白毒鵝膏菌復(fù)合煙草毒素粗品對(duì)花斑皮蠹的毒效

趙瑩等

摘要：為開發(fā)環(huán)境友好型生物殺蟲劑，找到一種生物防治花斑皮蠹的方法，利用白毒鵝膏菌和煙草的毒素粗品對(duì)花斑皮蠹幼蟲進(jìn)行誘殺試驗(yàn)。結(jié)果表明：白毒鵝膏菌復(fù)合煙草的毒素粗品對(duì)花斑皮蠹幼蟲有一定的誘殺作用，并表現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)。施藥后5 d，煙草提取物對(duì)花斑皮蠹幼蟲的平均引誘率達(dá)40%以上，效果明顯；在3種大型真菌毒素粗品中，白毒鵝膏菌毒素粗品對(duì)花斑皮蠹幼蟲的毒殺效果最明顯；白毒鵝膏菌復(fù)合煙草毒素粗品的誘殺效果隨著白毒鵝膏菌毒素濃度的增大而越來(lái)越明顯，且二者具有協(xié)同作用。當(dāng)濃度達(dá)到12%時(shí)，花斑皮蠹幼蟲的誘殺率為7925%，效果顯著。說(shuō)明作為一種生物源復(fù)合殺蟲劑的白毒鵝膏菌復(fù)合煙草的毒素粗品防治花斑皮蠹幼蟲效果顯著。

關(guān)鍵詞：白毒鵝膏菌；煙草；花斑皮蠹；毒素粗品；生物防治

中圖分類號(hào)： S433.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2015）09-0175-02

花斑皮蠹（Trogoderma variabile）屬鞘翅目（Coleoptera）皮蠹科（Dermestidae）昆蟲，是世界性的儲(chǔ)藏物害蟲，主要危害糧食、織物、電纜、家居裝潢材料及動(dòng)植物標(biāo)本，少數(shù)傳播動(dòng)物炭疽桿菌和微粒子病等[1]。其幼蟲破壞性大，活動(dòng)隱蔽，耐寒、耐熱、耐餓，繁殖力強(qiáng)，是斑皮蠹屬在國(guó)內(nèi)分布最廣、危害最嚴(yán)重的種類；加之其隱藏于蛀成“隧道”的貯藏物中難以發(fā)現(xiàn)，也給其防治帶來(lái)了不小的難題。目前，對(duì)花斑皮蠹的防治主要使用化學(xué)藥物，由于殺蟲劑的抗性及生態(tài)環(huán)境和食品安全問(wèn)題，使大型真菌源農(nóng)藥的研究開發(fā)具有重要的意義。白毒鵝膏菌為常見(jiàn)毒菌，但它對(duì)花斑皮蠹是否有活性鮮為人知，與植物源毒素粗品復(fù)合使用殺蟲國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)道。因此，本研究用上述材料研究其對(duì)花斑皮蠹幼蟲的活性，為大型真菌復(fù)合植物源誘殺劑的研發(fā)和花斑皮蠹的防治提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試蟲體花斑皮蠹幼蟲捕捉于遼寧省沈陽(yáng)市木材加工場(chǎng)，由中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所王劍鋒博士鑒定。以木料、麥麩為飼料飼養(yǎng)，溫度26～28 ℃，相對(duì)濕度70%～80%，自然光照。試驗(yàn)選取3～4齡幼蟲。

1.1.2供試菌種白毒鵝膏菌、白黃蓋鵝膏菌、紅網(wǎng)牛肝菌，采自遼寧省本溪市五女山、沈陽(yáng)市棋盤山風(fēng)景區(qū)、鞍山市千山風(fēng)景區(qū)。參照相關(guān)資料[2-3]，經(jīng)遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所劉俊杰研究員鑒定。

1.1.3供試植物馬尾松（Pinus massoniana Lamb.）、魚腥草（Houttuynia cordata Thunb.）、茉莉花[Jasminum sambac （L.） Ait]、煙草（Nicotiana tabacum L.）、側(cè)柏[Platy cladusorentalis （L.） Franco]，購(gòu)自國(guó)大藥房中藥店，分別將上述植物材料洗凈，放入烘箱中于50 ℃烘干，用電動(dòng)粉碎機(jī)粉碎，過(guò)40目篩后密封備用。

1.1.4試驗(yàn)儀器與設(shè)備FA-2004精密電子天平，LDZX-75KBS立式壓力蒸汽滅菌器，PRX-205B智能人工氣候箱，SW-CJ-2F（D）型醫(yī)用凈化工作臺(tái)，JY99-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，GL-161X箱式高速冷凍離心機(jī)，BS-1EH數(shù)顯振蕩培養(yǎng)箱，F(xiàn)160電動(dòng)粉碎機(jī)，R-215旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，DHG-9146A鼓風(fēng)干燥箱。

