參地顆粒對(duì)慢性腎炎脾腎虧虛證患者血清MMP-9/TIMP-1的干預(yù)作用

王億平，　唐錦囊，　王 東，　茅燕萍，　金 華，　王立媛

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，安徽　合肥　230031）

參地顆粒對(duì)慢性腎炎脾腎虧虛證患者血清MMP-9/TIMP-1的干預(yù)作用

王億平，唐錦囊，王 東，茅燕萍，金 華，王立媛

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，安徽合肥230031）

目的 觀察參地顆粒（人參，茯苓，熟地黃，五味子，桑螵蛸，川芎）對(duì)慢性腎小球腎炎脾腎虧虛證患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）/金屬蛋白酶組織抑制劑-1（TIMP-1）的干預(yù)作用。方法 64例慢性腎小球腎炎脾腎虧虛證患者隨機(jī)分為對(duì)照組（31例）和治療組（33例），另選取20名健康體檢者作為正常組。對(duì)照組服用貝那普利片，治療組服用參地顆粒，療程8周。檢測(cè)臨床療效、治療前后24 h尿蛋白定量及血清MMP-9/TIMP-1的水平。結(jié)果治療組臨床疾病總有效率和中醫(yī)證候療效總有效率分別為87.88%和90.91%，優(yōu)于對(duì)照組的74.19%和67.74%（P＜0.05）。治療組和對(duì)照組患者治療前的血清MMP-9、TIMP-1水平均顯著高于正常組，而MMP-9/TIMP-1顯著低于正常組（P＜0.05），治療后兩組血清MMP-9水平較治療前均有顯著升高，治療組的血清TIMP-1水平較治療前顯著降低，MMP-9/TIMP-1較治療前顯著升高（P＜0.05），而對(duì)照組的TIMP-1、MMP-9/TIMP-1治療前后變化不顯著（P＞0.05）。兩組治療后24 h尿蛋白定量較治療前顯著降低，且治療組的下降幅度大于對(duì)照組（P＜0.05）。結(jié)論 參地顆?？梢杂行Ц纳破⒛I虧虛證患者臨床癥狀，減少尿蛋白定量，其機(jī)理可能與調(diào)節(jié)血清MMP-9和TIMP-1水平有關(guān)。

慢性腎炎；脾腎虧虛證；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；金屬蛋白酶組織抑制劑-1；參地顆粒

慢性腎小球腎炎（chronic g1omeru1onephritis，CGN）簡(jiǎn)稱慢性腎炎，是我國(guó)導(dǎo)致慢性腎衰竭（chronic rena1 fai1ure，CRF）的首位病因，蛋白尿是慢性腎小球腎炎病情進(jìn)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，降低蛋白尿?qū)τ谧柚够蜓泳徛阅I小球腎炎的病程進(jìn)展具有重要意義［1-2］。有證據(jù)顯示，腎小球內(nèi)血清基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）/組織金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMPs）比值失衡是導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)（extrace11u1armatrix，ECM）過(guò)度表達(dá)與沉積、腎小球硬化的重要因素［3-4］。本研究探討慢性腎小球腎炎脾腎虧虛證患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、金屬蛋白酶組織抑制劑-1（TIMP-1）水平變化及參地顆粒對(duì)其干預(yù)作用。

1　材料與方法

1.1病例選擇標(biāo)準(zhǔn)

1.1.1西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照第7版《內(nèi)科學(xué)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］。

1.1.2中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn) 參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》［6］制定。主癥：神疲乏力，腰酸背痛，納呆，浮腫，胃脘不適。次癥：大便溏泄，小便頻數(shù)，夜尿增多，舌淡邊有齒痕，脈沉細(xì)。具備主癥大于3項(xiàng)，或主癥2項(xiàng)、次癥大于2項(xiàng)者，辨證為脾腎虧虛。

1.1.3中醫(yī)癥狀量化評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》［6］的標(biāo)準(zhǔn)，分輕度、中度、重度，分別計(jì)2分、4分、6分。

