參地顆粒對慢性腎炎脾腎虧虛證患者血清MMP-9/TIMP-1的干預(yù)作用

王億平，　唐錦囊，　王 東，　茅燕萍，　金 華，　王立媛

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，安徽　合肥　230031）

參地顆粒對慢性腎炎脾腎虧虛證患者血清MMP-9/TIMP-1的干預(yù)作用

王億平，唐錦囊，王 東，茅燕萍，金 華，王立媛

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，安徽合肥230031）

目的 觀察參地顆粒（人參，茯苓，熟地黃，五味子，桑螵蛸，川芎）對慢性腎小球腎炎脾腎虧虛證患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）/金屬蛋白酶組織抑制劑-1（TIMP-1）的干預(yù)作用。方法 64例慢性腎小球腎炎脾腎虧虛證患者隨機分為對照組（31例）和治療組（33例），另選取20名健康體檢者作為正常組。對照組服用貝那普利片，治療組服用參地顆粒，療程8周。檢測臨床療效、治療前后24 h尿蛋白定量及血清MMP-9/TIMP-1的水平。結(jié)果治療組臨床疾病總有效率和中醫(yī)證候療效總有效率分別為87.88%和90.91%，優(yōu)于對照組的74.19%和67.74%（P＜0.05）。治療組和對照組患者治療前的血清MMP-9、TIMP-1水平均顯著高于正常組，而MMP-9/TIMP-1顯著低于正常組（P＜0.05），治療后兩組血清MMP-9水平較治療前均有顯著升高，治療組的血清TIMP-1水平較治療前顯著降低，MMP-9/TIMP-1較治療前顯著升高（P＜0.05），而對照組的TIMP-1、MMP-9/TIMP-1治療前后變化不顯著（P＞0.05）。兩組治療后24 h尿蛋白定量較治療前顯著降低，且治療組的下降幅度大于對照組（P＜0.05）。結(jié)論 參地顆?？梢杂行Ц纳破⒛I虧虛證患者臨床癥狀，減少尿蛋白定量，其機理可能與調(diào)節(jié)血清MMP-9和TIMP-1水平有關(guān)。

慢性腎炎；脾腎虧虛證；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；金屬蛋白酶組織抑制劑-1；參地顆粒

慢性腎小球腎炎（chronic g1omeru1onephritis，CGN）簡稱慢性腎炎，是我國導(dǎo)致慢性腎衰竭（chronic rena1 fai1ure，CRF）的首位病因，蛋白尿是慢性腎小球腎炎病情進展的獨立危險因素，降低蛋白尿?qū)τ谧柚够蜓泳徛阅I小球腎炎的病程進展具有重要意義［1-2］。有證據(jù)顯示，腎小球內(nèi)血清基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）/組織金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMPs）比值失衡是導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)（extrace11u1armatrix，ECM）過度表達與沉積、腎小球硬化的重要因素［3-4］。本研究探討慢性腎小球腎炎脾腎虧虛證患者血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、金屬蛋白酶組織抑制劑-1（TIMP-1）水平變化及參地顆粒對其干預(yù)作用。

1　材料與方法

1.1病例選擇標(biāo)準(zhǔn)

1.1.1西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照第7版《內(nèi)科學(xué)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］。

1.1.2中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn) 參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》［6］制定。主癥：神疲乏力，腰酸背痛，納呆，浮腫，胃脘不適。次癥：大便溏泄，小便頻數(shù)，夜尿增多，舌淡邊有齒痕，脈沉細(xì)。具備主癥大于3項，或主癥2項、次癥大于2項者，辨證為脾腎虧虛。

1.1.3中醫(yī)癥狀量化評分標(biāo)準(zhǔn) 參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》［6］的標(biāo)準(zhǔn)，分輕度、中度、重度，分別計2分、4分、6分。