1.2方法

1.2.1毒素粗品的制備將采集的3種大型真菌的子實(shí)體分別進(jìn)行固體菌種擴(kuò)繁，接種于PDA液體培養(yǎng)基中，于26 ℃液體發(fā)酵搖床上培養(yǎng)7 d，再進(jìn)行超聲波細(xì)胞破碎、離心，取上清液，進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，濃縮液經(jīng)40 ℃恒溫干燥，得毒素粗品[4-6]。毒素粗品分別溶解于不同體積的無(wú)離子水中，用超聲波破碎，再3 000 r/min離心制成濃度為2%、5%、8%、10%、12%的上清液。

1.2.2植物提取物的制備用電子天平分別稱取植物干粉各30 g，加入無(wú)水乙醇120 mL，25 ℃下120 r/min振蕩培養(yǎng)24 h，過(guò)濾，無(wú)水乙醇定容至100 mL，所得即為濃度為 0.3 g/mL的提取液（1 mL含有0.3 g植物干粉粗提物）。

1.2.3植物提取物對(duì)花斑皮蠹幼蟲的引誘性篩選引誘試驗(yàn)采用濾紙藥膜法[7]。將直徑為9 cm的培養(yǎng)皿洗凈、烘干，把直徑為9 cm的圓形濾紙對(duì)半剪開，其中一半在0.3 g/mL植物提取液中浸漬5 min，另一半在無(wú)水乙醇中浸漬5 min。待乙醇自然揮發(fā)后，用透明膠帶將對(duì)應(yīng)的兩半處理過(guò)的濾紙粘在一起，用固體膠將粘貼后的濾紙固定在培養(yǎng)皿底部，接入花斑皮蠢4齡幼蟲20頭/皿，使其自然分散，放入木料、麥麩正常飼養(yǎng)，蓋上皿蓋，放入26～28 ℃、相對(duì)濕度70%～80%、無(wú)光照的培養(yǎng)箱中。設(shè)A1（側(cè)柏）、A2（煙草）、A3（馬尾松）、A4（魚腥草）、A5（茉莉花）組；另取直徑為9 cm的培養(yǎng)皿，其中只放入木料、麥麩作為空白對(duì)照（A0）組；接蟲后每12 h檢查1次，2 d后每24 h檢查1次兩半濾紙上的幼蟲分布情況。

1.2.4真菌毒素粗品對(duì)花斑皮蠹幼蟲的毒性篩選取10%上清液與木料、麥麩按1 ∶5的比例混合分布于直徑為 9 cm 的培養(yǎng)皿內(nèi)，接入花斑皮蠢4齡幼蟲20頭/皿，使其自然分散，蓋上皿蓋，試驗(yàn)條件同“1.2.3”節(jié)。設(shè)B1（白毒鵝膏菌）、B2（白黃蓋鵝膏菌）、B3（紅網(wǎng)牛肝菌）組；另取直徑為 9 cm的培養(yǎng)皿，其中只放入木料、麥麩作為空白對(duì)照（B0）組；觀察花斑皮蠹幼蟲生長(zhǎng)情況，5 d后記錄死亡數(shù)。

1.2.5不同濃度的白毒鵝膏菌復(fù)合煙草毒素粗品誘殺效應(yīng)的測(cè)定將篩選出的0.3 g/mL煙草提取液分別與2%、5%、8%、10%、12%白毒鵝膏菌上清液混合，與木料、麥麩混合，并分別取20頭花斑皮蠹幼蟲放入直徑為9 cm的培養(yǎng)皿中，試驗(yàn)條件同“1.2.3”節(jié)。設(shè)C1（2%）、C2（5%）、C3（8%）、C4（10%）、C5（12%）組；另取直徑為9 cm的培養(yǎng)皿，其中只放入木料、麥麩作為空白對(duì)照（C0）組；觀察花斑皮蠹幼蟲存活情況，5 d后記錄誘殺數(shù)。

1.2.6數(shù)據(jù)處理 （1）引誘率計(jì)算。引誘率=（對(duì)照邊蟲數(shù)-處理邊蟲數(shù)）/對(duì)照邊蟲數(shù)×100%；平均引誘率=同一引誘材料各次檢查時(shí)的引誘率之和/檢查次數(shù)。（2）死亡率計(jì)算。死亡率=死亡蟲數(shù)/總蟲數(shù)×100%；平均死亡率=同一觸殺材料各次檢查時(shí)的死亡率之和/檢查次數(shù)；校正死亡率=（處理組死亡率-對(duì)照組死亡率）/（1-對(duì)照組死亡率）×100%。（3）誘殺率計(jì)算。誘殺率=（引誘處理邊死亡蟲數(shù)/總蟲數(shù)）×100%。（4）統(tǒng)計(jì)分析。采用DPS 2000軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行LSD分析。