1.1.4病例納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合慢性腎小球腎炎西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)和中醫(yī)脾腎虧虛證辨證標(biāo)準(zhǔn)；②慢性腎臟病Ⅰ期或Ⅱ期；③24 h尿蛋白定量小于3 g；④年齡在18～65歲之間；⑤自愿參加臨床試驗(yàn)，并簽署知情同意書。

1.1.5病例排除標(biāo)準(zhǔn) ①不符合納入病例標(biāo)準(zhǔn)；②口服細(xì)胞毒類藥物或糖皮質(zhì)激素；③已妊娠或哺乳的婦女；④合并嚴(yán)重的肝、心、腦等臟器的原發(fā)性疾病者；⑤不按常規(guī)服藥，影響療效判定的。

1.2研究對(duì)象及分組 70例慢性腎小球腎炎脾腎虧虛證患者皆為我科2012年1月—2012年12月住院或門診病人，按其入院先后順序隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組各35例，治療過(guò)程中失訪病例6例（治療組2例，對(duì)照組4例），最后實(shí)際完成病例64例（治療組33例，對(duì)照組31例）。治療組男15例，女18例，年齡17～64歲，平均（35.97±12.03）歲，病程6個(gè)月～5.2年，平均（2.72±1.25）年，其中合并血壓升高22例。對(duì)照組男17例，女14例，年齡18～63歲，平均（36.23±12.60）歲，病程4個(gè)月～4.5年，平均（2.82±1.16）

年，其中合并血壓升高24例。兩組患者基本情況經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無(wú)差別（P＞0.05），具有可比性。另選取20例同期來(lái)我院體檢正常者作為正常對(duì)照組，檢測(cè)其血清MMP-9和血清TIMP-1的水平。

1.3治療方法 治療組口服參地顆粒（院內(nèi)制劑，安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院研制），每次1袋（10 g，含生藥34 g），每日3次，溫水沖服。對(duì)照組服用貝那普利片（北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20030514），每次10 mg，每日1次，兩組療程均為8周。對(duì)合并癥的治療注意保持合并用藥種類與劑量的均衡，不使用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI）、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB）、利尿劑等對(duì)療效判定可能產(chǎn)生影響的藥物。

1.4觀察指標(biāo) 治療前后患者24 h尿蛋白定量、中醫(yī)證候積分以及血清MMP-9、TIMP-1、MMP-9/ TIMP變化情況，并與正常組比較，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法，主要試劑MMP-9及TIMP-1均來(lái)源于上海源葉生物技術(shù)有限公司，批號(hào)分別為H34376、H32667。

1.5療效判定標(biāo)準(zhǔn) 依據(jù)《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》制定標(biāo)準(zhǔn)判定［6］。臨床療效判定分臨床控制、顯效、有效和無(wú)效。中醫(yī)證候療效判定標(biāo)準(zhǔn)分為臨床痊愈、顯效、有效和無(wú)效。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，治療前后采用配對(duì)t檢驗(yàn)，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和單因素方差分析，等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05為差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組患者臨床疾病療效比較 治療組臨床疾病總有效率為87.88%，優(yōu)于對(duì)照組74.19%，兩組臨床疾病療效有顯著性差異（P＜0.05）。見表1。

表1　兩組患者臨床疾病療效比較［例（%）］Tab.1 Com parison of therapeutic effect between the two groups［n（%）］

2.2兩組患者中醫(yī)證候療效比較 治療組中醫(yī)證候總有效率90.91%，優(yōu)于對(duì)照組67.74%，兩組中醫(yī)證候療效有顯著性差異（P＜0.05）。見表2。

表2　兩組患者中醫(yī)證候療效比較［例（%）］Tab.2 Comparison of TCM syndrome regu Iation between the two groups［n（%）］