1.1.4病例納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合慢性腎小球腎炎西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)和中醫(yī)脾腎虧虛證辨證標(biāo)準(zhǔn)；②慢性腎臟?、衿诨颌蚱冢虎?4 h尿蛋白定量小于3 g；④年齡在18～65歲之間；⑤自愿參加臨床試驗，并簽署知情同意書。

1.1.5病例排除標(biāo)準(zhǔn) ①不符合納入病例標(biāo)準(zhǔn)；②口服細(xì)胞毒類藥物或糖皮質(zhì)激素；③已妊娠或哺乳的婦女；④合并嚴(yán)重的肝、心、腦等臟器的原發(fā)性疾病者；⑤不按常規(guī)服藥，影響療效判定的。

1.2研究對象及分組 70例慢性腎小球腎炎脾腎虧虛證患者皆為我科2012年1月—2012年12月住院或門診病人，按其入院先后順序隨機分為治療組和對照組各35例，治療過程中失訪病例6例（治療組2例，對照組4例），最后實際完成病例64例（治療組33例，對照組31例）。治療組男15例，女18例，年齡17～64歲，平均（35.97±12.03）歲，病程6個月～5.2年，平均（2.72±1.25）年，其中合并血壓升高22例。對照組男17例，女14例，年齡18～63歲，平均（36.23±12.60）歲，病程4個月～4.5年，平均（2.82±1.16）

年，其中合并血壓升高24例。兩組患者基本情況經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理無差別（P＞0.05），具有可比性。另選取20例同期來我院體檢正常者作為正常對照組，檢測其血清MMP-9和血清TIMP-1的水平。

1.3治療方法 治療組口服參地顆粒（院內(nèi)制劑，安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院研制），每次1袋（10 g，含生藥34 g），每日3次，溫水沖服。對照組服用貝那普利片（北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H20030514），每次10 mg，每日1次，兩組療程均為8周。對合并癥的治療注意保持合并用藥種類與劑量的均衡，不使用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI）、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB）、利尿劑等對療效判定可能產(chǎn)生影響的藥物。

1.4觀察指標(biāo) 治療前后患者24 h尿蛋白定量、中醫(yī)證候積分以及血清MMP-9、TIMP-1、MMP-9/ TIMP變化情況，并與正常組比較，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法，主要試劑MMP-9及TIMP-1均來源于上海源葉生物技術(shù)有限公司，批號分別為H34376、H32667。

1.5療效判定標(biāo)準(zhǔn) 依據(jù)《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》制定標(biāo)準(zhǔn)判定［6］。臨床療效判定分臨床控制、顯效、有效和無效。中醫(yī)證候療效判定標(biāo)準(zhǔn)分為臨床痊愈、顯效、有效和無效。

1.6統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件包進行數(shù)據(jù)處理。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，治療前后采用配對t檢驗，組間比較采用獨立樣本t檢驗和單因素方差分析，等級資料采用秩和檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05為差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組患者臨床疾病療效比較 治療組臨床疾病總有效率為87.88%，優(yōu)于對照組74.19%，兩組臨床疾病療效有顯著性差異（P＜0.05）。見表1。

表1　兩組患者臨床疾病療效比較［例（%）］Tab.1 Com parison of therapeutic effect between the two groups［n（%）］

2.2兩組患者中醫(yī)證候療效比較 治療組中醫(yī)證候總有效率90.91%，優(yōu)于對照組67.74%，兩組中醫(yī)證候療效有顯著性差異（P＜0.05）。見表2。

表2　兩組患者中醫(yī)證候療效比較［例（%）］Tab.2 Comparison of TCM syndrome regu Iation between the two groups［n（%）］

2.3各組患者治療前后MMP-9、TIMP-1、MMP-9/ TIMP水平比較 治療組和對照組患者治療前的血清MMP-9、TIMP-1水平均顯著高于正常組，而MMP-9/TIMP-1顯著低于正常組（P＜0.05），治療后兩組血清MMP-9水平較治療前均有顯著升高，治療組的血清TIMP-1水平較治療前顯著降低，MMP-9/TIMP-1較治療前顯著升高（P＜0.05），而對照組的TIMP-1、MMP-9/TIMP-1治療前后變化不顯著（P＞0.05）。見表3。

