飼用膽汁酸添加劑的亞慢性毒性試驗

鄭玲敏　陳航　周澤偉　王雨晶　王凱　魯倩倩　張雨梅

摘要：將飼用膽汁酸按0、60、600、3000mg/kg添加于飼料中喂養(yǎng)Wistar大鼠90d，每周稱量大鼠體質(zhì)量與飼料消耗，并在喂養(yǎng)45、90d時剖檢，分別進行血液細胞學、血液生化指標檢測，計算主要臟器系數(shù)并進行組織病理學檢查。結果表明，大鼠飼喂低、中、高劑量膽汁酸后平均飼料消耗、體質(zhì)量增重、臟器系數(shù)、血液細胞學指標、大體解剖及組織病理學檢查結果與對照組無顯著差異。中劑量組血液生化指標除了喂養(yǎng)45d時GLU、TG以及喂養(yǎng)90d時TG稍低于對照組外，其他指標與對照無顯著差異。飼用膽汁酸飼料添加劑在3000mg/kg添加量時，對大鼠喂養(yǎng)90d未觀察到明顯的有害作用。

關鍵詞：大鼠；膽汁酸；飼料添加劑；亞慢性毒性；臨床應用；安全劑量

中圖分類號：S816.73 文獻標志碼：A 文章編號：1002-1302（2015）05-0222-04

膽汁酸是在肝臟中合成的具有同類結構的大分子，是膽汁的主要成分，在促進脂類消化、膽固醇代謝方面有著極為重要的作用。膽汁酸進入小腸后，乳化并水解脂肪為脂肪酸、甘油，并通過肝腸循環(huán)被重新吸收。膽汁酸可以促進膽汁分泌。研究發(fā)現(xiàn)，膽汁酸還是一類信號分子，可介導多種細胞信號的傳導，包括參與鈣動員、環(huán)磷酸腺苷合成、蛋白激酶C易位和活性。膽汁酸的TGR5細胞表面受體廣泛分布于褐色脂肪組織、免疫系統(tǒng)、骨骼肌、神經(jīng)組織、腸內(nèi)膜等眾多組織中，參與能量代謝、炎癥反應的信號傳導途經(jīng)。膽汁酸對膽固醇、具有潛在毒性的外源性物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的排泄和生物轉(zhuǎn)化具有重要作用。飼料中添加膽汁酸不僅可以活化脂肪酶、促進脂肪乳化、提高脂肪在腸道中的消化吸收率，還可以幫助機體排出有害物質(zhì)、提高動物免疫功能、促進動物攝食、提高餌料效率、降低飼養(yǎng)成本，從而改善動物生產(chǎn)性能。筆者通過大鼠亞慢性試驗，考察膽汁酸較長時間應用時大鼠是否存在不良反應，旨在為膽汁酸作為飼料添加劑的臨床應用提供依據(jù)。

1.材料與方法

1.1材料

4周齡Wistar大鼠（清潔級），雌雄各40只，由揚州大學比較醫(yī)學中心提供。動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（蘇）2012-0004，使用許可證號：SYXK（蘇）2012-0029。大鼠飼喂經(jīng)60Co照射的飼料，自由采食、飲水，所飲水為符合城市飲用水標準的自來水，試驗前在試驗環(huán)境中適應5d。飼用膽汁酸呈白色粉末狀，膽汁酸總量>95%，批號20130428，由某動物保健品有限公司提供。

1.2受試物劑量及染毒途經(jīng)

添加飼用膽汁酸于飼料中，經(jīng)飼料加工廠制成藥料，飼喂90d。添加量分為3000、600、60mg/kg高、中、低3個劑量組；對照組飼喂大鼠常規(guī)飼料。大鼠隨機分為4組，每組20只，雌雄各半。

1.3觀察指標

試驗期間觀察大鼠的行為及飲食，每周稱量體質(zhì)量、飼料消耗。分別在喂養(yǎng)45、90d時進行大體解剖，每組10只大鼠（雌雄各5只），分別取抗凝血進行血液細胞學檢測。取血清樣品進行谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHO）、葡萄糖（GLU）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）等血液生化指標的檢測。稱量心、肝、脾、肺、腎、卵巢子宮、睪丸附睪質(zhì)量，計算臟器系數(shù)。對肝、腎、脾、肺、十二指腸、睪丸、子宮等主要臟器進行組織病理學檢查。

1.4數(shù)據(jù)處理

采用SPSS19.0軟件處理數(shù)據(jù)。

2.結果與分析

試驗期內(nèi)未發(fā)現(xiàn)飼用膽汁酸試驗組大鼠有異常行為及表現(xiàn)，體質(zhì)量、飼料消耗、臟器系數(shù)、血液學指標等見表1至表8。大鼠飼喂低、中、高劑量膽汁酸后平均飼料消耗、體質(zhì)量增重、臟器系數(shù)、血液細胞學指標、大體解剖及組織病理學檢查結果與對照組無顯著差異。中劑量組血液生化指標除了喂養(yǎng)45d時GLU、TG，喂養(yǎng)90d時TG稍低于對照組外，其他指標與對照無顯著差異。

3.結論與討論

本研究表明，飼用膽汁酸飼料添加劑在3000mg/kg添加量時，對大鼠喂養(yǎng)90d未觀察到明顯的有害作用。如果在60mg/kg推薦水平使用，臨床應用應該是安全的。亞慢性毒性是指試驗動物連續(xù)多日接觸較大劑量的外來化合物所出現(xiàn)的中毒效應，試驗目的是觀察不同劑量外源物質(zhì)長期飼喂動物產(chǎn)生的毒性作用性質(zhì)及靶器官，并制定安全使用劑量。正常情況下動物血液生理生化指標維持動態(tài)平衡，當動物受生物、化學、應激等因素影響時，血液生理生化指標就會發(fā)生相應的變化。血液生理生化指標是反映外來物質(zhì)對機體毒性作用程度的關鍵指標。本研究表明，中劑量組血液生化指標除了喂養(yǎng)45d時GLU、TG，喂養(yǎng)90d時TG稍低于對照組外，其他指標與對照無顯著差異。膽汁酸中劑量組的GLU、TG數(shù)值均在Wistar大鼠正常生理指標范圍內(nèi)。endprint