2.3各組患者治療前后MMP-9、TIMP-1、MMP-9/ TIMP水平比較 治療組和對(duì)照組患者治療前的血清MMP-9、TIMP-1水平均顯著高于正常組，而MMP-9/TIMP-1顯著低于正常組（P＜0.05），治療后兩組血清MMP-9水平較治療前均有顯著升高，治療組的血清TIMP-1水平較治療前顯著降低，MMP-9/TIMP-1較治療前顯著升高（P＜0.05），而對(duì)照組的TIMP-1、MMP-9/TIMP-1治療前后變化不顯著（P＞0.05）。見表3。

表3　各組患者治療前后MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP水平比較（±s）Tab.3 The IeveIs of MMP-9，TIMP-1，MMP-9/TIMP before and after the treatment（±s）

表3　各組患者治療前后MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP水平比較（±s）Tab.3 The IeveIs of MMP-9，TIMP-1，MMP-9/TIMP before and after the treatment（±s）

注：與正常組比較，▲P＜0.05；與同期對(duì)照組比較，△P＜0.05；與本組治療前比較，*P＜0.05

組別例數(shù)MMP-9/（ng·mL-1）治療前治療后TIMP-1/（ng·m L-1）治療前治療后（MMP-9/TIMP）治療前治療后正常組20 18.98±12.94——58.74±3.68——0.91±0.19——對(duì)照組31 52.63±12.56▲61.07±11.72*121.65±7.98▲125.12±7.08 0.52±0.15 0.53±0.12治療組33 54.52±10.59▲85.86±10.71△**118.83±5.84▲96.09±8.03△*0.48±0.12▲0.88±0.11△*

2.4兩組患者治療前后24 h尿蛋白定量比較 治療組和對(duì)照組的24 h尿蛋白定量在治療4周后與治療前相比有顯著降低，治療8周后降低更為顯著；且治療組8周后的24 h尿蛋白定量較同期對(duì)照組相比降低更為顯著（P＜0.05）。見表4。

表4　兩組患者治療前后24 h尿蛋白定量比較（g/24 h，±s）Tab.4 24 h-urine protein IeveIs in two groups before andafter treatment（±s）

表4　兩組患者治療前后24 h尿蛋白定量比較（g/24 h，±s）Tab.4 24 h-urine protein IeveIs in two groups before andafter treatment（±s）

注：與同期對(duì)照組比較，△P＜0.05；與本組治療前比較，#P＜0.05

組別例數(shù)治療前治療后4周治療后8周對(duì)照組31 1.77±0.63 1.50±0.62#1.26±0.54#治療組33 1.71±0.47 1.35±0.42#1.02±0.38△#

2.5兩組患者治療前后BUN、Scr、eGFR水平比較 治療組和對(duì)照組治療前BUN、Scr、eGFR水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），治療后BUN、Scr、eGFR水平與治療前比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表5。

3　討論

慢性腎小球腎炎的病變部位主要在脾腎兩臟，基本病機(jī)為脾腎虧虛，蛋白尿的生成與脾腎兩臟虛損密不可分。我們?cè)诶^承新安醫(yī)學(xué)理論基礎(chǔ)上不斷進(jìn)行科學(xué)實(shí)踐，發(fā)現(xiàn)清朝新安醫(yī)學(xué)名醫(yī)程林刪定的《圣濟(jì)總錄纂要·卷十三·虛勞門》所載人參湯秉承新安醫(yī)學(xué)“立法重溫補(bǔ)，著眼在腎”的學(xué)術(shù)特點(diǎn)，在健脾益腎的同時(shí)，不忘固攝精微，與我們認(rèn)為慢性腎小球腎炎病機(jī)特點(diǎn)為脾腎虧虛、精微下注，治療重在健脾益腎、固攝精微的觀點(diǎn)一致。在此理論指導(dǎo)下，將人參湯制成參地顆粒，并成功應(yīng)用于臨床治療慢性腎小球腎炎脾腎虧虛證患者，取得良好的臨床療效［7-9］。參地顆粒以人參為君藥，大補(bǔ)元?dú)狻⒐虜z精微；臣藥為茯苓、熟地黃，健脾益腎；五味子、桑螵蛸為佐藥，固攝精微；川芎亦為佐藥活血化瘀。諸藥合用，起到健脾益腎、固攝精微的功效。