表3　各組患者治療前后MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP水平比較（±s）Tab.3 The IeveIs of MMP-9，TIMP-1，MMP-9/TIMP before and after the treatment（±s）

表3　各組患者治療前后MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP水平比較（±s）Tab.3 The IeveIs of MMP-9，TIMP-1，MMP-9/TIMP before and after the treatment（±s）

注：與正常組比較，▲P＜0.05；與同期對照組比較，△P＜0.05；與本組治療前比較，*P＜0.05

組別例數(shù)MMP-9/（ng·mL-1）治療前治療后TIMP-1/（ng·m L-1）治療前治療后（MMP-9/TIMP）治療前治療后正常組20 18.98±12.94——58.74±3.68——0.91±0.19——對照組31 52.63±12.56▲61.07±11.72*121.65±7.98▲125.12±7.08 0.52±0.15 0.53±0.12治療組33 54.52±10.59▲85.86±10.71△**118.83±5.84▲96.09±8.03△*0.48±0.12▲0.88±0.11△*

2.4兩組患者治療前后24 h尿蛋白定量比較 治療組和對照組的24 h尿蛋白定量在治療4周后與治療前相比有顯著降低，治療8周后降低更為顯著；且治療組8周后的24 h尿蛋白定量較同期對照組相比降低更為顯著（P＜0.05）。見表4。

表4　兩組患者治療前后24 h尿蛋白定量比較（g/24 h，±s）Tab.4 24 h-urine protein IeveIs in two groups before andafter treatment（±s）

表4　兩組患者治療前后24 h尿蛋白定量比較（g/24 h，±s）Tab.4 24 h-urine protein IeveIs in two groups before andafter treatment（±s）

注：與同期對照組比較，△P＜0.05；與本組治療前比較，#P＜0.05

組別例數(shù)治療前治療后4周治療后8周對照組31 1.77±0.63 1.50±0.62#1.26±0.54#治療組33 1.71±0.47 1.35±0.42#1.02±0.38△#

2.5兩組患者治療前后BUN、Scr、eGFR水平比較 治療組和對照組治療前BUN、Scr、eGFR水平無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），治療后BUN、Scr、eGFR水平與治療前比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表5。

3　討論

慢性腎小球腎炎的病變部位主要在脾腎兩臟，基本病機為脾腎虧虛，蛋白尿的生成與脾腎兩臟虛損密不可分。我們在繼承新安醫(yī)學(xué)理論基礎(chǔ)上不斷進行科學(xué)實踐，發(fā)現(xiàn)清朝新安醫(yī)學(xué)名醫(yī)程林刪定的《圣濟總錄纂要·卷十三·虛勞門》所載人參湯秉承新安醫(yī)學(xué)“立法重溫補，著眼在腎”的學(xué)術(shù)特點，在健脾益腎的同時，不忘固攝精微，與我們認(rèn)為慢性腎小球腎炎病機特點為脾腎虧虛、精微下注，治療重在健脾益腎、固攝精微的觀點一致。在此理論指導(dǎo)下，將人參湯制成參地顆粒，并成功應(yīng)用于臨床治療慢性腎小球腎炎脾腎虧虛證患者，取得良好的臨床療效［7-9］。參地顆粒以人參為君藥，大補元氣、固攝精微；臣藥為茯苓、熟地黃，健脾益腎；五味子、桑螵蛸為佐藥，固攝精微；川芎亦為佐藥活血化瘀。諸藥合用，起到健脾益腎、固攝精微的功效。

表5　兩組患者治療前后BUN、Scr、eGFR水平比較（±s）Tab.5 LeveIs of BUN，Scr，and eGFR in two groups before and after treatment（±s）

