dòng)脈硬化（AI）指數(shù)的測定按照式（2）計(jì)算：

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行方差分析，分析組間差異顯著性，p＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.1各實(shí)驗(yàn)組小鼠體重的變化

在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，小鼠生長狀態(tài)良好，無不良反應(yīng)，每7d稱量小鼠體重，結(jié)果如表1所示，空白對(duì)照組小鼠體重與高脂模型組相比有極顯著差異（p＜0.01），體重變化明顯，說明本實(shí)驗(yàn)高脂模型造模成功。4周實(shí)驗(yàn)期間，各實(shí)驗(yàn)組小鼠體重均有不同程度的增長，給藥1～4周，藥物對(duì)照組、中劑量組和高劑量組與高脂模型組小鼠體重均存在極顯著差異（p＜0.01），在第4周時(shí)，高脂模型與低劑量組小鼠體重存在極顯著差異（p＜0.01），說明一定劑量的混合菌種發(fā)酵酸馬乳可以使小鼠體重下降，對(duì)小鼠體重具有調(diào)節(jié)作用，中、高劑量組對(duì)調(diào)節(jié)高血脂癥小鼠體重效果極顯著（p＜0.01）。

2.2混合菌種發(fā)酵酸馬乳對(duì)高血脂癥小鼠血脂水平和AI的影響

表1　各實(shí)驗(yàn)組小鼠體重質(zhì)量的變化（n=10，x±s，g）Table 1　Weight change of different treatment group mice（n=10，x±s，g）

由表2可知，高脂模型組小鼠血清中TC、TG、LDL-C含量和AI極顯著高于空白對(duì)照組（p＜0.01），而HDL-C含量顯著低于空白對(duì)照組（p＜0.05），說明誘導(dǎo)高血脂小鼠模型成功。藥物對(duì)照組與高脂模型組比較能有效降低高血脂癥小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平，升高HDL-C水平；中、高劑量組與高脂模型組比較，TG、TC、LDL-C水平均有不同程度的降低，HDL-C水平升高，差異有顯著性意義（p＜0.05，p＜0.01），低劑量組對(duì)血脂水平的影響不明顯。與高脂模型組相比，高劑量組小鼠血清的TC、TG和LDL-C水平分別降低了11.5%、16.18%、12.65%，HDL-C水平升高了16.99%。各劑量組對(duì)高血脂癥小鼠的降脂效果，中、高劑量組較好，低劑量組次之，并且呈現(xiàn)一定的量效相關(guān)性。AI值的大小與動(dòng)脈粥樣硬化程度成正相關(guān)。與高脂模型組相比，低、中、高劑量組和藥物對(duì)照組小鼠AI值下降率分別為23.58%、27.07%、28.82%、

2　結(jié)果與分析

28.38%，并且高劑量組AI值與藥物對(duì)照組接近。因此可以說明，混合菌種發(fā)酵酸馬乳具有降低高血脂癥小鼠血脂水平，對(duì)動(dòng)脈硬化的形成可起到一定的預(yù)防作用。

表2　不同實(shí)驗(yàn)組小鼠血脂水平和AI的變化（x±s，n=10，mmol/L）Table 2　The variety of blood lipid levels and AI in different groups（x±s，n=10，mmol/L）

表3　不同實(shí)驗(yàn)組小鼠的臟器指數(shù)的變化（x±s，n=10，g/100g）Table 3　The variety of viscera weight mice in different groups（x±s，n=10，g/100g）

2.3混合菌種發(fā)酵酸馬乳對(duì)高血脂癥小鼠臟器系數(shù)的影響

臟器系數(shù)是內(nèi)臟鮮重和體重比值的百分?jǐn)?shù)，實(shí)驗(yàn)小鼠長期食用高脂飼料會(huì)導(dǎo)致臟器脂質(zhì)累積和病變等的變化，可以通過臟器指數(shù)的變化反映出來［16］。由表3可以看，與高脂模型組相比，高劑量組肝臟指數(shù)存在極顯著性差異（p＜0.01），中劑量組存在顯著性差異（p＜0.05），而低劑量組沒有顯著差異。各劑量組心臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、腎臟指數(shù)與高脂模型組相比差異不顯著（p＞0.05）。由此可初步推斷，在給藥期間，小鼠重要臟器重量下降幅度小，說明混合菌種發(fā)酵酸馬乳對(duì)小鼠臟器吸收沒有明顯影響，且不會(huì)對(duì)小鼠臟器造成實(shí)質(zhì)性傷害。

3　結(jié)論

以乳酸菌、酵母菌、紅曲霉混合發(fā)酵馬乳為原材料，采用不同劑量的混合菌種發(fā)酵酸馬乳對(duì)高血脂癥小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，研究發(fā)現(xiàn)，混合菌種發(fā)酵酸馬乳對(duì)高血脂癥小鼠體重的增長有一定的控制作用，中、高劑量組能夠顯著降低實(shí)驗(yàn)組小鼠TC、TG、LDL-C、AI水平（p＜0.05），顯著升高HLD-C水平（p＜0.05），說明混合菌種發(fā)酵酸馬乳對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥小鼠具有降低血脂的作用，對(duì)高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化具有一定的預(yù)防和調(diào)節(jié)作用，為混合菌種發(fā)酵酸馬乳開發(fā)利用提供了一定的理論依據(jù)。

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Study on the blood lipid lowering function of multi-strain fermentation with mare's milk

WU Yun1，WANG Lu2，YAN Xiao-fei2，GUO Jia-jia1，LIU Shu-ya1，WANG Xiao-biao1，MIAO Sen1，BAO Xiao-wei1，LIU Wu-jun3，GU Li-nazi1
（1.College of Food Sciences and Pharmaceutical Sciences，Xinjiang Agricultural University，Urumqi 830052，China；2.College of Science and Technology，Xinjiang Agricultural University，Urumqi 830052，China；3.College of Animal Science，Xinjiang Agricultural University，Urumqi 830052，China）

To study the decreasing the blood lipid function of Multi-strain fermentation with mare’s milk.Multistrain fermentation with mare’s milk was tested in mouse to study its effect on hyperlipidemia mouse model with body weight，blood lipid levels，Viscera index and AI.The results demonstrated that the medium and high doses of multi-strain fermentation with mare’s milk could significantly reduce the contents of TC，TG and LDLC（p＜0.05）and increase the contents of HDL-C（p＜0.05）in hyperlipidemia mice.And significantly reduce the contents of body weight，liver index.Multi-strain fermentation with mare’s milk had the effects of marked decreasing the blood lipid in experimental hyperlipidemia mice，and also had certain precautionary effects on hyperlipidemia and Atherosclerosis.

mare’s milk；fermentation；mouse；decrease blood lipid

TS201.3

A

1002-0306（2015）02-0355-03

10.13386/j.issn1002-0306.2015.02.068

2014-03-17

武運(yùn)（1965-），女，碩士研究生，教授，研究方向：食品生物技術(shù)。

新疆維吾爾自治區(qū)重大專項(xiàng)（201130101-4（2）-2）；國家科技支撐項(xiàng)目（2012BAD44B01-05）。