表5　兩組患者治療前后BUN、Scr、eGFR水平比較（±s）Tab.5 LeveIs of BUN，Scr，and eGFR in two groups before and after treatment（±s）

表5　兩組患者治療前后BUN、Scr、eGFR水平比較（±s）Tab.5 LeveIs of BUN，Scr，and eGFR in two groups before and after treatment（±s）

注：與同期對(duì)照組比較，△P＞0.05；與本組治療前比較，△P＞0.05

組別例數(shù)BUN/（mmo1·mL-1）治療前治療后Scr/（μmo1·L-1）治療前治療后eGFR（mL·min-1）治療前治療后對(duì)照組31 5.51±0.98 5.12±1.08 82.63±12.56 80.07±11.72 78.32±6.82 76.45±7.51治療組33 5.09±1.84△4.83±1.03△83.52±10.59△82.86±10.71△76.84±6.51△77.49±6.42△

MMPs和TIMPs的調(diào)節(jié)對(duì)維持腎小球細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）生成和降解的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要［3］。MMP-9是明膠酶類中的一種，可以降解多種基質(zhì)成分，屬于MMPs家族中重要成員之一。明膠酶是迄今為止發(fā)現(xiàn)在腎臟中水解活性最強(qiáng)的基質(zhì)金屬蛋白酶，它直接參與腎臟發(fā)育、細(xì)胞浸潤(rùn)、腎小球硬化和間質(zhì)纖維化等多種病理過(guò)程［10-11］。TIMP-1作為TIMP家族中的一員，可以抑制MMP-9活性，在ECM的沉積降解平衡中起關(guān)鍵作用。TIMP-1通過(guò)抑制ECM的降解過(guò)程導(dǎo)致ECM積聚，在許多腎臟纖維化疾病中其表達(dá)顯著增高，因此可以認(rèn)為TIMP-1是參與腎小球硬化及間質(zhì)纖維化的主要降解酶［12］。多種腎小球腎炎模型及臨床研究發(fā)現(xiàn)，腎組織TIMP-1比正常對(duì)照組升高，提示TIMP-1增多參與了ECM成分的積聚［13］。有研究表明［13-14］TIMP-1在腎衰竭組、IgA腎病Lee分級(jí)重度病理改變組及中度病理改變組血清中水平較正常組明顯增高，且隨病變加重其水平呈遞增趨勢(shì)，提示隨著系膜基質(zhì)及系膜細(xì)胞的增多、疾病活動(dòng)程度的加重，TIMP-1在血清中的水平相應(yīng)增加。MMPs與TIMPs之間平衡失調(diào)，如MMP-9/TIMP-1比值降低，提示降解ECM能力減弱，將導(dǎo)致ECM增殖和腎小球硬化［15-16］。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，慢性腎小球腎炎脾腎虧虛證患者血清MMP-9、TIMP-1水平顯著升高，MMP-9/ TIMP-1比值顯著降低，提示ECM降解能力下降、合成能力增加。參地顆?？捎行Ц纳破⒛I虧虛證患者臨床癥狀，減少尿蛋白定量，其機(jī)理可能與顯著提升患者血清MMP-9水平，降低血清TIMP-1水平，從而顯著升高M(jìn)MP-9/TIMP-1比值，促進(jìn)ECM降解，降低腎臟ECM水平有關(guān)。

［1］Ding S Y，Zheng P D，He L Q，et al.The research on xiaochaihu decoction improving the inf1ammation of chronic g1omeru1onephritis patients and re1ieving the proteinuria［J］.Chin J Integr Tradit Chin WestMed，2013，33（1）：21-26.

［2］Qiu H，F(xiàn)u P，F(xiàn)an W，et al.Treatment of primary chronic g1omeru1onephritiswith rehmannia g1utinosa acteosides in combination with the Angiotensin receptor b1ocker irbesartan：a randomized contro11ed tria1［J］.Phytother Res，2014，28（1）：132-136.