表5　兩組患者治療前后BUN、Scr、eGFR水平比較（±s）Tab.5 LeveIs of BUN，Scr，and eGFR in two groups before and after treatment（±s）

注：與同期對照組比較，△P＞0.05；與本組治療前比較，△P＞0.05

組別例數(shù)BUN/（mmo1·mL-1）治療前治療后Scr/（μmo1·L-1）治療前治療后eGFR（mL·min-1）治療前治療后對照組31 5.51±0.98 5.12±1.08 82.63±12.56 80.07±11.72 78.32±6.82 76.45±7.51治療組33 5.09±1.84△4.83±1.03△83.52±10.59△82.86±10.71△76.84±6.51△77.49±6.42△

MMPs和TIMPs的調(diào)節(jié)對維持腎小球細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）生成和降解的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要［3］。MMP-9是明膠酶類中的一種，可以降解多種基質(zhì)成分，屬于MMPs家族中重要成員之一。明膠酶是迄今為止發(fā)現(xiàn)在腎臟中水解活性最強的基質(zhì)金屬蛋白酶，它直接參與腎臟發(fā)育、細(xì)胞浸潤、腎小球硬化和間質(zhì)纖維化等多種病理過程［10-11］。TIMP-1作為TIMP家族中的一員，可以抑制MMP-9活性，在ECM的沉積降解平衡中起關(guān)鍵作用。TIMP-1通過抑制ECM的降解過程導(dǎo)致ECM積聚，在許多腎臟纖維化疾病中其表達顯著增高，因此可以認(rèn)為TIMP-1是參與腎小球硬化及間質(zhì)纖維化的主要降解酶［12］。多種腎小球腎炎模型及臨床研究發(fā)現(xiàn)，腎組織TIMP-1比正常對照組升高，提示TIMP-1增多參與了ECM成分的積聚［13］。有研究表明［13-14］TIMP-1在腎衰竭組、IgA腎病Lee分級重度病理改變組及中度病理改變組血清中水平較正常組明顯增高，且隨病變加重其水平呈遞增趨勢，提示隨著系膜基質(zhì)及系膜細(xì)胞的增多、疾病活動程度的加重，TIMP-1在血清中的水平相應(yīng)增加。MMPs與TIMPs之間平衡失調(diào)，如MMP-9/TIMP-1比值降低，提示降解ECM能力減弱，將導(dǎo)致ECM增殖和腎小球硬化［15-16］。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，慢性腎小球腎炎脾腎虧虛證患者血清MMP-9、TIMP-1水平顯著升高，MMP-9/ TIMP-1比值顯著降低，提示ECM降解能力下降、合成能力增加。參地顆?？捎行Ц纳破⒛I虧虛證患者臨床癥狀，減少尿蛋白定量，其機理可能與顯著提升患者血清MMP-9水平，降低血清TIMP-1水平，從而顯著升高MMP-9/TIMP-1比值，促進ECM降解，降低腎臟ECM水平有關(guān)。

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Effect of Shendi Granu Ies on MMP-9/TIMP-1 in patientsw ith chronic gIomeru-Ionephritis of sp Ieen-kidney deficiency pattern

WANG Yi-ping， TANG Jin-nang， WANG Dong， MAO Yan-pin， JIN Hua， WAN Li-yuan
（The First Hospital Affiliated to Anhui University of TCM，Hefei230031，China）

chronic g1omeru1onephritis；sp1een-kidney deficiency pattern；matrixmeta11oproteinase-9（MMP-9）；tissue inhibitor ofmeta11oproteinase-1（TIMP-1）；Shendi Granu1es

R287

A

1001-1528（2015）01-0054-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.01.011

2014-01-12

安徽省高等學(xué)校省級自然科學(xué)研究項目（KJ2010A217）

王億平（1963—），男，教授，主任醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合治療腎臟病的研究。Te1：（0551）62850072，E-mai1：Wypwyp54@a1iyun.com