頂空氣相色譜法測(cè)定交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中異丙醇的殘留量

李紅梅，張素文，朱肖杰，郈秀菊，孟建文，王曉晨，朱小敏

(山東省藥學(xué)科學(xué)院， 山東省醫(yī)用高分子材料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250101)

1 引 言

透明質(zhì)酸(HA)是由D-葡萄糖醛酸和N-乙?；?D-氨基葡糖雙糖單元重復(fù)連接組成的一種鏈狀聚陰離子粘多糖[1]，是人和動(dòng)物皮膚、玻璃體、關(guān)節(jié)滑液和軟骨組織的重要成分。高純度的注射級(jí)HA已被制成注射劑，用于眼科手術(shù)、骨科手術(shù)、預(yù)防術(shù)后粘連、治療骨性關(guān)節(jié)炎和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[2]。此外，也被用于面部注射美容，改進(jìn)皮膚外觀和結(jié)構(gòu)、減輕皺紋、阻止皮膚衰老或改進(jìn)唇部形狀[3-4]。HA具有良好的生物相容性，極少產(chǎn)生副作用，但由于它在體內(nèi)降解太快，難以維持理想效果。近年來(lái)，透明質(zhì)酸經(jīng)修飾或交聯(lián)后獲得了一些毒性小、生物相容性好的抗降解產(chǎn)物，陸續(xù)被開(kāi)發(fā)為多種面部注射美容產(chǎn)品[5]。目前，國(guó)外最熱銷(xiāo)的美容產(chǎn)品PERLAN和RESTYLANE(瑞典Q-MED公司)即屬該類(lèi)交聯(lián)產(chǎn)品；國(guó)內(nèi)近幾年已有同類(lèi)產(chǎn)品生產(chǎn)和上市，如華熙福瑞達(dá)生物醫(yī)藥有限公司的潤(rùn)百顏，上海其勝生物制劑有限公司的海薇，北京愛(ài)美客生物科技有限公司的逸美，科妍生物科技股份有限公司(臺(tái)灣)的水微晶等。

我們研制的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠主要用于注射美容，因在制備過(guò)程中使用了異丙醇。故應(yīng)嚴(yán)格控制異丙醇的殘留量。本試驗(yàn)采用氣相色譜法測(cè)定交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中異丙醇的殘留量[6]。

2 儀器與試藥

氣相色譜儀(檢測(cè)器：Agilent6897，頂空自動(dòng)進(jìn)樣裝置：Agilent7697A，美國(guó)Agilent)；氫火焰離子化檢測(cè)器；電子分析天平(上海精密電子分析天平JA003N)。

異丙醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，≥99.7%)；交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠(自制，批號(hào)：20140806、20140809、20140811)。

3 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

3.1 色譜條件

安捷倫DB-624(30 mX0.535 mmX3.0 μm)毛細(xì)管柱；進(jìn)樣口溫度180℃，分流比10：1；檢測(cè)器溫度為180℃；載氣為氮?dú)猓魉贋?.0 mL/min，氫氣流速為2.0 mL/min；柱溫采用程序升溫，初始溫度為50℃，保持1 min，以10℃/min升溫至160℃，后運(yùn)行溫度：50℃，保持1min。頂空自動(dòng)進(jìn)樣裝置，加熱箱溫度為80℃，定量環(huán)溫度為90℃，傳輸線溫度為100℃；樣品平衡時(shí)間為30 min。進(jìn)樣量為1 ml。色譜圖見(jiàn)圖1(保留時(shí)間Rt=6.212)。

圖1異丙醇的色譜圖

Fig1Chromatographyofisopropanol

3.2 對(duì)照品溶液的制備

取色譜純異丙醇適量置于容量瓶中，精密稱(chēng)定，用純化水稀釋至刻度，搖勻，制成每1 ml含10.83 mg的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

3.3 線性與范圍

精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1 ml于100、50、25 ml容量瓶中，加水至刻度，作為2、3、4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液2 ml于25 ml容量瓶中，加水至刻度，作為5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)溶液；于2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)溶液中精密量取10 ml于100 ml容量瓶中，加水至刻度，作為1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)溶液。各精密量取4 ml分別加入10 ml的頂空瓶中，密封，放入頂空自動(dòng)進(jìn)樣裝置中，按3.1條件進(jìn)樣，記錄峰面積。以異丙醇峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，求得線性回歸方程為：

A=1701.2C+20.101

R=0.9990

由上可知，濃度在0.01083～0.8664 μg/mL范圍內(nèi)與各自峰面積線性關(guān)系良好。

3.4 精密度試驗(yàn)

取3號(hào)異丙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，按3.1條件連續(xù)進(jìn)針6次，測(cè)得異丙醇的峰面積的RSD為 2.9% 。精密度良好。

3.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取3號(hào)異丙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，按3.1條件于0、2、4、6、8 h進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得異丙醇的峰面積的RSD為3.0%。

3.6 最小檢測(cè)限測(cè)定

取3.3項(xiàng)下1號(hào)異丙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行稀釋?zhuān)恳淮蜗♂專(zhuān)舆M(jìn)樣，要求：S/N≥3，測(cè)得異丙醇的最小檢測(cè)限為0.060μg/mL。

3.7 回收率試驗(yàn)

稱(chēng)取交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠9份，每份2 g，精密稱(chēng)定，加入到10 ml頂空瓶中，每三份分別加入適量濃度的異丙醇溶液2 ml，搖勻，密封，放入頂空自動(dòng)進(jìn)樣裝置中，按3.1條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算異丙醇的平均回收率 99.1%，RSD為1.2%。

3.8 樣品殘留量測(cè)定

取各批號(hào)交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠2 g ，精密稱(chēng)定，置10 ml頂空瓶中，準(zhǔn)確加人純化水2.0 ml，混合均勻。另精密量取異丙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液各4.0 ml，置10 ml頂空瓶中，搖勻，密封，放入頂空自動(dòng)進(jìn)樣裝置中，按3.1條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積；按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的異丙醇?xì)埩魹榉謩e為24.49、24.12、25.08 μg/g。色譜圖見(jiàn)圖2。

圖2樣品的色譜圖

Fig2Chromatographyofsample

4 討論

異丙醇沸點(diǎn)為82℃，易溶于水，揮發(fā)性好，也容易氣化，可直接采用頂空氣相色譜法進(jìn)行測(cè)定。潘華先等[7]采用氣相色譜法測(cè)定醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠中乙醇?xì)埩袅浚瑯悠分苽渲忻芊夂蠓湃?0℃恒溫干燥箱中平衡20 min，直接進(jìn)樣?！禮Y0308-2004 醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉凝膠》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中樣品制備也是密封后放入80℃恒溫干燥箱中平衡20 min，直接進(jìn)樣。參照乙醇?xì)埩袅恐禐閼?yīng)不大于400 μg/g的要求[8]，將交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中異丙醇的殘留量定為其值應(yīng)不大于400 μg/g。

本試驗(yàn)建立了一種簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中異丙醇?xì)埩袅康臏y(cè)定方法，精密度在3.0%以下，最小檢測(cè)限為0.060μg/mL，濃度在0.01083～0.8664 μg/mL范圍內(nèi)，與各自峰面積線性關(guān)系良好。測(cè)定的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中異丙醇?xì)埩袅糠弦蟆?/p>

綜上所述，通過(guò)頂空氣相色譜分析法，在本研究中確定的色譜條件下，可以快速、準(zhǔn)確地分析交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中異丙醇的殘留量。