［3］Hu P，Wang J，Zhao X Q，et al.Overexpressed C-type natriuretic peptide serves as an ear1y compensatory response to counteract extrace11u1ar matrix remode1ing in uni1atera1 uretera1 obstruction rats［J］.Mol Biol Rep，2013，40（2）：1429-1441.

［4］李小會(huì)，趙明君，雷根平，等.通絡(luò)益腎方對(duì)高糖培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細(xì)胞MMP-9/TIMP-1和TGF-β1表達(dá)的影響［J］.中成藥，2013，35（1）：11-14.

［5］陸再英，鐘南山.內(nèi)科學(xué)［M］.7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：508-511.

［6］鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則（試行）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2002：157-160.

［7］茅燕萍，王億平，牛 婧，等.參地顆粒對(duì)慢性腎炎脾腎虧虛證患者血清肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1的影響［J］.新中醫(yī)，2012，44（5）：46-48.

［8］王億平，史良平，王 東，等.參地顆粒治療慢性腎炎脾腎虧虛證臨床研究［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，30（4）：17-20.

［9］王億平，王 東，呂 勇，等.人參湯治療慢性腎炎脾腎虧虛證臨床研究［C］//第二屆（第21次）中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)腎病分會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集.2008.

［10］Zhao H，Dong Y，Tian X，etal.Matrixmeta11oproteinases contribute to kidney fibrosis in chronic kidney diseases［J］.World JNephrol，2013，2（3）：84-89.

［11］倪 晨，王貴均，王 倩，等.中藥對(duì)腎小球硬化大鼠MMP-9、TIMP-1及TGF-β1mRNA表達(dá)的影響［J］.環(huán)球中醫(yī)藥，2011，4（3）：193-196.

［12］Peng L，Yang J，Ning C，et al.Rhein inhibits integrin-1inked kinase expression and regu1ates matrix meta11oproteinase-9/tissue inhibitor ofmeta11oproteinase-1 ratio in high g1ucose-induced epithe1ia1-mesenchyma1 transition of rena1 tubu1ar ce11［J］.Biol Pharm Bull，2012，35（10）：1676-1685.

［13］張曉速，王 穎，常玲玲.TIMP-1水平在IgA腎病患者血清中的變化及意義［J］.中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2010，8（23）：163-164.

［14］師鎖柱，張雪光，陳香美.MMP-9/IgA和TIMP-1/IgA在IgA腎病患者腎組織中的共表達(dá)及意義［J］.軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，32（12）：1269-1273.

［15］Fu W，Wang Y，Jin Z，et al.Losartan a11eviates rena1 fibrosis by down-regu1ating HIF-1αand up-regu1ating MMP-9/TIMP-1 in ratswith 5/6 nephrectomy［J］.Ren Fail，2012，34（10）：1297-1304.

［16］Okada R，Kawai S，Naito M，et al.Matrixmeta11oproteinase-9 gene po1ymorphisms and chronic kidney disease［J］.Am J Nephrol，2012，36（5）：444-450.

Effect of Shendi Granu Ies on MMP-9/TIMP-1 in patientsw ith chronic gIomeru-Ionephritis of sp Ieen-kidney deficiency pattern

WANG Yi-ping， TANG Jin-nang， WANG Dong， MAO Yan-pin， JIN Hua， WAN Li-yuan
（The First Hospital Affiliated to Anhui University of TCM，Hefei230031，China）

chronic g1omeru1onephritis；sp1een-kidney deficiency pattern；matrixmeta11oproteinase-9（MMP-9）；tissue inhibitor ofmeta11oproteinase-1（TIMP-1）；Shendi Granu1es

R287

A

1001-1528（2015）01-0054-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.01.011

2014-01-12

安徽省高等學(xué)校省級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目（KJ2010A217）

王億平（1963—），男，教授，主任醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合治療腎臟病的研究。Te1：（0551）62850072，E-mai1：Wypwyp54@a1iyun.com