2結(jié)果與分析

2.1植物提取物粗品對(duì)花斑皮蠹幼蟲的引誘性篩選

由表1可知，5種植物的提取液對(duì)花斑皮蠢幼蟲均具有一定的引誘作用，處理3 d后引誘效果均有明顯的下降趨勢(shì)。其中，煙草的提取液對(duì)幼蟲的引誘作用最強(qiáng)，煙草提取液處理后3 d內(nèi)引誘率一直保持在75%以上，4 d內(nèi)保持在40%以上。魚腥草提取液在處理后2 d內(nèi)引誘率也在80%以上，但隨后急劇下降。茉莉花提取液在處理后2 d內(nèi)引誘率在70%以上，但3 d后迅速降到30%以下。側(cè)柏和馬尾松的提取液表現(xiàn)出的引誘活性較差，除馬尾松提取液在12 h的引誘率達(dá)到70%以上外，其余均在65%以下。表15種植物粗品毒效試驗(yàn)中花斑皮蠹幼蟲的引誘情況

2.2真菌毒素粗品對(duì)花斑皮蠹幼蟲的毒性篩選

由表2可知，在大型真菌毒素粗品的毒性篩選試驗(yàn)中，白毒鵝膏菌毒素粗品對(duì)花斑皮蠹幼蟲有明顯的致死效應(yīng)。此外，白黃蓋鵝膏菌和紅網(wǎng)牛肝菌也表現(xiàn)出輕微的毒性，但效率較低，致死效應(yīng)重復(fù)性較差，因此筆者只對(duì)致死效應(yīng)最好的白毒鵝膏菌進(jìn)行研究。

2.3白毒鵝膏菌煙草復(fù)合粗品對(duì)花斑皮蠹幼蟲誘殺效應(yīng)的測(cè)定

由表3可知，在不同濃度的白毒鵝膏菌復(fù)合煙草毒素粗品對(duì)花斑皮蠹幼蟲的毒效試驗(yàn)中，當(dāng)煙草粗品濃度一定時(shí)，隨著白毒鵝膏菌毒素粗品濃度的增大，對(duì)花斑皮囊幼蟲的誘殺效果越來(lái)越明顯，當(dāng)濃度達(dá)到12%時(shí)，平均誘殺率達(dá)到了79.25%，效果顯著。

3結(jié)論與討論

大型真菌殺蟲劑和植物源殺蟲劑由于其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，在害蟲防治上越來(lái)越受關(guān)注，其誘殺效率高，對(duì)人畜無(wú)害，無(wú)藥物殘留，不污染環(huán)境。用植物提取物將花斑皮蠹引誘到有毒蕈粗品的場(chǎng)所，使花斑皮蠹接觸或食用致死，能達(dá)到以菌治蟲的目的[8-9]。有研究表明，白毒鵝膏菌毒素粗品對(duì)花斑皮蠹幼蟲的毒殺效果明顯，與0.3 g/mL煙草毒素粗品聯(lián)合使用且濃度達(dá)到12%時(shí)，平均誘殺率達(dá)到79.25%，是一種誘殺效果較理想的生物源殺蟲劑，具有廣闊的前景和利用空間，探索最佳誘殺蟲模式是降低生產(chǎn)成本、保障農(nóng)業(yè)發(fā)展的重要措施。

今后還應(yīng)該深入研究不同使用方法和不同發(fā)育階段的生物活性等方面，為大型真菌復(fù)合植物源誘殺劑的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]鄧天福，王霞.兩種防蛀劑對(duì)花斑皮蠹的熏蒸活性研究[J]. 河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2013，6（6）：18-20.

[2]卯曉嵐.中國(guó)大型真菌[M]. 鄭州：河南科學(xué)技術(shù)出版社，2000：1-17.

[3]圖力古爾，包海鷹，李玉. 中國(guó)毒蘑菇名錄[J]. 菌物學(xué)報(bào)，2014（3）：517-548.

[4]張揚(yáng)，趙陽(yáng)，范克勝，等. 紅絨蓋牛肝菌發(fā)酵培養(yǎng)基篩選及液體培養(yǎng)條件[J]. 林業(yè)科技開發(fā)，2013，27（4）：111-114.

[5]陳琳，孟美嬌，楊紹斌，等. 豹斑毒鵝膏菌液體培養(yǎng)及產(chǎn)物毒性的初步研究[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（10）：93-96.

[6]汪夢(mèng)筱，王偉，汪維云.羊肚菌液體深層發(fā)酵工藝優(yōu)化研究[J]. 包裝與食品機(jī)械，2014（1）：15-18.

[7]毛寧，丁珊珊，余宗鐘.裸蓋菇L-001菌株液體培養(yǎng)及其產(chǎn)毒素初探[J]. 福建師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2009，25（6）：77-81.

[8]王霞，范腕腕，鄧天福.四種植物精油對(duì)花斑皮蠹的熏蒸作用[J]. 河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2013，3（3）：75-78.

[9]鄧天福，姜雪曉.大蒜生姜提取物對(duì)花斑皮蠹幼蟲的驅(qū)避作用[J]. 河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2011，39（1）：47-50.王豐，郭道友，范余娟. 毒蠅鵝膏菌有效成分的提取工藝及抗菌特性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（9）：177-179.